185 matches
-
în momente corespunzătoare după tratament. Înainte de sacrificare, animalele se supun tratamentului cu un agent de inhibare a metafazei (de exemplu colchicină sau Colcemid(r)). Apoi, din celulele de măduvă osoasă se realizează preparate cromozomiale care se colorează și celulele în metafază se examinează pentru a se pune în evidență aberațiile cromozomiale. 1.4. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.4.1. Preparatele 1.4.1.1. Selectarea speciilor de animale Se utilizează, de obicei, șobolani, șoareci și hamsteri chinezești, deși se poate
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
o prelevare de probe la un interval de timp egal cu de 1,5 ori durata ciclului celular normal după tratamentul final. Înainte de sacrificare, se procedează la injectarea intraperitoneală a animalelor cu o doză corespunzătoare de agent de inhibare a metafazei (de ex. Colcemid(r) sau colchicină). Probele de la animale se prelevează apoi la un interval corespunzător. Pentru șoareci intervalul respectiv este de aproximativ 3-5 ore; pentru hamsterii chinezești intervalul este de 4-5 ore. Celule se recoltează din măduva osoasă și
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
specificat se poate reduce. Toate lamelele, inclusiv cele cu celule de la martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent, înainte de examinarea la microscop. Deoarece metodele de preparare a lamelelor conduc adesea la scindarea unei fracții de celule în metafază cu pierdere de cromozomi, toate celulele examinate ar trebui, prin urmare, să conțină un număr de centromeri egal cu 2n ± 2. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Se recomandă prezentarea sub formă de tabel a datelor pentru fiecare animal. Unitatea
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
băut în doza reală (mg/kg greutate corp/zi), dacă este cazul, - detalii privind calitatea hranei și a apei, - descrierea amănunțită a modalităților de tratare și de prelevare a probelor, - metodele de măsurare a toxicității, - identitatea substanței de inhibare a metafazei, concentrația acesteia și durata tratamentului, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de celule analizate per animal, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - indexul mitotic, - tipul și numărul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
numărului de cromozomi față de numărul normal caracteristic pentru animalele utilizate. Poliploidie: multiplicare a numărului (n) de cromozomi haploizi, alta decât diploidia (adică 3n, 4n etc.). Aberație structurală: modificare a structurii cromozomilor, detectabilă la examinarea microscopică a celulelor în stadiul de metafază al diviziunii acestora, care se prezintă sub formă de deleții, modificări intracromozomiale și intercromozomiale. 1.3. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Animalele se expun la substanța de testat printr-o cale de expunere corespunzătoare și sunt sacrificate în momente corespunzătoare după
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și intercromozomiale. 1.3. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Animalele se expun la substanța de testat printr-o cale de expunere corespunzătoare și sunt sacrificate în momente corespunzătoare după tratament. Înainte de sacrificare, animalele se tratează cu o substanță de inhibare a metafazei (de ex. colchicină sau Colcemid(r)). Apoi, din celulele germinale, se realizează preparate cromozomiale care se colorează, iar celulele în metafază sunt analizate la microscop pentru detectarea aberațiilor cromozomiale. 1.4. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.4.1. Preparatele 1
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și sunt sacrificate în momente corespunzătoare după tratament. Înainte de sacrificare, animalele se tratează cu o substanță de inhibare a metafazei (de ex. colchicină sau Colcemid(r)). Apoi, din celulele germinale, se realizează preparate cromozomiale care se colorează, iar celulele în metafază sunt analizate la microscop pentru detectarea aberațiilor cromozomiale. 1.4. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.4.1. Preparatele 1.4.1.1. Selectarea speciilor de animale Se utilizează, de obicei, hamsteri chinezești și șoareci de sex masculin. Cu toate acestea
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ore (1,5 ori durata ciclului celular) de la ultimul tratament. Se pot utiliza momente suplimentare de prelevare a probelor, dacă este necesar. Înainte de sacrificare, se procedează la injectarea intraperitoneală a animalelor cu o doză corespunzătoare de substanță de inhibare a metafazei (de ex. Colcemid(r) sau colchicină). Probele de la animale se prelevează apoi la un interval corespunzător. Pentru șoareci intervalul respectiv este de aproximativ 3-5 ore; pentru hamsterii chinezești intervalul este de 4-5 ore. 1.5.3. Dozele Dacă, în lipsa datelor
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și să fie stabilite pentru fiecare caz în parte. Doza maximă se mai poate defini ca doza care produce anumite semne de toxicitate în celulele spermatogoniale (de ex. o diminuare a proporției de mitoze spermatogoniale în raport cu prima și a doua metafază meiotică; reducerea respectivă nu ar trebui să fie mai mare de 50%). 1.5.4. Test limită Dacă un test realizat cu o doză de minimum 2 000 mg/kg greutate corp, administrată într-o singură repriză sau în două
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de la unul sau două testicule, se expun la o soluție hipotonică și se fixează. Celulele se întind apoi pe lamele și se colorează. 1.5.7. Analiza Pentru fiecare animal ar trebui să se analizeze minimum 100 de celule în metafază, bine etalate (de ex. minimum 500 de celule în metafază pentru fiecare grupă). Dacă se observă un număr mai mare de aberații, numărul specificat se poate reduce. Toate lamelele, inclusiv cele cu celule de la martorii pozitivi și negativi, ar trebui
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
hipotonică și se fixează. Celulele se întind apoi pe lamele și se colorează. 1.5.7. Analiza Pentru fiecare animal ar trebui să se analizeze minimum 100 de celule în metafază, bine etalate (de ex. minimum 500 de celule în metafază pentru fiecare grupă). Dacă se observă un număr mai mare de aberații, numărul specificat se poate reduce. Toate lamelele, inclusiv cele cu celule de la martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent înainte de examinarea la microscop. Deoarece metodele
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
specificat se poate reduce. Toate lamelele, inclusiv cele cu celule de la martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent înainte de examinarea la microscop. Deoarece metodele de preparare a lamelelor conduc adesea la scindarea unei fracții de celule în metafază cu pierdere de cromozomi, toate celulele examinate ar trebui, prin urmare, să conțină un număr de centromeri egal cu 2n ± 2. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Se recomandă prezentarea sub formă de tabel a datelor pentru fiecare animal. Unitatea
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
se consemnează și se raportează separat, dar în general acestea nu se includ în frecvența totală a aberațiilor. Dacă se observă concomitent mitoză și meioză, ar trebui să se determine raportul dintre mitozele spermatogoniale , în prima, respectiv în a doua metafază meiotică; această determinare ar trebui să se realizeze pentru toate animalele tratate și cele martori negativi, pe un eșantion total de 100 celule în diviziune pentru fiecare animal pentru a stabili un posibil efect citotoxic. Dacă se constată doar mitoză
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
băut în doza reală (mg/kg greutate corp/zi), dacă este cazul, - detalii privind calitatea hranei și a apei, - descrierea amănunțită a modalităților de tratare și de prelevare a probelor, - metodele de măsurare a toxicității, - identitatea substanței de inhibare a metafazei, concentrația acesteia și durata tratamentului, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de celule analizate per animal, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - indexul mitotic, - procentul de celule
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de celule analizate per animal, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - indexul mitotic, - procentul de celule spermatogoniale în mitoză în raport cu cele din prima și a doua metafază meiotică, - tipul și numărul aberațiilor, consemnate separat pentru fiecare animal, - numărul total de aberații pentru fiecare grupă, - numărul de celule cu aberații pentru fiecare grupă, - relația doză-răspuns, dacă este posibil, - analizele statistice, dacă există, - datele privind martorii negativi studiați în
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
aibă dotare pentru: culturi celulare: - hotă de biosecuritate clasa A2; - incubator cu atmosferă controlată de CO(2); - microscop inversat; microscopie optică: - microscop cu examinare în câmp luminos cu lumină transmisă și epifluorescență; - programe pentru scanare automată a lamelor și captarea metafazelor și cariotipare; - program pentru captarea, prelucrarea și analiza imaginilor FISH (standard FISH, M-FISH, m-BAND, Q-FISH, CGH); - să aibă personal specializat în examenul citogenetic și FISH cu experiență în domeniu de cel puțin 1 an; 3. laboratoare de biologie
EUR-Lex () [Corola-website/Law/264512_a_265841]
-
de fiecare dată când e posibil. Monitorizarea: Monitorizarea este esențială pentru optimizarea tratamentului și a costului. În primele 3 luni monitorizarea clinică, biochimică și hematologică este recomandată la 2 săptămâni. Din luna a-3-a, examenul citogenetic (analiza prin bandare cromozomială a metafazelor din celulele medulare) este recomandată la cel puțin 6 luni pâna remisiunea citogenetică completă este obținută și confirmată. RT-Q-PCR (procentul de BCR-ABL:ABL în celulele sanguine) este recomandat la fiecare 3 luni până când un răspuns molecular major este obținut și
EUR-Lex () [Corola-website/Law/227406_a_228735]
-
să aibă dotare pentru: ● culturi celulare: - hotă de biosecuritate clasa A2; - incubator cu atmosferă controlată de CO2; - microscop inversat; ● microscopie optică: - microscop cu examinare în câmp luminos cu lumină transmisă și epifluorescență; - programe pentru scanare automată a lamelor și captarea metafazelor și cariotipare; - program pentru captarea, prelucrarea și analiza imaginilor FISH (standard FISH, M-FISH, m-BAND, Q-FISH, CGH); - să aibă personal specializat în examenul citogenetic și FISH cu experiență în domeniu de cel puțin 1 an; 3. laboratoare de biologie
EUR-Lex () [Corola-website/Law/250219_a_251548]
-
aibă dotare pentru: culturi celulare: - hotă de biosecuritate clasa A2; - incubator cu atmosferă controlată de CO(2); - microscop inversat; microscopie optică: - microscop cu examinare în câmp luminos cu lumină transmisă și epifluorescență; - programe pentru scanare automată a lamelor și captarea metafazelor și cariotipare; - program pentru captarea, prelucrarea și analiza imaginilor FISH (standard FISH, M-FISH, m-BAND, Q-FISH, CGH); - să aibă personal specializat în examenul citogenetic și FISH cu experiență în domeniu de cel puțin 1 an; 3. laboratoare de biologie
EUR-Lex () [Corola-website/Law/265618_a_266947]
-
dintr-un studiu in vivo sau un studiu in vitro cu un sistem metabolic diferit de cel sau cele utilizate anterior. Dacă testul citogenetic in vitro este pozitiv, trebuie să se efectueze un test in vivo pe celule somatice (analiza metafazelor celulelor măduvei osoase a rozătoarelor sau testul micronucleului la rozătoare). Dacă unul dintre testele de mutație genetică in vitro este pozitiv, trebuie să se efectueze un test in vivo pentru a analiza sinteza neprogramată de ADN sau un "spot test
jrc2516as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87670_a_88457]
-
aibă dotare pentru: culturi celulare: - hotă de biosecuritate clasa A2; - incubator cu atmosferă controlată de CO(2); - microscop inversat; microscopie optică: - microscop cu examinare în câmp luminos cu lumină transmisă și epifluorescență; - programe pentru scanare automată a lamelor și captarea metafazelor și cariotipare; - program pentru captarea, prelucrarea și analiza imaginilor FISH (standard FISH, M-FISH, m-BAND, Q-FISH, CGH); - să aibă personal specializat în examenul citogenetic și FISH cu experiență în domeniu de cel puțin 1 an; 3. laboratoare de biologie
EUR-Lex () [Corola-website/Law/268159_a_269488]
-
odată la 3 luni, daca nu există altă indicație 2 - Trombocite - Leucocite - Fără granulocite imature și - Splina nepalpabilă RĂSPUNSUL CITOGENETIC Evaluare la 6 luni până la obținerea răspunsului citogenetic complet, ulterior cel putin odată la 12 luni.* 2) [x] COMPLET: 0% metafaze Ph+ [] PARȚIAL: 1-35% metafaze Ph6 [] MINOR: 36-65% metafaze Ph+ [] MINIMAL: 66-95% metafaze Ph+ [] ABSENT: 95% metafaze Ph+ RĂSPUNSUL MOLECULAR:*2 Se apreciază raportul BCR-ABL/genă de control conform scalei internaționale. COMPLET: transcript necuantificabil și nedetectabil; MAJOR: ≤ 0.1 Se determina
EUR-Lex () [Corola-website/Law/242307_a_243636]
-
daca nu există altă indicație 2 - Trombocite - Leucocite - Fără granulocite imature și - Splina nepalpabilă RĂSPUNSUL CITOGENETIC Evaluare la 6 luni până la obținerea răspunsului citogenetic complet, ulterior cel putin odată la 12 luni.* 2) [x] COMPLET: 0% metafaze Ph+ [] PARȚIAL: 1-35% metafaze Ph6 [] MINOR: 36-65% metafaze Ph+ [] MINIMAL: 66-95% metafaze Ph+ [] ABSENT: 95% metafaze Ph+ RĂSPUNSUL MOLECULAR:*2 Se apreciază raportul BCR-ABL/genă de control conform scalei internaționale. COMPLET: transcript necuantificabil și nedetectabil; MAJOR: ≤ 0.1 Se determina odată la 3 luni
EUR-Lex () [Corola-website/Law/242307_a_243636]
-
indicație 2 - Trombocite - Leucocite - Fără granulocite imature și - Splina nepalpabilă RĂSPUNSUL CITOGENETIC Evaluare la 6 luni până la obținerea răspunsului citogenetic complet, ulterior cel putin odată la 12 luni.* 2) [x] COMPLET: 0% metafaze Ph+ [] PARȚIAL: 1-35% metafaze Ph6 [] MINOR: 36-65% metafaze Ph+ [] MINIMAL: 66-95% metafaze Ph+ [] ABSENT: 95% metafaze Ph+ RĂSPUNSUL MOLECULAR:*2 Se apreciază raportul BCR-ABL/genă de control conform scalei internaționale. COMPLET: transcript necuantificabil și nedetectabil; MAJOR: ≤ 0.1 Se determina odată la 3 luni. Criterii de excludere din
EUR-Lex () [Corola-website/Law/242307_a_243636]
-
Fără granulocite imature și - Splina nepalpabilă RĂSPUNSUL CITOGENETIC Evaluare la 6 luni până la obținerea răspunsului citogenetic complet, ulterior cel putin odată la 12 luni.* 2) [x] COMPLET: 0% metafaze Ph+ [] PARȚIAL: 1-35% metafaze Ph6 [] MINOR: 36-65% metafaze Ph+ [] MINIMAL: 66-95% metafaze Ph+ [] ABSENT: 95% metafaze Ph+ RĂSPUNSUL MOLECULAR:*2 Se apreciază raportul BCR-ABL/genă de control conform scalei internaționale. COMPLET: transcript necuantificabil și nedetectabil; MAJOR: ≤ 0.1 Se determina odată la 3 luni. Criterii de excludere din tratament: - Reacții adverse: când
EUR-Lex () [Corola-website/Law/242307_a_243636]