165 matches
-
of gene expression"), tehnologia "microarray" ("DNA chips") aplicată la studiul expresiei genelor și în diagnosticul cancerului, bolilor cardiovasculare, dermatologice, inflamatorii, neurologice și genetice. III. Tehnici de analiză a proteinelor Purificarea proteinelor. Electroforeza proteinelor în sistem denaturant și nedenaturant și focalizarea izoelectrică. Cromatografia proteinelor. Difracția razelor X. Secvențierea proteinelor și cartografierea peptidelor. Dozarea proteinelor. Electroeluția. Electro-transferul. Identificarea cu anticorpi. Aplicații medicale ale tehnicilor de analiză a proteinelor în diagnosticul molecular al unor boli: hemoglobinopatii, anemii hemolitice congenitale prin defect de citoschelet (sferocitoză
EUR-Lex () [Corola-website/Law/191370_a_192699]
-
musculare, leucemii. IV. Noțiuni de glicobiologie: definiție și tehnici de analiză a glucidelor celulare. Aplicații medicale legate de diagnosticul bolilor congenitale de glicozilare. B. PARTEA PRACTICĂ 1. Analiza proteinelor prin electroforeză pe gelul de poliacrilamidă cu sau fară denaturare, focalizarea izoelectrică pe geluri plate și cilindrice de poliacrilamidă, electroforeza bidimensională. 2. Colorarea, interpretarea și uscarea gelurilor de poliacrilamidă. 3. Electrotransferul proteinelor de pe gelul de poliacrilamidă pe hârtia de nitroceluloză, identificarea cu anticorpi a proteinelor transferate pe membrana de nitroceluloză, electroeluția proteinelor
EUR-Lex () [Corola-website/Law/191370_a_192699]
-
metoda de referință. ... ÎI. Descrierea metodei 1. Obiect Detectarea laptelui de vacă și a cazeinei în brânzeturile produse din lapte de oaie, lapte de capră, lapte de bivolița sau din amestecuri de lapte de oaie, capră și bivolița prin focalizarea izoelectrica a g-cazeinelor după plasminoliza 2. Domeniu de aplicare Prezenta metodă poate fi folosită pentru detectarea sensibilă și specifică a laptelui de vacă și a cazeinatului natural sau tratat termic în brânzeturile proaspete și maturate produse din lapte de oaie, lapte
EUR-Lex () [Corola-website/Law/148891_a_150220]
-
de proteine de zer de vacă tratate termic. 3. Principiu 3.1. Izolarea cazeinei din brânză și din probele de referință 3.2. Dizolvarea cazeinelor izolate și tratarea acestora prin clivare plasminica (EC.3.4.21.7) 3.3. Focalizarea izoelectrica a cazeinelor tratate cu plasmina în prezența ureii și colorarea proteinelor 3.4. Evaluarea benzilor colorate de γ2 - si γ3 -cazeina (dovezi ale prezenței laptelui de vacă) prin compararea benzilor obținute din proba cu benzile obținute pe același gel din
EUR-Lex () [Corola-website/Law/148891_a_150220]
-
se aplică gelurilor de poliacrilamide cu conținut de uree preparate în laborator, cu dimensiunile de 265 x 125 x 0,25 mm. Dacă se folosesc geluri de alte dimensiuni sau tipuri, se poate dovedi necesară schimbarea condițiilor de separare. Focalizarea izoelectrica 4.1. Reactivi pentru producerea gelurilor de poliacrilamide cu conținut de uree 4.1.1. Prepararea soluției "de bază" de gel Se dizolvă în apă: 4,85 g acrilamida 0,15 g N, N'-metilen-bis-acrilamida (BIS) 48,05 g uree
EUR-Lex () [Corola-website/Law/148891_a_150220]
-
o pulbere fină omogena. Pentru prepararea probei standard 0% se urmează aceeași procedură, folosindu-se lapte degresat de bivolița veritabil. Probele trebuie păstrate la -20°C. Observație: Înaintea preparării probelor standard se recomandă verificarea purității laptelui de bivolița prin focalizarea izoelectrica a cazeinelor tratate cu plasmina. Reactivi pentru colorarea proteinelor 4.9. Fixator: se dizolvă în apă 150 g acid tricloroacetic și se completează cu apă până la 1.000 ml. 4.10. Soluție pentru decolorare: se diluează cu apă distilata până la
EUR-Lex () [Corola-website/Law/148891_a_150220]
-
de poliacrilamida poate fi tăiat la dimensiuni mai mici, acțiune care este recomandată în cazul în care există puține probe sau dacă se folosește un aparat automat de electroforeza (două geluri format 4,5 x 5 cm). 6.3. Focalizarea izoelectrica Se reglează termostatul de răcire la 12°C. Se șterge cu kerosen spatele foii susținătoare de gel, apoi se picura câteva picături de kerosen (pct. 4.2) pe centrul blocului de răcire. Se rulează apoi pe el "sandvișul" de gel
EUR-Lex () [Corola-website/Law/148891_a_150220]
-
și se îndepărtează foaia de acoperire. Se îmbiba benzile de electrozi în soluțiile electrolitice (pct. 4.3, 4.4), se taie după lungimea gelului și se plasează în poziția prevăzută (distanță dintre electrozi de 9,5 cm). Condiții pentru focalizarea izoelectrica: 6.3.1. Dimensiunile gelului 265 x 125 x 0,25 mm
EUR-Lex () [Corola-website/Law/148891_a_150220]
-
of gene expression"), tehnologia "microarray" ("DNA chips") aplicată la studiul expresiei genelor și în diagnosticul cancerului, bolilor cardiovasculare, dermatologice, inflamatorii, neurologice și genetice. III. Tehnici de analiză a proteinelor Purificarea proteinelor. Electroforeza proteinelor în sistem denaturant și nedenaturant și focalizarea izoelectrică. Cromatografia proteinelor. Difracția razelor X. Secvențierea proteinelor și cartografierea peptidelor. Dozarea proteinelor. Electroeluția. Electro-transferul. Identificarea cu anticorpi. Aplicații medicale ale tehnicilor de analiză a proteinelor în diagnosticul molecular al unor boli: hemoglobinopatii, anemii hemolitice congenitale prin defect de citoschelet (sferocitoză
EUR-Lex () [Corola-website/Law/266238_a_267567]
-
of gene expression"), tehnologia "microarray" ("DNA chips") aplicată la studiul expresiei genelor și în diagnosticul cancerului, bolilor cardiovasculare, dermatologice, inflamatorii, neurologice și genetice. III. Tehnici de analiză a proteinelor Purificarea proteinelor. Electroforeza proteinelor în sistem denaturant și nedenaturant și focalizarea izoelectrică. Cromatografia proteinelor. Difracția razelor X. Secvențierea proteinelor și cartografierea peptidelor. Dozarea proteinelor. Electroeluția. Electro-transferul. Identificarea cu anticorpi. Aplicații medicale ale tehnicilor de analiză a proteinelor în diagnosticul molecular al unor boli: hemoglobinopatii, anemii hemolitice congenitale prin defect de citoschelet (sferocitoză
EUR-Lex () [Corola-website/Law/219169_a_220498]
-
musculare, leucemii. IV. Noțiuni de glicobiologie: definiție și tehnici de analiză a glucidelor celulare. Aplicații medicale legate de diagnosticul bolilor congenitale de glicozilare. B. PARTEA PRACTICĂ 1. Analiza proteinelor prin electroforeză pe gelul de poliacrilamidă cu sau fară denaturare, focalizarea izoelectrică pe geluri plate și cilindrice de poliacrilamidă, electroforeza bidimensională. 2. Colorarea, interpretarea și uscarea gelurilor de poliacrilamidă. 3. Electrotransferul proteinelor de pe gelul de poliacrilamidă pe hârtia de nitroceluloză, identificarea cu anticorpi a proteinelor transferate pe membrana de nitroceluloză, electroeluția proteinelor
EUR-Lex () [Corola-website/Law/219169_a_220498]
-
OAIE, CAPRĂ ȘI BIVOLIȚĂ 1. Domeniu de aplicare Detectarea laptelui de vacă și a cazeinei în brânzeturile produse din lapte de oaie, lapte de capră, lapte de bivoliță sau din amestecuri de lapte de oaie, capră și bivoliță prin focalizarea izoelectrică a γ-cazeinelor după plasminoliză. 2. Domeniu de aplicare Această metodă poate fi folosită pentru detectarea sensibilă și specifică a laptelui de vacă natural și tratat termic și a cazeinatului în brânzeturile proaspete și maturate produse din lapte de oaie, lapte
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
proteine de zer de bovine tratate termic. 3. Principiul metodei 3.1. Izolarea cazeinei din brânză și din probele de referință 3.2. Dizolvarea cazeinelor izolate și tratarea acestora prin clivare plasminică (EC.3.4.21.7). 3.3. Focalizarea izoelectrică a cazeinelor tratate cu plasmină în prezența ureii și colorarea proteinelor 3.4. Evaluarea benzilor colorate de γ2- și γ3-cazeină (dovezi ale prezenței laptelui de vacă) prin compararea benzilor obținute din probă cu benzile obținute pe același gel din probele
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
detalii se aplică gelurilor de poliacrilamide cu conținut de uree preparate în laborator, cu dimensiunile de 265 x 125 x 0,25 mm. Dacă se folosesc geluri de alte dimensiuni sau tipuri, poate fi necesară modificarea condițiilor de separare. Focalizarea izoelectrică 4.1. Reactivi pentru producerea gelurilor de poliacrilamide cu conținut de uree 4.1.1. Soluție "stock" de gel Se dizolvă în apă: 4,85 g acrilamidă 0,15g N, N' - metilen-bis-acrilamidă (BIS) 48,05 g uree 15,00 g
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
obține o pulbere fină omogenă. Pentru prepararea probei standard 0%, se urmează aceeași procedură folosind lapte degresat de bivoliță veritabil. Probele trebuie păstrate la -20 ° C. Observație: Înaintea preparării probelor standard se recomandă verificarea purității laptelui de bivoliță prin focalizarea izoelectrică a cazeinelor tratate cu plasmină. Reactivi pentru colorarea proteinelor 4.9. Fixativ Se dizolvă în apă 150 g acid tricloroacetic și se completează cu apă până la 1000 ml. 4.10. Soluție pentru decolorare Se diluează în apă distilată până la 2000
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
de poliacrilamidă poate fi tăiat la dimensiuni mai mici, acțiune care este recomandată în cazul în care există puține probe sau dacă se folosește un aparat automat de electroforeză (două geluri format 4,5 x 5 cm). 6.3. Focalizarea izoelectrică Se reglează termostatul de răcire la 12 °C. Se șterge cu kerosen spatele foii susținătoare de gel, apoi se picură câteva picături de kerosen (4.2) pe centrul blocului de răcire. Se rulează apoi pe el "sandvișul" de gel, cu
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
kerosen și se îndepărtează foaia de acoperire. Se îmbibă benzile de electrozi în soluțiile electrolitice (4.3, 4.4), se taie după lungimea gelului și se plasează în poziția prevăzută (distanța dintre electrozi de 9,5 cm). Condiții pentru focalizarea izoelectrică: 6.3.1. Dimensiunile gelului 265 x 125 x 0,25 mm Pasul Timp (min) Tensiune (V) Intensitate (mA) Putere (W) Volți oră (Vh) 1. Pre-focalizare 30 maximumum 2 500 maximum 15 constant 4 c. 300 2. Focalizarea probei 1
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
efectuate pe același gel. Detectarea laptelui de vacă în brânzeturile din lapte de oaie, lapte de capră și lapte de bivoliță și în amestecurile de lapte de oaie, capră și bivoliță se face prin intermediul γ3- și γ2-cazeinelor, ale căror puncte izoelectrice se află în intervalul pH 6,5 - pH 7,5 (Figurile 4 a, b, Figura 5). Limita de detecție este mai mică de 0,5 %. 7.1. Interpretare vizuală Pentru evaluarea vizuală a cantității de lapte de vacă se recomandă
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
poliacrilamide a = bandă adezivă pentru spațiere (0,25 mm); b = foaie de acoperire (5.3); c, e = plăci de sticlă (5.1); d = soluție de gel (4.1.2); f = foaie susținătoare de gel(5.2) Figura 4 a: Focalizare izoelectrică a cazeinelor tratate cu plasmină din brânză din lapte de oaie și de capră care conține diferite cantități de lapte de vacă % CM = procentaj lapte de vacă, C = vacă, E = oaie, G = capră Este ilustrată jumătatea de sus a gelului
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
din brânză din lapte de oaie și de capră care conține diferite cantități de lapte de vacă % CM = procentaj lapte de vacă, C = vacă, E = oaie, G = capră Este ilustrată jumătatea de sus a gelului IEF. Figura 4 b: Focalizare izoelectrică a cazeinelor tratate cu plasmină din brânză din amestec de lapte de oaie, capră și bivoliță care conține diferite cantități de lapte de vacă % CM = procentaj lapte de vacă, 1+ = probă conținând 1 % lapte de vacă și dopat cu cazeină
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
C = vacă, E = oaie, G = capră, B = bivoliță Este ilustrată distanța separatoare totală a gelului IEF. Figura 5: Suprapunerea densitogramelor probelor standard (STD) și a probelor de brânză preparate din amestec de lapte de oaie și de capră după focalizarea izoelectrică a, b = probe standard conținând 0 respectiv 1% lapte de vacă; c-g = probe de brânză conținând 0, 1, 2, 3 și 7 % lapte de vacă. C = vacă, E = oaie, G = capră Jumătatea superioară a gelului IEF a fost scanată
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
of gene expression"), tehnologia "microarray" ("DNA chips") aplicată la studiul expresiei genelor și în diagnosticul cancerului, bolilor cardiovasculare, dermatologice, inflamatorii, neurologice și genetice. III. Tehnici de analiză a proteinelor Purificarea proteinelor. Electroforeza proteinelor în sistem denaturant și nedenaturant și focalizarea izoelectrică. Cromatografia proteinelor. Difracția razelor X. Secvențierea proteinelor și cartografierea peptidelor. Dozarea proteinelor. Electroeluția. Electro-transferul. Identificarea cu anticorpi. Aplicații medicale ale tehnicilor de analiză a proteinelor în diagnosticul molecular al unor boli: hemoglobinopatii, anemii hemolitice congenitale prin defect de citoschelet (sferocitoză
EUR-Lex () [Corola-website/Law/237660_a_238989]
-
musculare, leucemii. IV. Noțiuni de glicobiologie: definiție și tehnici de analiză a glucidelor celulare. Aplicații medicale legate de diagnosticul bolilor congenitale de glicozilare. B. PARTEA PRACTICĂ 1. Analiza proteinelor prin electroforeză pe gelul de poliacrilamidă cu sau fară denaturare, focalizarea izoelectrică pe geluri plate și cilindrice de poliacrilamidă, electroforeza bidimensională. 2. Colorarea, interpretarea și uscarea gelurilor de poliacrilamidă. 3. Electrotransferul proteinelor de pe gelul de poliacrilamidă pe hârtia de nitroceluloză, identificarea cu anticorpi a proteinelor transferate pe membrana de nitroceluloză, electroeluția proteinelor
EUR-Lex () [Corola-website/Law/237660_a_238989]
-
5.3.5. Subcontractarea Testelor Un Laborator acreditat de AMA trebuie să realizeze toate lucrările cu personalul și echipamentul său, în cadrul dotărilor sale acreditate. În cazul tehnologiilor specifice care nu ar exista în Laborator (de exemplu, GC/C/IRMS, focalizare Izoelectrică [EPO/NESP]), proba poate fi transferată la un alt Laborator acreditat de AMA, la care există acea tehnologie, în scopul analizării. În împrejurări excepționale, AMA poate decide acordarea unei autorizații speciale pentru subcontractarea unei părți a sarcinilor. În asemenea cazuri
EUR-Lex () [Corola-website/Law/182014_a_183343]
-
Prevenirea degradării EPO în timpul procesului de concentrare este esențială. Notă: deși pot fi folosite alte tehnici de concentrare mai selective, orice modificare în prepararea probei poate afecta distribuția izoformă și, în consecință, va necesita validarea adecvată de către laborator. 2) Focalizarea izoelectrică (IEF): ... Focalizarea izoelectrică este efectuată într-un domeniu de pH compatibil cu punctul izoelectric (p1) atât al EPO urinare naturale cât și al analogilor săi recombinanți (de ex., în mod normal, cu pH între 2 și 6). Variația pH-ului
EUR-Lex () [Corola-website/Law/182014_a_183343]