7,100 matches
-
se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. 2.2. Tampon IF-Tween Acest tampon este utilizat pentru spălarea lamelor. Se adaugă 0,1 % Tween 20 la tamponul IF. 2.3. Glicerol tamponat fosfatic, pH 7,6 Acest tampon este utilizat ca fluid de suport la ferestrele lamei IF pentru mărirea fluorescenței. Na2HPO4.·12H2O 3,2 g NaH2PO4·2H2O 0,15 g Glicerol 50 ml Apă distilată 100 ml În comerț sunt disponibile soluții suport antidecolorare, de exemplu, Vectashield
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
lamei IF pentru mărirea fluorescenței. Na2HPO4.·12H2O 3,2 g NaH2PO4·2H2O 0,15 g Glicerol 50 ml Apă distilată 100 ml În comerț sunt disponibile soluții suport antidecolorare, de exemplu, Vectashield(r) (Vector Laboratories) sau Citifluor(r) (Leica). 3. Tampoane pentru testul ELISA indirect 3.1. Tampon de acoperire dublu concentrat, pH 9,6 Na2CO3 6,36 g NaHCO3 11,72 g Apă distilată 1, 00 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
3,2 g NaH2PO4·2H2O 0,15 g Glicerol 50 ml Apă distilată 100 ml În comerț sunt disponibile soluții suport antidecolorare, de exemplu, Vectashield(r) (Vector Laboratories) sau Citifluor(r) (Leica). 3. Tampoane pentru testul ELISA indirect 3.1. Tampon de acoperire dublu concentrat, pH 9,6 Na2CO3 6,36 g NaHCO3 11,72 g Apă distilată 1, 00 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Poate
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Poate fi adăugat sulfit de sodiu (0,2 %) ca antioxidant pentru a împiedica constituirea de compuși aromatici oxidați. 3.2. 10 × tampon de fosfat salin (PBS), pH 7,4 NaCl 80,0 g KH2PO4 2,0 g Na2HPO4·12H2O 29,0 g KCl 2,0 g Apă distilată 1,0 l 3.3. PBS-Tween 10 × PBS 100 ml 10 % Tween 20 5
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
NaCl 80,0 g KH2PO4 2,0 g Na2HPO4·12H2O 29,0 g KCl 2,0 g Apă distilată 1,0 l 3.3. PBS-Tween 10 × PBS 100 ml 10 % Tween 20 5 ml Apă distilată 895 ml 3.4. Tampon de blocare (anticorpi) (trebuie preparat proaspăt) 10 × PBS 10,0 ml Polivinilpirolidonă-44000 (PVP-44) 2,0 g 10 % Tween 20 0,5 ml Lapte praf 0,5 g Apă distilată până la 100 ml 3.5. Soluție de substrat de fosfatază alcalină
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
la pH 9,8 cu acid clorhidric (HCl) concentrat. Se adaugă apă distilată până la 1 litru. Se adaugă 0,2 g MgCl2. Se dizolvă două tablete de 5 mg de substrat de fosfatază (Sigma) la 15 ml de soluție. 4. Tampoane pentru testul DASI ELISA 4.1. Tampon de acoperire dublu concentrat, pH 9,6 Na2CO3 1,59 g NaHCO3 2,93 g Apă distilată 1 000 ml Se dizolvă ingredientele și se verifică pH-ul. 4.2. 10 × tampon de
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
HCl) concentrat. Se adaugă apă distilată până la 1 litru. Se adaugă 0,2 g MgCl2. Se dizolvă două tablete de 5 mg de substrat de fosfatază (Sigma) la 15 ml de soluție. 4. Tampoane pentru testul DASI ELISA 4.1. Tampon de acoperire dublu concentrat, pH 9,6 Na2CO3 1,59 g NaHCO3 2,93 g Apă distilată 1 000 ml Se dizolvă ingredientele și se verifică pH-ul. 4.2. 10 × tampon de fosfat salin (PBS), pH 7,2-7,4
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
4. Tampoane pentru testul DASI ELISA 4.1. Tampon de acoperire dublu concentrat, pH 9,6 Na2CO3 1,59 g NaHCO3 2,93 g Apă distilată 1 000 ml Se dizolvă ingredientele și se verifică pH-ul. 4.2. 10 × tampon de fosfat salin (PBS), pH 7,2-7,4 NaCl 80,0 g NaH2PO4·2H2O 4,0 g Na2HPO4·12H2O 27,0 g Apă distilată 1 000 ml 4.3. PBS-Tween 10 × PBS 50 ml 10 % Tween 20 5 ml Apă
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
7,2-7,4 NaCl 80,0 g NaH2PO4·2H2O 4,0 g Na2HPO4·12H2O 27,0 g Apă distilată 1 000 ml 4.3. PBS-Tween 10 × PBS 50 ml 10 % Tween 20 5 ml Apă distilată 950 ml 4.4. Tampon de substrat, pH 9,8 Dietanolamină 100 ml Apă distilată 900 ml Se amestecă și se ajustează la pH 9,8 cu acid clorhidric (HCl). Apendicele 5 Stabilirea gradului de contaminare în testele IF și FISH 1. Se calculează numărul
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
antisens Y-2 5΄-CCC ACT GCT GCC TCC CGT AGG AGT-3΄ Dimensiunea prevăzută a amplimerului matricei ADN de R. solanacearum = 288 bp 1.2. Amestecul reactiv pentru PCR Reactiv Cantitate per reacție Concentrație finală Apă ultrapură sterilă 17,65 μl Tampon PCR x 101 (15 mM MgCl2) 2,5 μl 1 x (1,5 mM MgCl2) Amestec dNTP (20 mM) 0,25 μl 0,2 mM Primer OLI-1 (20 μΜ) 1,25 μl 1 μΜ Primer Y-2 (20 μΜ) 1,25
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
antisens Ps-2 5΄-ggg gat ttc aca tcg gtc ttg ca-3΄ Dimensiunea prevăzută a amplimerului matricei ADN de R. solanacearum = 553 bp. 2.2. Amestecul reactiv pentru PCR Reactiv Cantitate per reacție Concentrație finală Apă ultrapură sterilă 16,025 μl Tampon PCR x 101 2,5 μl 1 x (1,5 mM MgCl2) BSA (fracțiune V) (10 %) 0,25 μl 0,1 % Amestec dNTP (20 mM) 0,125 μl 0,1 mM Primer Ps-1 (10 μΜ) 0,5 μl 0,2
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
5,0 μl Volum total 25,0 μl 1 Metodele au fost validate prin polimerază Taq de PerkinElmer (AmpliTaq) și Gibco BRL. Notă: Optimizată inițial pentru ciclorul termic MJ Research PTC 200 prin polimerază Taq Gibco. AmpliTaq de PerkinElmer și tamponul pot fi utilizate, de asemenea, la aceleași niveluri de concentrație. 2.3. Condițiile reacției PCR Se urmează procedura: 1 ciclu de: (i) 5 minute la 95 °C: denaturarea matricei ADN 35 cicluri de: (ii) 30 secunde la 95 °C: denaturarea
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
bp (în prezența primerului Rs) Dimensiunea prevăzută a amplimerului controlului intern al PCR de 18S ARNr = 310 bp (în prezența primerului Ns) 3.2. Amestecul reactiv pentru PCR Reactiv Cantitate per reacție Concentrație finală Apă ultrapură sterilă 12,625 μl Tampon PCR x 101 (1,5 mM MgCl2) 2,5 μl 1 x (1,5 mM MgCl2) BSA (fracțiune V) (10 %) 0,25 μl 0,1 % Amestec dNTP (20 mM) 0,125 μl 0,1 mM Primer Rs-1-F (10 μΜ) 2
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
amplimerului matricei ADN de R. solanacearum: cu Rs-1-F/Rs-1-R = 718 bp cu Rs-1-F/Rs-3-R = 716 bp. 4.2. Amestecul reactiv pentru PCR (a) PCR specific biovarului 1/2 Reactiv Cantitate per reacție Concentrație finală Apă ultrapură sterilă 12,925 μl Tampon PCR x 101 2,5 μl 1 x (1,5 mM MgCl2) BSA (fracțiune V) (10 %) 0,25 μl 0,1 % Amestec dNTP (20 mM) 0,125 μl 0,1 mM Primer Rs-1-F (10 μΜ) 2 μl 0,8 μΜ
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
5,0 μl Volum total 25,0 μl 1 Metodele au fost validate prin polimerază Taq PerkinElmer (AmpliTaq) și Gibco BRL. (b) PCR specific biovarului 3/4/5 Reactiv Cantitate per reacție Concentrație finală Apă ultrapură sterilă 14,925 μl Tampon PCR x 101 2,5 μl 1 x (1,5 mM MgCl2) BSA (fracțiune V) (10 %) 0,25 μl 0,1 % Amestec dNTP (20 mM) 0,125 μl 0,1 mM Primer Rs-1-F (10 μΜ) 1 μl 0,4 μΜ
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
la 65 °C cu enzima Bsm I sau un izoschizomer (de exemplu, Mva 1269 I) timp de 30 de minute. Produsele PCR amplificate de ADN de R. solanacearum utilizând primerii Rs-1-F și Rs-3-R nu au puncte de restricție. 5. Prepararea tamponului de încărcare 5.1. Albastru de bromfenol (soluție concentrată de 10 %) Albastru de bromfenol 5 g Apă distilată (bidest) 50 ml 5.2. Tampon de încărcare Glicerol (86 %) 3,5 ml Albastru de bromfenol (5.1) 300 μl Apă distilată
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
ADN de R. solanacearum utilizând primerii Rs-1-F și Rs-3-R nu au puncte de restricție. 5. Prepararea tamponului de încărcare 5.1. Albastru de bromfenol (soluție concentrată de 10 %) Albastru de bromfenol 5 g Apă distilată (bidest) 50 ml 5.2. Tampon de încărcare Glicerol (86 %) 3,5 ml Albastru de bromfenol (5.1) 300 μl Apă distilată (bidest) 6,2 ml 6. Tampon triacetat EDTA (TAE) 10 x, pH 8,0 Tampon TRIS 48,40 g Acid acetic glacial 11,42
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de bromfenol (soluție concentrată de 10 %) Albastru de bromfenol 5 g Apă distilată (bidest) 50 ml 5.2. Tampon de încărcare Glicerol (86 %) 3,5 ml Albastru de bromfenol (5.1) 300 μl Apă distilată (bidest) 6,2 ml 6. Tampon triacetat EDTA (TAE) 10 x, pH 8,0 Tampon TRIS 48,40 g Acid acetic glacial 11,42 ml EDTA (sare disodică) 3,72 g Apă distilată 1,00 l Înainte de utilizare se diluează până la 1 x. De asemenea, este
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
5 g Apă distilată (bidest) 50 ml 5.2. Tampon de încărcare Glicerol (86 %) 3,5 ml Albastru de bromfenol (5.1) 300 μl Apă distilată (bidest) 6,2 ml 6. Tampon triacetat EDTA (TAE) 10 x, pH 8,0 Tampon TRIS 48,40 g Acid acetic glacial 11,42 ml EDTA (sare disodică) 3,72 g Apă distilată 1,00 l Înainte de utilizare se diluează până la 1 x. De asemenea, este disponibil în comerț (de exemplu, Invitrogen sau echivalent). Apendicele
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
C și se adaugă 0,4 g de paraformaldehidă. Paraformaldehida se dizolvă după adăugarea a cinci picături de 1N NaOH și amestecarea cu un agitator magnetic. (ii) Se ajustează pH-ul la 7,0 prin adăugarea a 1 ml de tampon fosfat 0,1 M (PB; pH 7,0) și cinci picături de 1 N HCl. Se verifică pH-ul cu benzi indicatoare și se ajustează, atunci când este necesar, cu HCl sau NaOH. [ATENȚIE! NU SE FOLOSEȘTE PH-METRUL ÎN SOLUȚII CARE
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
0 360,0 540,0 720,0 900,0 Notă: Toate soluțiile care conțin oligosonde sensibile la lumină se păstrează în întuneric, la - 20 °C. Se protejează de lumina directă a soarelui sau de lumina electrică directă în timpul utilizării. 5. Tampon M fosfat 0,1 M, pH 7,0 Na2HPO4 8,52 g KH2PO4 5,44 g Apă distilată 1,00 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Oran, Iruya și Santa Victoria) A 1 și 2 Chaco, Formosa (cu exceptia teritoriului Ramón Lista), Salța (cu exceptia departamentelor General José de San Martín, Rivadavia, Orán, Iruya și Santa Victoria), Jujuy A 1 și 2 Chaco, Formosa, Salța, Jujuy, cu excepția zonei tampon de 25 km de la frontiera cu Bolivia și Paraguay care se întinde de la districtul Santa Cătălina din provincia Jujuy, până la districtul Laishi din provincia Formosa A 1 și 2 Zona tampon de 25 km de la frontiera cu Bolivia și Paraguay
32006D0259-ro () [Corola-website/Law/294765_a_296094]
-
1 și 2 Chaco, Formosa, Salța, Jujuy, cu excepția zonei tampon de 25 km de la frontiera cu Bolivia și Paraguay care se întinde de la districtul Santa Cătălina din provincia Jujuy, până la districtul Laishi din provincia Formosa A 1 și 2 Zona tampon de 25 km de la frontiera cu Bolivia și Paraguay care se întinde de la districtul Santa Cătălina din provincia Jujuy, până la districtul Laishi din provincia Formosa O parte a provinciei Corrientes: departamentele Berón de Astrada, Capital, Empedrado, General Paz, Itati, Mbucuruyá
32006D0259-ro () [Corola-website/Law/294765_a_296094]
-
Victoria) BOV A 1 și 2 AR-7 Chaco, Formosa (cu exceptia teritoriului Ramón Lista), Salța (cu exceptia departamentelor General José de San Martín, Rivadavia, Orán, Iruya și Santa Victoria), Jujuy BOV A 1 și 2 AR-8 Chaco, Formosa, Salța, Jujuy, cu excepția zonei tampon de 25 de km de la frontiera cu Bolivia și Paraguay, care se întinde din districtul Santa Cătălina din provincia Jujuy până în districtul Laishi din privincia Formosa BOV A 1 și 2 AR-9 Zona-tampon de 25 de km de la frontiera cu
32006D0360-ro () [Corola-website/Law/294799_a_296128]
-
organismului, reunind toate plantele care prezintă simptome cauzate de organism și, după caz, toate plantele aparținând aceluiași lot în momentul plantării; (b) o zonă focală la o distanță de cel puțin 5 km de zona contaminată și (c) o zonă tampon la o distanță de cel puțin 10 km de zona focală. În cazul în care mai multe zone tampon se suprapun sau sunt din punct de vedere geografic apropiate unele de altele, este necesar să se delimiteze o zonă mai
32006D0464-ro () [Corola-website/Law/294847_a_296176]