556 matches
-
de Chemiluminiscenta pe bază de Microparticule) ● EMIT - Enzyme Multiplied Immunoassay Technique (Metodă Imunologiga Enzimatica Dublă) ● RAST - Radioallergosorbent (Test Radioimunologic prin legarea complexului pe suport insolubil) ● RIA - Radioimmunoassay (Metodă Imunologiga pe bază de Radioizotopi) ● IFA - Immunofluorescence (Test Imunologic pe bază de Imunofluorescența) ● ELFA cu detecție în fluorescenta -- Test imunoenzimatic cu emisie de fluorescenta ● TRACE - Emisie amplificata de europium ----------------------------- NOTĂ: test imunologic sau metodă imunologica se referă la o reacție cu formare de complex tip antigen-anticorp 5. Citologie Papanicolau 5 puncte. Este obligatoriu
EUR-Lex () [Corola-website/Law/235922_a_237251]
-
Test(e) de triere rapidă..............................................................13 3. Procedură de izolare..................................................................14 4. Test(e) de confirmare................................................................14 SECȚIUNEA III: Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof.........................................................................17 1. Pregătirea eșantionului pentru testare...................................................17 2. Test de imunofluorescență (IF)............................................................18 3. Test de imunoadsorbție cu anticorpi marcați enzimatic (ELISA)........20 4. Testul de reacție de polimerizare în lanț (PCR(tm))..........................20 5. Testul de placare selectivă ..............................................................22 6. Testul de probă biologică.....................................................................23 7. Teste de îmbogățire..............................................................................23
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
insuficient de sensibil sau de sigur pentru detectarea Ralstonia solanacearum dintr-un eșantion. Din acest motiv se recomandă mai mult de un test, iar aceste teste ar fi de preferat să se bazeze pe principii biologice diferite. 3 Test de imunofluorescență (IF) Testul IF este un test de triere bine cunoscut. Acesta reprezintă un avantaj față de alte teste care nu sunt încă complet dezvoltate sau validate. Testul este folosit pentru multe alte bacterii de carantină, de exemplu Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
din acesta (din care au fost luate eșantioanele) în ambalajul original etichetat, de câte ori este posibil, - partea rămasă din eșantioane, de câte ori este posibil, - orice rest de extras și material preparat suplimentar pentru testul sau testele de triere, de exemplu lamele de imunofluorescență, și - toată documentația relevantă, până la finalizarea respectivei metode. 2. În cazul confirmării organismului, ar trebui să se păstreze să și conserve în condiții corespunzătoare: - materialul prevăzut în alin. (1), și - un eșantion din tomata sau vânăta infectată inoculată cu extractul
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
al doilea test de depistare este pozitiv, suspiciunea este confirmată (apariție suspectată) și testele trebuie continuate în conformitate cu protocolul. În cazul în care al doilea test de depistare este negativ, proba este considerată necontaminată cu Cms. Reacția pozitivă la testul de imunofluorescență menționată la articolul 4 alineatul (2) este, așadar, definită ca o reacție pozitivă la testul de imunofluorescență confirmată de un al doilea test de depistare (PCR/FISH). Prezența confirmată, menționată la articolul 5 alineatul (1) din Directiva 93/85/CEE
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
protocolul. În cazul în care al doilea test de depistare este negativ, proba este considerată necontaminată cu Cms. Reacția pozitivă la testul de imunofluorescență menționată la articolul 4 alineatul (2) este, așadar, definită ca o reacție pozitivă la testul de imunofluorescență confirmată de un al doilea test de depistare (PCR/FISH). Prezența confirmată, menționată la articolul 5 alineatul (1) din Directiva 93/85/CEE, implică izolarea și identificarea unei culturi pure de C. m. ssp. sepedonicus cu confirmarea patogenicității. 1. PREZENTAREA
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
livrarea în termen de 24-48 de ore într-o ladă frigorifică. 3.1.7. Pentru a evita contaminarea, este necesar ca toți martorii pozitivi și toate eșantioanele de C. m. ssp. sepedonicus să fie tratate separat, atât pentru testele de imunofluorescență, cât și pentru toate celelalte teste. 3.2. Plante de cartofi Nota bene: Pentru a detecta populațiile recente de C. m. ssp. sepedonicus este recomandabil să se testeze probe compozite. Procedura poate fi aplicată cu ușurință pentru probele compozite care
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
și -24 ° C (săptămâni) sau între -68 și -86 °C (luni), după ce s-a introdus în ea în prealabil o cantitate de 10-25 % glicerol steril, în cazul în care va fi necesară efectuarea unui al doilea test. 4. TEST DE IMUNOFLUORESCENȚĂ Principiu Ținând seama de capacitatea sa recunoscută de a atinge pragurile cerute, se recomandă utilizarea testului de imunofluorescență ca principal test de depistare. În cazul în care testul de imunofluorescență este utilizat ca principal test de depistare și rezultatul său
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
prealabil o cantitate de 10-25 % glicerol steril, în cazul în care va fi necesară efectuarea unui al doilea test. 4. TEST DE IMUNOFLUORESCENȚĂ Principiu Ținând seama de capacitatea sa recunoscută de a atinge pragurile cerute, se recomandă utilizarea testului de imunofluorescență ca principal test de depistare. În cazul în care testul de imunofluorescență este utilizat ca principal test de depistare și rezultatul său este unul pozitiv, trebuie să se efectueze un test PCR sau FISH ca test secundar. În cazul în
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
fi necesară efectuarea unui al doilea test. 4. TEST DE IMUNOFLUORESCENȚĂ Principiu Ținând seama de capacitatea sa recunoscută de a atinge pragurile cerute, se recomandă utilizarea testului de imunofluorescență ca principal test de depistare. În cazul în care testul de imunofluorescență este utilizat ca principal test de depistare și rezultatul său este unul pozitiv, trebuie să se efectueze un test PCR sau FISH ca test secundar. În cazul în care testul de imunofluorescență este folosit ca test secundar, iar rezultatul său
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de depistare. În cazul în care testul de imunofluorescență este utilizat ca principal test de depistare și rezultatul său este unul pozitiv, trebuie să se efectueze un test PCR sau FISH ca test secundar. În cazul în care testul de imunofluorescență este folosit ca test secundar, iar rezultatul său este pozitiv, analiza trebuie completată cu teste suplimentare, în conformitate cu indicațiile din diagrama funcțională. Nota bene: Atunci când testul de imunofluorescență se utilizează ca test principal, se folosește întotdeauna un anticorp policlonal. Atunci când un
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
test PCR sau FISH ca test secundar. În cazul în care testul de imunofluorescență este folosit ca test secundar, iar rezultatul său este pozitiv, analiza trebuie completată cu teste suplimentare, în conformitate cu indicațiile din diagrama funcțională. Nota bene: Atunci când testul de imunofluorescență se utilizează ca test principal, se folosește întotdeauna un anticorp policlonal. Atunci când un test de imunofluorescență efectuat cu un anticorp policlonal are un rezultat pozitiv, un test suplimentar al probei cu anticorp monoclonal poate permite o specificitate mai mare, dar
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
ca test secundar, iar rezultatul său este pozitiv, analiza trebuie completată cu teste suplimentare, în conformitate cu indicațiile din diagrama funcțională. Nota bene: Atunci când testul de imunofluorescență se utilizează ca test principal, se folosește întotdeauna un anticorp policlonal. Atunci când un test de imunofluorescență efectuat cu un anticorp policlonal are un rezultat pozitiv, un test suplimentar al probei cu anticorp monoclonal poate permite o specificitate mai mare, dar, de asemenea, se poate dovedi mai puțin evident. Trebuie să se folosească anticorpii unei sușe de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
105 și 106 celule pe mililitru, a unei sușe omoloage de C. m. ssp. sepedonicus folosind un conjugat adecvat de izotiocianat de fluoresceină (FITC), în conformitate cu recomandările producătorului. Soluția brută de anticorpi policlonali sau monoclonali trebuie să prezinte un titru de imunofluorescență de cel puțin 1:2 000. În momentul efectuării testului, diluția/diluțiile de lucru ale anticorpilor trebuie să fie aproximativ egale cu jumătatea titrului. Se folosesc anticorpi validați (a se vedea site-ul web la adresa: http://forum.europa.eu.int
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
furnizorilor de anticorpi. În cazul în care este necesar, lamele fixe pot fi refrigerate și depozitate într-o cutie de desicație pentru cea mai scurtă perioadă posibilă (maximum 3 luni) înainte de efectuarea unui alt test. 4.3. Procedura testului de imunofluorescență: (i) în conformitate cu metoda de preparare a lamelor de test, indicată la punctul 4.1 (i): se prepară o serie de diluții pe jumătate de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Primul godeu trebuie să primească 1/2 din titru (T
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
înainte de efectuarea unui alt test. 4.3. Procedura testului de imunofluorescență: (i) în conformitate cu metoda de preparare a lamelor de test, indicată la punctul 4.1 (i): se prepară o serie de diluții pe jumătate de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Primul godeu trebuie să primească 1/2 din titru (T/2), celelalte 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titrul (T) și de două ori titrul (2T); (ii) în conformitate cu metoda de preparare a lamelor de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
1/2 din titru (T/2), titrul (T) și de două ori titrul (2T); (ii) în conformitate cu metoda de preparare a lamelor de test, indicată la punctul 4.1 (ii): se prepară diluția de lucru de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Diluția de lucru are efect asupra specificității. Figura 1. Prepararea lamei de test în conformitate cu punctele 4.1 (i) și 4.3 (i) Diluția de extract concentrat repus în suspensie 1/100 1/1 1/1 1/1 1/1 Diluție
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
se incubează lamele pe hârtie umedă și sub un capac-clopot timp de 30 de minute, la temperatura mediului ambiant (18-25 °C); 4.3.3. se elimină picăturile de pe fiecare lamă și se clătește cu grijă într-o soluție tampon pentru imunofluorescență. Se spală prin imersie timp de cinci minute într-o soluție tampon IF-Tween (a se vedea apendicele 3), apoi încă cinci minute într-o soluție tampon IF. Se evită orice vaporizare sau vărsare care ar putea determina o contaminare încrucișată
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
se depun cu pipeta 5-10 μl dintr-o soluție de glicerol tamponată cu fosfat la 0,1 M (a se vedea apendicele 3) sau un suport antidecolorare din comerț, apoi se acoperă cu o lamelă. 4.4. Citirea testului de imunofluorescență: 4.4.1. Se examinează lamele de test cu ajutorul unui microscop cu epifluorescență și cu ajutorul filtrelor adaptate la excitația izotiocianatului de fluorescență, în imersie în ulei sau în apă și cu o creștere de la 500 la 1 000. Se examinează
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
dintr-un lot prezintă celule pozitive din cauza contaminării tamponului sau în cazul în care celulele pozitive sunt izolate (în exteriorul ferestrelor) pe mediul de montare al lamei. 4.4.3. Există un anumit număr de probleme inerente specificității testului de imunofluorescență. Există un risc ridicat ca în extractele de conuri de stoloni și de segmente de tulpini de cartof să apară populații nedorite de celule fluorescente, atipice din punct de vedere morfologic și populații de bacterii saprofite care provoacă reacții încrucișate
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
ssp. sepedonicus. 4.4.4. Numai celulele fluorescente care au o dimensiune și o morfologie caracteristice titrului sau diluției de lucru a anticorpilor menționați la punctul 4.3 trebuie să fie luate în considerare. 4.4.5. Interpretarea testului de imunofluorescență: (i) În cazul în care proba conține celule care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică, se evaluează numărul mediu de celule caracteristice pe câmp microscopic și se calculează numărul celulelor menționate pe mililitru de extract concentrat repus în
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică, se evaluează numărul mediu de celule caracteristice pe câmp microscopic și se calculează numărul celulelor menționate pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie (a se vedea apendicele 4). Testul de imunofluorescență este considerat pozitiv atunci când eșantionul conține cel puțin 5 x 103 celule caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie. În acest caz, eșantionul este considerat ca fiind potențial contaminat și trebuie continuate testele. (ii) Testul de imunofluorescență este
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de imunofluorescență este considerat pozitiv atunci când eșantionul conține cel puțin 5 x 103 celule caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie. În acest caz, eșantionul este considerat ca fiind potențial contaminat și trebuie continuate testele. (ii) Testul de imunofluorescență este considerat negativ atunci când eșantionul conține mai puțin de 5 x 103 celule pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie și proba este considerată necontaminată. Nu este necesară continuarea testelor. 5. TESTUL FISH Principiu În cazul în care testul
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
suspensie și proba este considerată necontaminată. Nu este necesară continuarea testelor. 5. TESTUL FISH Principiu În cazul în care testul FISH este folosit ca test de depistare inițial și rezultatul său este pozitiv, trebuie să se efectueze un test de imunofluorescență ca al doilea test obligatoriu de depistare. În cazul în care testul FISH este folosit ca test secundar, iar rezultatul său este pozitiv, diagnosticul trebuie completat de teste suplimentare, astfel cum se indică în diagrama funcțională. Nota bene: Se utilizează
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
nedorite de celule fluorescente morfologic atipice și de bacterii saprofite care provoacă reacții încrucișate și au mărimea și morfologia asemănătoare cu C. m. ssp. sepedonicus. Fenomenul menționat este, cu toate acestea, mult mai puțin frecvent decât în cazul testului de imunofluorescență. 5.3.5. Doar celulele fluorescente de mărime și cu morfologie caracteristice trebuie luate în considerare (a se vedea punctul 5.3.2). 5.3.6. Interpretarea rezultatului testului FISH: (i) rezultatele testului FISH sunt valabile atunci când prin intermediul filtrului FITC
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]