161 matches
-
acestora cu Tris-glicină pH 8,3 în raport de ½, în funcție de turgescența probei; centrifugarea la 3000 rotații/minut, timp de 20 minute la temperatura de 4°C; obținerea supernatantelor, decantarea și păstrarea până la electroforeza efectivă la 4°C; separarea în câmp electroforetic a izoenzimelor prin disc-electroforeză în tuburi verticale sau plăci conținând gel de poliacrilamidă 5% și tampon de electrod 5 mM Tris - 38mMglicină, pH 8,3; prepararea gelurile înaintea electroforezei efective; durata procesului de electroforeză este de 90 minute, la 4
A M P E L O G R A F I E M E T O D E ? I M E T O D O L O G I I D E D E S C R I E R E ? I R E C U N O A ? T E R E A S O I U R I L O R D E V I ? ? D E V I E by Doina DAMIAN, Liliana ROTARU, Ancu?a NECHITA, Costic? SAVIN () [Corola-publishinghouse/Science/83089_a_84414]
-
termenul de electroforeză. Pot separa compuși ionici, complecși cationici și anionici, ionii proveniți din electroliți slabi (acizi carboxilici, baze organice, molecule organice amfotere). Aminoacizii în funcție de pH pot avea sarcină pozitivă sau negativă. La punctul izoelectric sau izoionic nu migrează, activitatea electroforetică fiind nulă. Migrarea particulelor încărcate, în câmp electric, se face cu o viteză caracteristică fiecărei specii. Viteza de deplasare poartă numele de “mobilitate electroforetică” (μ). Mobilitatea μ a unei particule reprezintă distanța d (în metri) parcursă de o particulă coloidală
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
în funcție de pH pot avea sarcină pozitivă sau negativă. La punctul izoelectric sau izoionic nu migrează, activitatea electroforetică fiind nulă. Migrarea particulelor încărcate, în câmp electric, se face cu o viteză caracteristică fiecărei specii. Viteza de deplasare poartă numele de “mobilitate electroforetică” (μ). Mobilitatea μ a unei particule reprezintă distanța d (în metri) parcursă de o particulă coloidală încărcată electric în timpul t de o secundă sub acțiunea unui câmp electric al cărui gradient de potențial E este de un volt/metru. Se
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
m/sec, iar în câmp electric în m2/volt/sec (m2.V-1.s-1). Gradientul de potențial este determinat de intensitatea i a curentului (în amperi) raportată la conductibilitatea specifică λ a soluției și aria secțiunii A. Clasificarea metodelor electroforetice După modul cum se desfășoară electromigrarea metodele electroforetice se clasifică în: - electroforeză în mediu liber în coloană de lichid sau electroforeză cu front mobil (electroforeză frontală, electroforeză de frontieră); - electroforeză pe medii stabilizante sau electroforeză zonală. 1. Electroforeza în mediu
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
volt/sec (m2.V-1.s-1). Gradientul de potențial este determinat de intensitatea i a curentului (în amperi) raportată la conductibilitatea specifică λ a soluției și aria secțiunii A. Clasificarea metodelor electroforetice După modul cum se desfășoară electromigrarea metodele electroforetice se clasifică în: - electroforeză în mediu liber în coloană de lichid sau electroforeză cu front mobil (electroforeză frontală, electroforeză de frontieră); - electroforeză pe medii stabilizante sau electroforeză zonală. 1. Electroforeza în mediu liber Migrarea electroforetică se realizează în coloană de
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
cum se desfășoară electromigrarea metodele electroforetice se clasifică în: - electroforeză în mediu liber în coloană de lichid sau electroforeză cu front mobil (electroforeză frontală, electroforeză de frontieră); - electroforeză pe medii stabilizante sau electroforeză zonală. 1. Electroforeza în mediu liber Migrarea electroforetică se realizează în coloană de lichid într-o celulă formată dintr-un tub în formă de U umplut cu soluție tampon de electrolit, cu o secțiune pătrată, construit din sticlă transparentă pentru adaptarea unui spectrometru. Cei doi electrozi se leagă
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
bromfenol, amido black 10B, azocarmin, tiazine Red R, ponceau 2R, Sudan Black B, ninhidrină. Factorii care influențează electroforeza 1. Natura moleculelor separate - mărimea particulelor; - natura și sarcina speciilor. 2. Aparatura - suportul (suprafețele solide se încarcă negativ) 3. Curentul electric Deplasarea electroforetică este proporțională cu mobilitatea, câmpul electric și cu timpul de trecere al curentului electric; 4. pH-ul Nu influențează electroforeza acizilor, bazelor tari și a sărurilor Compușii organici de tipul acizilor carboxilici, baze aminate, substanțe amfotere migrează numai dacă pH
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
chelatizanți sau sechestranți; - compuși ionici ce conțin cromofori, fluorofori. Migrarea particulelor: Tehnicile electroforezei capilare 1. Electroforeza capilară zonală Este o electroforeză în soluție liberă și se realizează într-o capilară umplută cu soluție de electrolit. Separarea se face în funcție de mobilitatea electroforetică a analiților. 2. Electroforeza capilară micelară (MECE) Este o variantă a “Micellar Electrokinetic Capilary Chromatograpy” (MECC). Se mai numește cromatografie capilară electrocinetică. În soluția de electrolit se adaugă agent tensioactiv. Se formează agregate sferice purtătoare de sarcini electrice. Micelele sunt
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
purtătoare de sarcini electrice. Micelele sunt formate din lanțuri, cu extremitățile hidrofobe spre interior, iar extremitățile hidrofile încărcate electric orientate spre exterior. Micelele se dezagregă și se refac continuu. Ele înglobează analiți hidrofobi pe care îi antrenează în migrarea lor electroforetică. 3. Electroforeza capilară pe gel (GCE) - Gelul de agaroză 0,5 - 2% Unitate de agaroză - Gelul de poliacrilamidă 3,5 - 20% Atenție la faptul că poliacrilamida este un neurotoxic. Pentru separarea electroforetică a proteinelor se folosește așa numita electroforeză pe
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
hidrofobi pe care îi antrenează în migrarea lor electroforetică. 3. Electroforeza capilară pe gel (GCE) - Gelul de agaroză 0,5 - 2% Unitate de agaroză - Gelul de poliacrilamidă 3,5 - 20% Atenție la faptul că poliacrilamida este un neurotoxic. Pentru separarea electroforetică a proteinelor se folosește așa numita electroforeză pe gel de poliamidă cu dodecilsulfatul de sodiu, SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electrophoresis) SDS este un agent tensioactiv anionic care în amestec cu proteinele denaturează structura secundară și terțiară a acestora
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
mai ușor prin porii gelului. 4. Electroforeza capilară în contracurent Se introduce în soluția tampon folosită, a unor aditivi numiți “selectori chiralici”: ciclodextrine, eteri coroană, proteine, hidrați de carbon, antibiotice macrociclice (vancomicina, rifampicine), complecși metalici enantioselectivi. APLICAȚIILE ELECTROFOREZEI Determinarea mobilității electroforetice Mobilitatea μ a unei particule reprezintă distanța d (în metri) parcursă de o particulă coloidală încărcată electric în timpul t, de o secundă, sub acțiunea unui câmp electric al cărui gradient de potențial E este de un volt/metru. Gradientul de
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
sub acțiunea unui câmp electric al cărui gradient de potențial E este de un volt/metru. Gradientul de potențial este determinat de intensitatea i a curentului (în amperi), raportată la conductibilitatea specifică γ a soluției și aria secțiunii A. Separarea electroforetică a chiralilor Capilar electroforeza este o variantă a electroforezei frontale, care se utilizează pentru separarea chiralilor. Izomerii D și L pot fi separați cu ajutorul ciclodextrinelor. În anumit caz, izomerul D formează un complex stabil cu ciclodextrina. Izomerul D se separă
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
de lucru prevede folosirea hârtiei de tip MN 862 Whatman nr. 1 sau Schleicher-Schüll 2043 b sub formă de benzi de 3 cm lățime. Benzile de hârtie se impregnează cu tampon barbital pH 8.6 și se introduc în camera electroforetică cu aproximativ 15 minute înainte de aplicarea soluțiilor. Se lucrează în paralel, probă și etalon. Determinarea se efectuează la tensiunea de 200 V timp de 5 ore. Benzile de hârtie se usucă la temperatura camerei apoi se imersează în reactivul de
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
temperatura camerei și se expun la vapori de amoniac concentrat. Proba de analizat se consideră corespunzătoare dacă prezintă o singură zonă colorată în albastru, iar migrarea s-a făcut cu aceeași viteză cu cea a etalonului. Determinarea cantitativă Fracțiunile separate electroforetic se pot evalua cantitativ prin două procedee: în mod direct, prin determinarea densității optice a spoturilor de pe suport cu ajutorul spectrometrelor ce pot măsura lumina transmisă (fotometrie prin transparență) sau lumina reflectată (fotometrie prin reflexie); în mod indirect, prin determinarea
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
o adâncitură se pune serul de analizat, iar într-un șanț central se introduce serul unui animal imunizat cu antigene. In prima etapă, în primul godeu se introduce serul bolnav, iar în al doilea serul etalon, apoi se face separarea electroforetică. Serul imunizat se pune în șanțul central, se lasă în repaus 24 de ore, timp în care se produce difuzia în geloză a proteinelor separate din serurile inițiale și proteinele serului imunizat. La contactul anticorpilor din serul imunizat cu proteinele
ANALIZA MEDICAMENTELOR. VOLUMUL 2 by MIHAI IOAN LAZ?R, DOINA LAZ?R, ANDREIA CORCIOV? () [Corola-publishinghouse/Science/83481_a_84806]
-
D, cartată în aceeași regiune 13q14, a permis descifrarea semnificației acestei regiuni cromozomale. Cele două alele ale genei esterazei D se disting ușor, deoarece fiecare codifică pentru o altă izozimă (izoenzimă) a esterazei D, cele două izozime putând fi separate electroforetic. Astfel, heterozigoția la locusul esterazei D oferă o genă marker lincată care poate fi urmărită în familiile cu retinoblastom ereditar (fig. 21.14). Studiile au dovedit linkage-ul strâns dintre esteraza D și dezvoltarea retinoblastomului, în familiile în care delețiile cromozomale
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
soluție acidă, aminoacizii sub formă de cationi vor migra spre catod (migrare catodică). Sub formă de amfiioni, aminoacizii nu vor migra într-un câmp electric, fiind atrași în mod egal spre cei doi poli. Aceste proprietăți stau la baza separării electroforetice a aminoacizilor,deci și a proteinelor, pe baza vitezelor diferite de migrare a acestora în câmpul electric. 4.1.4. Proprietăți chimice ale aminoacizilor Aminoacizii (aa) prezintă reacții chimice pentru grupările funcționale COOH și NH2, cât și reacții specifice pentru
Chimie biologică by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/701_a_1306]
-
netă a moleculei este 0. 4.3.6.2.Comportarea proteinelor într-un câmp electric Fiind încărcate pozitiv sau negativ, proteinele au proprietatea de a migra într-un câmp electric. Această proprietatea se numește electroforeză și stă la baza metodei electroforetice de separare a proteinelor dintr-un amestec pe baza vitezelor diferite de migrare a acestora în câmpul electric. Migrarea proteinelor spre cei 2 poli ai câmpului electric este în funcție de pH-ul soluției tampon care influențează mult gradul de ionizare. Într-
Chimie biologică by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/701_a_1306]
-
catalizează aceeași reacție enzimatică dar care diferă într-o anumită măsură, prin structura componenței proteice. Izoenzimele se deosebesc prin structura primară a catenelor polipeptidice, deci prin secvențializarea aminoacizilor și printr-o serie de proprietăți fizico-chimice: pH optim, mobilitatea în câmpul electroforetic, stabilitatea la căldură. Izoenzimele prezintă afinități diferite pentru același substrat și se comportă diferit față de efectorii alosterici. La enzimele cu structură cuaternară pot apărea izoenzime prin hibridizarea formelor intermediare. Izoenzimele prezintă importanța în reglarea unor metabolisme, în morfogeneză și în
Chimie biologică by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/701_a_1306]
-
soluție acidă, aminoacizii sub formă de cationi vor migra spre catod (migrare catodică). Sub formă de amfiioni, aminoacizii nu vor migra într un câmp electric, fiind atrași în mod egal spre cei doi poli. Aceste proprietăți stau la baza separării electroforetice a aminoacizilor,deci și a proteinelor, pe baza vitezelor diferite de migrare a acestora în câmpul electric. 4.1.4. Proprietăți chimice ale aminoacizilor Aminoacizii (aa) prezintă reacții chimice pentru grupările funcționale COOH și NH2, cât și reacții specifice pentru
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
netă a moleculei este 0. 4.3.6.2.Comportarea proteinelor într-un câmp electric Fiind încărcate pozitiv sau negativ, proteinele au proprietatea de a migra într-un câmp electric. Această proprietatea se numește electroforeză și stă la baza metodei electroforetice de separare a proteinelor dintr-un amestec pe baza vitezelor diferite de migrare a acestora în câmpul electric. Migrarea proteinelor spre cei 2 poli ai câmpului electric este în funcție de pH-ul soluției tampon care influențează mult gradul de ionizare. Într-
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
catalizează aceeași reacție enzimatică dar care diferă într-o anumită măsură, prin structura componenței proteice. Izoenzimele se deosebesc prin structura primară a catenelor polipeptidice, deci prin secvențializarea aminoacizilor și printr-o serie de proprietăți fizico-chimice: pH optim, mobilitatea în câmpul electroforetic, stabilitatea la căldură. Izoenzimele prezintă afinități diferite pentru același substrat și se comportă diferit față de efectorii alosterici. La enzimele cu structură cuaternară pot apărea izoenzime prin hibridizarea formelor intermediare. Izoenzimele prezintă importanța în reglarea unor metabolisme, în morfogeneză și în
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
încărcate cu sarcini pozitive sau negative, sub acțiunea câmpului electric, în gelul de poliacrilamidă. Tehnica, dezvoltată de Chrambach și Rodbard (1971), permite fracționarea și apoi caracterizarea receptorilor steroidici din citosol (de exemplu de uter de șobolan). Metoda permite: realizarea distribuției electroforetice a proteinelor care prezintă situsuri de legare pentru hormonul steroidic testat, evaluarea proteinelor "vinovate" de legarea nespecifică BN, aprecierea masei moleculare proteice, testarea influenței molibdatului asupra stabilității unității complexului proteină (receptoare) hormon steroidic de tip sexual [275]. Atât separarea în
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
poliacrilamidă: lungimea fibrelor și distribuția și forma porilor. Acestea pot controlate prin alegerea adecvată a concentrației de acrilamidă totală (T) si respectiv, a agentului de reticulare (cross linking agent) (C) aici N,N' metilenbisacrilamida. Fergusin (1964) a arătat că mobilitatea electroforetică relativă (Rf) este funcție liniară de T: log Rf = log Yc KrT unde: Kr = coeficient de retardare (este funcție primară de masa moleculară), log Yc = intersecția cu ordonata (este funcție primară de raportul sarcină netă/ suprafață), T este temperatura absolută
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
receptorii nelegați de hormon), studierea stabilității complexelor receptor-steroid, a relației dintre receptorul citoplasmatic (dacă acesta există într adevăr!) receptor nuclear sau a mecanismului de activare al receptorului. În cadrul Colectivului de Receptori Hormonali din Institutul Oncologic București s-a realizat separarea electroforetică a receptorilor, după ce aceștia au format complexe cu ligandul (estradiol) marcat radioactiv (3 H); după separare, identificarea fracțiunilor s-a realizat prin determinarea radioactivității . Erori posibile în determinările asupra receptorilor pentru estrogeni și progesteron Nu rareori, în determinările asupra ER
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]