80 matches
-
MBTHC (3-metil-2-benzo-tiazolină hidrazonă clorhidrat) + 5 f2æl H(2)0(2)). Dezvoltarea culorii este oprită prin adăugarea a 50 f2æl H(2)SO(4) 3N după aproximativ 5-10 minute (înainte ca testul negativ de control să înceapă să se coloreze). Alți cromogeni, ca ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic]), TMB (tetrametil benzidină), sau OFD (orto-fenildiamină) pot fi de asemenea utilizate. 2.1.4.2. Plăcile se citesc la 600 nm (sau 620 nm). 2.2. Interpretarea rezultatelor 2.2.1. Valoarea finală
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220360_a_221689]
-
se amestecă ușor pentru a asigura omogenizarea. Se incubează timp de 30 de minute la 37°C. 3.1.4. Se spală plăcile de cinci ori cu SSFTT și se usucă așa cum a fost descris mai sus. 3.1.5. Cromogen/ Substrat Se adaugă câte 100 f2æl/godeu de soluție de cromogen/ substrat (1 ml ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic])5 mg/ml + 9 ml de soluție tampon de substrat (soluție tampon de fosfat-citrat 0,1 M cu pH de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220360_a_221689]
-
30 de minute la 37°C. 3.1.4. Se spală plăcile de cinci ori cu SSFTT și se usucă așa cum a fost descris mai sus. 3.1.5. Cromogen/ Substrat Se adaugă câte 100 f2æl/godeu de soluție de cromogen/ substrat (1 ml ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic])5 mg/ml + 9 ml de soluție tampon de substrat (soluție tampon de fosfat-citrat 0,1 M cu pH de 4, care conține H(2)O(2) 0,03 %] și se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220360_a_221689]
-
cu tampon de blocare înainte de utilizare, îndreptat împotriva polipeptidei p7 specifice de grup. 5. Conjugatul: globulină anti-șoarece de iepure (absorbită și eluată) conjugată cu peroxid de hrean și păstrată la întuneric la o temperatură de 4°C. 6. Substratul și cromogenul: 0,2 g diamină de ortofenilenă (OPD) dizolvată într-o soluție tampon constând din 2,553 g acid citric și 4,574 g hidrogen ortofosfat bisodic ridicat la 500 ml cu apă distilată, divizată în 25 ml alicoți și păstrată
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
PBS. 7. Adăugați 50 μl globulină de iepure anti-șoarece la peroxidaza de hrean, diluată la o concentrație pre-titrată optimală, în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 8. Incubați o oră la 37șC pe un agitator orbital. 9. Adăugați substrat și cromogen după descrierea anterioară. Opriți reacția după zece minute prin adăugarea a 1 M acid sulfuric (50 μl/godeu). La testul competitiv, anticorpul monoclonal trebuie să fie în exces, pentru aceasta fiind aleasă o diluție a antigenului care se încadrează în
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
ser de iepure anticobai conjugat cu o enzimă, cum ar fi peroxidaza de hrean. Se realizează spălarea intensivă între fiecare etapă, pentru a se îndepărta reagentii nelegați. O reacție pozitivă este indicată dacă există o reacție de culoare la adăugarea cromogenului și a substratului. Reacțiile intens pozitive pot fi evidențiate cu ochiul liber, dar rezultate pot să fie citite, de asemenea, spectrofotometric, caz în care o citire a absorbantei de 0,1 deasupra limitei de fond indică o reacție pozitivă. 2
EUR-Lex () [Corola-website/Law/146332_a_147661]
-
folosindu-se anticorpi monoclonali, apoi probele de ser sunt incubate în diluție corespunzătoare, urmată de adăugarea anticorpului monoclonal conjugat cu peroxidaza. Ulterior inhibiția legăturii anticorpului monoclonal cu antigenul bolii veziculoase a porcului este măsurată prin intermediul unui substrat și al unui cromogen. 2. Un test ELISA indirect de blocare, care folosește anticorpi monoclonali izotipi specifici pentru a se detecta IgG sau IgM specifică porcului contra virusului bolii veziculoase a porcului, este util pentru evaluarea timpului de la infecția porcilor sau de la contaminarea spațiilor
EUR-Lex () [Corola-website/Law/146332_a_147661]
-
antigenului. Dacă proba de ser conține anticorpi pentru virusul bolii veziculoase a porcului, aceștia sunt detectați folosindu-se o IgG antiporc sau o IgM antiporc monoclonal conjugat cu peroxidaza. Ulterior această legătură este măsurată prin intermediul unui substrat și al unui cromogen. Testul ELISA izotip specific poate fi util, de asemenea, pentru deosebirea reactantului unic de adevărații porci pozitivi, așa cum prevede lit. C. C. Aplicarea testelor serologice și evaluarea rezultatelor 1. Testul de VN și testul ELISA sunt teste serologice recomandate. Cap. X
EUR-Lex () [Corola-website/Law/146332_a_147661]
-
50 cu tampon de blocare înainte de folosire, dirijat contra polipeptidei p7 specifică grupului; 5. conjugat: globulina de iepure antisoarece (adsorbit și diluat), conjugata cu peroxidaza din hrean și păstrată la loc întunecos la temperatura de 4°C; 6. substrat și cromogen: 0,2 g de ortofenil diamina (OPD) dizolvat într-un tampon de 2,553 g acid citric și 4,574 g disodiu hidrogen ortofosfat dizolvat în 500 ml de apă distilata, divizată în alicote de 25 ml și păstrate la
EUR-Lex () [Corola-website/Law/144269_a_145598]
-
antisoarece conjugata cu peroxidaza din hrean, diluata la o concentrație optimă pretitrata, în fiecare godeu al plăcii de microtitru. 8. Se incubează timp de o oră la temperatura de 37°C într-un agitator orbital. 9. Se adaugă substrat și cromogen că mai sus. Se împiedică reacția după 10 minute prin adăugarea unui mol de acid sulfuric 50 æl/godeu. 1.11. În încercarea concurență anticorpul monoclonal trebuie să fie în exces, de aceea se alege o soluție de antigen care
EUR-Lex () [Corola-website/Law/144269_a_145598]
-
marcat cu peroxidază, care se leagă de antigenul E^(rns) care formează un complex cu anticorpii cu care a fost căptușită suprafața microplăcii. Conjugatul care nu s-a legat se îndepărtează prin spălare și se adaugă un substrat ce conține cromogen. Intensitatea culorii care se dezvoltă, este invers proporțională cu cantitatea de anticorpi specifici pentru E^(rns) prezenți în probă. Dacă proba nu conține anticorpi (probă negativă) mare parte din cantitatea definită de antigen E^(rns) adăugat se poate lega de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/169685_a_171014]
-
un tampon de blocare. 1.1.5.4. Se incubează timp de 1 oră la 37șC într-un agitator rotativ. 1.1.5.5. Se spală plăcile de trei ori și se usucă în modul menționat anterior. 1.1.6. Cromogen Se prepară soluția cromogen (OFD = ortofenildiamină) conform instrucțiunilor fabricantului (0,4 mg/ml în apă distilată sterilă) chiar înainte de utilizare. Se adaugă un substrat (peroxid de hidrogen = H2O2), pentru obținerea unei concentrații finale de 0,05% (v/v) (1/2000
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
1.1.5.4. Se incubează timp de 1 oră la 37șC într-un agitator rotativ. 1.1.5.5. Se spală plăcile de trei ori și se usucă în modul menționat anterior. 1.1.6. Cromogen Se prepară soluția cromogen (OFD = ortofenildiamină) conform instrucțiunilor fabricantului (0,4 mg/ml în apă distilată sterilă) chiar înainte de utilizare. Se adaugă un substrat (peroxid de hidrogen = H2O2), pentru obținerea unei concentrații finale de 0,05% (v/v) (1/2000 dintr-o soluție la
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
într-o SSTF + 5% lapte degresat + 0,05% Tween-20 cu pH 7,2. Se incubează timp de 1 oră la 37°C. 2.1.3.2. Se clătesc plăcile conform descrierii din etapa 2.1.1.2. 2.1.4. Cromogen/substrat 2.1.4.1. Se adaugă 200 µl/godeu de soluție de cromogen/substrat [10 ml de 80,6 mM de DMAB (dimetilaminobenzaldehidă) + 10 ml de 1,56 mM de MBTH (3-metil-2-benzotiazolină de hidroclorură de hidrazon) + 5 µl de
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
incubează timp de 1 oră la 37°C. 2.1.3.2. Se clătesc plăcile conform descrierii din etapa 2.1.1.2. 2.1.4. Cromogen/substrat 2.1.4.1. Se adaugă 200 µl/godeu de soluție de cromogen/substrat [10 ml de 80,6 mM de DMAB (dimetilaminobenzaldehidă) + 10 ml de 1,56 mM de MBTH (3-metil-2-benzotiazolină de hidroclorură de hidrazon) + 5 µl de H2O2]. Se blochează după aproximativ 5-10 minute (înainte să înceapă să se coloreze controlului
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
de MBTH (3-metil-2-benzotiazolină de hidroclorură de hidrazon) + 5 µl de H2O2]. Se blochează după aproximativ 5-10 minute (înainte să înceapă să se coloreze controlului negativ) reacția colorimetrică prin adăugarea de 50 µl de H2SO4 3N. Se pot utiliza și alți cromogeni, cum sunt ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic), TMP (tetrametil de benzidină) sau OFD (ortofenildiamină). 2.1.4.2. Se citește placa la 600 nm (sau 620 nm). 2.2. Interpretarea rezultatelor 2.2.1. Se calculează valoarea pragului adăugând
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
godeu și se amestecă ușor pentru a garanta omogeneitatea. Se incubează timp de 30 de minute la 37șC. 3.1.4. Se spală plăcile de 5 ori cu SSTF și se usucă pe sugativă conform descrierii anterioare. 3.1.5. Cromogen/substrat Se adaugă în fiecare godeu 100 µl din soluția următoare de cromogen/substrat: 1 ml de ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic) cu 5 mg/ml + 9 ml de tampon de substrat (0,1 M de tampon de fosfat-citrat
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
30 de minute la 37șC. 3.1.4. Se spală plăcile de 5 ori cu SSTF și se usucă pe sugativă conform descrierii anterioare. 3.1.5. Cromogen/substrat Se adaugă în fiecare godeu 100 µl din soluția următoare de cromogen/substrat: 1 ml de ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic) cu 5 mg/ml + 9 ml de tampon de substrat (0,1 M de tampon de fosfat-citrat cu pH 4 cu conținut de 0,03% de H2O2), apoi se incubează
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
cu biotina sau ale avidinei marcate enzimatic se leagă de biotina cuplată cu anticorpul. Secvența aplicării reactivilor este următoarea: anticorp primar, anticorp secundar biotinilat, complex pre-format avidină biotină enzimă (ABC) sau avidina marcată enzimatic (LAB), solutia substrat. Enzime, substraturi si cromogeni Metodele de colorare imunoenzimatică se bazează pe reacțiile dintre enzime și substraturile lor, care colorează cromogeni incolori în produși finali colorați. Din punct de vedere al funcțiilor lor, enzimele pot fi clasificate în enzime hidrolitice (esteraze, proteaze), fosforilaze, enzime oxido-re-ducătoare
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
reactivilor este următoarea: anticorp primar, anticorp secundar biotinilat, complex pre-format avidină biotină enzimă (ABC) sau avidina marcată enzimatic (LAB), solutia substrat. Enzime, substraturi si cromogeni Metodele de colorare imunoenzimatică se bazează pe reacțiile dintre enzime și substraturile lor, care colorează cromogeni incolori în produși finali colorați. Din punct de vedere al funcțiilor lor, enzimele pot fi clasificate în enzime hidrolitice (esteraze, proteaze), fosforilaze, enzime oxido-re-ducătoare (dehidrogenaze, oxidaze, peroxidaze), enzime de transfer, decarboxilaze și altele. Unele dintre ele pot acționa strict specific
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
imunohistochimie: greutate moleculară redusă; obținere simplă în formă pură, minimum de contaminare; este stabilă și nu-și modifică proprietățile în timpul obținerii, păstrării și utilizării; în probele tisulare este prezentă în cantități reduse, ușor de blocat Există mai multe tipuri de cromogeni care, în reacție cu peroxidaza, formează produși finali colorați, ce precipită la nivelul situsului antigenic. Menționată anterior, activitatea peroxidazei în prezența unui donor de electroni rezultă în formarea inițială a unui complex enzimă -substrat și apoi în oxidarea donorului. În
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
situsului antigenic. Menționată anterior, activitatea peroxidazei în prezența unui donor de electroni rezultă în formarea inițială a unui complex enzimă -substrat și apoi în oxidarea donorului. În tehnicile imunohistochimice, produșii finali de reacție trebuie să precipite la locul formării lor. Cromogenii care formează produși finali solubili, nu pot fi folosiți în aceste aplicații. Pentru peroxidază, cei mai folosiți cromogeni sunt: tetra clorhidratul de 3,3’-diaminobenzidină (DAB), 3 amino-9-etilcarba-zol (AEC), 4-cloro-1-naftol, diclorhidrat de p-fenilendiamină (pirocate-chol sau reactivul Hanker-Yates). Soluția substrat DAB
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
complex enzimă -substrat și apoi în oxidarea donorului. În tehnicile imunohistochimice, produșii finali de reacție trebuie să precipite la locul formării lor. Cromogenii care formează produși finali solubili, nu pot fi folosiți în aceste aplicații. Pentru peroxidază, cei mai folosiți cromogeni sunt: tetra clorhidratul de 3,3’-diaminobenzidină (DAB), 3 amino-9-etilcarba-zol (AEC), 4-cloro-1-naftol, diclorhidrat de p-fenilendiamină (pirocate-chol sau reactivul Hanker-Yates). Soluția substrat DAB se prepară înaintea utilizării, prin dizolvarea unei tablete DAB în 10 ml tampon PBS, pH-7. 4 și activarea
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
cu biotina sau ale avidinei marcate enzimatic se leagă de biotina cuplată cu anticorpul. Secvența aplicării reactivilor este următoarea: anticorp primar, anticorp secundar biotinilat, complex pre-format avidină biotină enzimă (ABC) sau avidina marcată enzimatic (LAB), solutia substrat. Enzime, substraturi si cromogeni Metodele de colorare imunoenzimatică se bazează pe reacțiile dintre enzime și substraturile lor, care colorează cromogeni incolori în produși finali colorați. Din punct de vedere al funcțiilor lor, enzimele pot fi clasificate în enzime hidrolitice (esteraze, proteaze), fosforilaze, enzime oxido-re-ducătoare
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
reactivilor este următoarea: anticorp primar, anticorp secundar biotinilat, complex pre-format avidină biotină enzimă (ABC) sau avidina marcată enzimatic (LAB), solutia substrat. Enzime, substraturi si cromogeni Metodele de colorare imunoenzimatică se bazează pe reacțiile dintre enzime și substraturile lor, care colorează cromogeni incolori în produși finali colorați. Din punct de vedere al funcțiilor lor, enzimele pot fi clasificate în enzime hidrolitice (esteraze, proteaze), fosforilaze, enzime oxido-re-ducătoare (dehidrogenaze, oxidaze, peroxidaze), enzime de transfer, decarboxilaze și altele. Unele dintre ele pot acționa strict specific
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]