689 matches
-
în direcția I (aceeași cu distanța parcursă de soluția standard aplicată în punctul C), și apoi prin distanțele de migrare de acolo în direcția II a aflatoxinei B1-hemiacetal (aceleași cu distanțele parcurse de soluția standard aplicată în punctul B). Intensitățile fluorescenței spoturilor de hemiacetal provenite din extract și din soluția standard aplicată în B trebuie să fie aceeași. 6. Calcularea rezultatelor 6.1. Pe baza măsurătorilor vizuale Conținutul de aflatoxină B1 în micrograme per kg de eșantion (ppb) este dat de
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
măsurătorilor vizuale Conținutul de aflatoxină B1 în micrograme per kg de eșantion (ppb) este dat de formula: unde: Y și X reprezintă volumele în microlitri din soluția standard de aflatoxină B1 (3.16), respectiv din extract, având o intensitate a fluorescenței similară; S = concentrația în micrograme de aflatoxină B1 pe ml de soluție standard (3.16); V = volumul final de extract, în microlitri, care permite orice diluție necesară; W = greutatea în grame a eșantionului, corespunzătoare volumului de extract supus procesului de
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
pe placa TLC (4.8) 5 l din soluția standard de aflatoxină B1, conținând 8-10 g/ml (7.1). Se developează cromatograma conform indicațiilor de la 5.4. În lumină UV, cromatograma ar trebui să prezinte un singur spot, fără ca vreo fluorescență să fie detectabilă la nivelul zonei originale de depunere. 8. Repetabilitate Diferența dintre rezultatele a două determinări paralele efectuate pe același eșantion, de către același analist, nu trebuie să depășească: * 25 %, raportat la cel mai mare conținut de aflatoxină B1, între
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
acesta, 20 µl din soluția standard (3.16). Se developează conform indicațiilor de la 5.4.2. Se iradiază cromatograma cu radiații UV (4.9) și se verifică dacă: - spoturile de aflatoxină B1 din extract și din soluția standard se suprapun, - fluorescența acestui spot este mai intensă decât cea a spotului de aflatoxină B1 developat în punctul Q de pe prima placă. 5.5 Determinări cantitative Se realizează fie vizual, fie prin fluorodensitometrie, conform indicațiilor menționate în continuare. 5.5.1. Măsurători vizuale
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
B1 developat în punctul Q de pe prima placă. 5.5 Determinări cantitative Se realizează fie vizual, fie prin fluorodensitometrie, conform indicațiilor menționate în continuare. 5.5.1. Măsurători vizuale Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din extract prin compararea intensității fluorescenței spotului de extract cu cea a spoturilor de soluție standard C, D și E. Dacă este necesar se interpolează. Dacă intensitatea fluorescenței dată de cei 20 l de extract este mai mare decât cea dată de 40 l de soluție
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
în continuare. 5.5.1. Măsurători vizuale Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din extract prin compararea intensității fluorescenței spotului de extract cu cea a spoturilor de soluție standard C, D și E. Dacă este necesar se interpolează. Dacă intensitatea fluorescenței dată de cei 20 l de extract este mai mare decât cea dată de 40 l de soluție standard, se diluează extractul de 10 sau 100 de ori cu cloroform (3.2) sau cu amestec benzen/acetonitril (3.6) înainte de
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
standard, se diluează extractul de 10 sau 100 de ori cu cloroform (3.2) sau cu amestec benzen/acetonitril (3.6) înainte de a-l supune din nou cromatografiei în strat subțire. 5.5.2. Măsurători prin fluorodensitometrie Se măsoară intensitatea fluorescenței spoturilor de aflatoxină B1 cu ajutorul fluorodensitometrului (4.12) la o lungime de undă de sensibilizare de 365 nm și la o lungime de undă de emisie de 443 nm. Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din spotul de extract prin
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
aflatoxină B1 cu ajutorul fluorodensitometrului (4.12) la o lungime de undă de sensibilizare de 365 nm și la o lungime de undă de emisie de 443 nm. Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din spotul de extract prin compararea intensității fluorescenței acestuia cu cea a spoturilor de soluție standard din punctele C, D și E. 5.6. Confirmarea identității aflatoxinei B1 Vezi pct. 5.6 din metoda A. 6. Calcularea rezultatelor Vezi pct. 6 din metoda A. 7. Repetabilitatea Vezi pct.
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
următoarele metode: - CLIA - Chemiluminescență (Test Imunologic pe bază de Chemiluminiscență) - ECLIA - Electrochemiluminescență (Test Imunologic pe bază de Electrochemiluminiscență) - MEIA, EIA - Microparticle Enzyme Immunoassay (Metoda Imunologică Enzimatică; Metoda Imunologică Enzimatică pe bază de Microparticule) - FPIA - Fluorescence Polarization Immunoassay (Metoda Imunologică prin Fluorescență de Polarizare) - REA - Radiative Energy Attenuation (Atenuare de Energie Radiată) - CMIA - Chemiluminescent microparticle immunoassay (Test Imunologic de Chemiluminiscență pe bază de Microparticule) - EMIT - Enzyme Multiplied Immunoassay Technique (Metoda Imunologică Enzimatică Dublă) - RAST - Radioallergosorbent (Test Radioimunologic prin legarea complexului pe suport
NORME METODOLOGICE din 21 iunie 2016 (*actualizate*) de aplicare în anul 2016 a Hotărârii Guvernului nr. 161/2016 pentru aprobarea pachetelor de servicii şi a Contractului-cadru care reglementează condiţiile acordării asistenţei medicale, a medicamentelor şi a dispozitivelor medicale în cadrul sistemului de asigurări sociale de sănătate pentru anii 2016-2017*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/279952_a_281281]
-
Microparticule) - EMIT - Enzyme Multiplied Immunoassay Technique (Metoda Imunologică Enzimatică Dublă) - RAST - Radioallergosorbent (Test Radioimunologic prin legarea complexului pe suport insolubil) - RIA - Radioimmunoassay (Metoda Imunologică pe bază de Radioizotopi) - IFA - Immunofluorescence (Test Imunologic pe bază de Imunofluorescență) - ELFA cu detecție în fluorescență - Test imunoenzimatic cu emisie de fluorescență - TRACE - Emisie amplificată de europium 5. Citologie Microscop optic cu examinare în lumină polarizată/UV 6 puncte Microscop optic fără examinare în lumină polarizată/UV 4 puncte 6. Histopatologie - Sistem automat de prelucrare a
NORME METODOLOGICE din 21 iunie 2016 (*actualizate*) de aplicare în anul 2016 a Hotărârii Guvernului nr. 161/2016 pentru aprobarea pachetelor de servicii şi a Contractului-cadru care reglementează condiţiile acordării asistenţei medicale, a medicamentelor şi a dispozitivelor medicale în cadrul sistemului de asigurări sociale de sănătate pentru anii 2016-2017*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/279952_a_281281]
-
Metoda Imunologică Enzimatică Dublă) - RAST - Radioallergosorbent (Test Radioimunologic prin legarea complexului pe suport insolubil) - RIA - Radioimmunoassay (Metoda Imunologică pe bază de Radioizotopi) - IFA - Immunofluorescence (Test Imunologic pe bază de Imunofluorescență) - ELFA cu detecție în fluorescență - Test imunoenzimatic cu emisie de fluorescență - TRACE - Emisie amplificată de europium 5. Citologie Microscop optic cu examinare în lumină polarizată/UV 6 puncte Microscop optic fără examinare în lumină polarizată/UV 4 puncte 6. Histopatologie - Sistem automat de prelucrare a probelor .................... 40 puncte (de la probă până la
NORME METODOLOGICE din 21 iunie 2016 (*actualizate*) de aplicare în anul 2016 a Hotărârii Guvernului nr. 161/2016 pentru aprobarea pachetelor de servicii şi a Contractului-cadru care reglementează condiţiile acordării asistenţei medicale, a medicamentelor şi a dispozitivelor medicale în cadrul sistemului de asigurări sociale de sănătate pentru anii 2016-2017*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/279952_a_281281]
-
3) sau un suport antidecolorare din comerț, apoi se acoperă cu o lamelă. 4.4. Citirea testului de imunofluorescență: 4.4.1. Se examinează lamele de test cu ajutorul unui microscop cu epifluorescență și cu ajutorul filtrelor adaptate la excitația izotiocianatului de fluorescență, în imersie în ulei sau în apă și cu o creștere de la 500 la 1 000. Se examinează ferestrele în funcție de două diametre perpendiculare și în jurul perimetrului. Pentru probele care nu prezintă celule sau care prezintă doar un număr redus de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
și în jurul perimetrului. Pentru probele care nu prezintă celule sau care prezintă doar un număr redus de celule se observă cel puțin 40 de câmpuri microscopice. Se începe prin a se controla lama martorului pozitiv. Celulele trebuie să prezinte o fluorescență vie și să fie complet colorate la titrul de anticorp sau de diluție de lucru determinat. În cazul unei colorări anormale, testul IF (secțiunea 4) trebuie repetat. 4.4.2. Se caută în ferestrele lamelor de test prezența celulelor care
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
să fie complet colorate la titrul de anticorp sau de diluție de lucru determinat. În cazul unei colorări anormale, testul IF (secțiunea 4) trebuie repetat. 4.4.2. Se caută în ferestrele lamelor de test prezența celulelor care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică pentru C. m. ssp. sepedonicus (a se vedea site-ul web http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intensitatea fluorescenței trebuie să fie echivalentă cu cea a sușei martor pozitiv pentru o
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Se caută în ferestrele lamelor de test prezența celulelor care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică pentru C. m. ssp. sepedonicus (a se vedea site-ul web http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intensitatea fluorescenței trebuie să fie echivalentă cu cea a sușei martor pozitiv pentru o diluție identică de anticorpi. Celulele a căror colorare este incompletă sau care prezintă o fluorescență slabă nu trebuie luate în considerare. La cea mai mică suspiciune de contaminare
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
-ul web http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intensitatea fluorescenței trebuie să fie echivalentă cu cea a sușei martor pozitiv pentru o diluție identică de anticorpi. Celulele a căror colorare este incompletă sau care prezintă o fluorescență slabă nu trebuie luate în considerare. La cea mai mică suspiciune de contaminare, testul trebuie repetat. Acest lucru se poate întâmpla în cazul în care toate lamele dintr-un lot prezintă celule pozitive din cauza contaminării tamponului sau în cazul în
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
și o morfologie caracteristice titrului sau diluției de lucru a anticorpilor menționați la punctul 4.3 trebuie să fie luate în considerare. 4.4.5. Interpretarea testului de imunofluorescență: (i) În cazul în care proba conține celule care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică, se evaluează numărul mediu de celule caracteristice pe câmp microscopic și se calculează numărul celulelor menționate pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie (a se vedea apendicele 4). Testul de imunofluorescență este considerat pozitiv
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
fluorescent. Cu un filtru adaptat la tetrametilrodamină-5-izotiocianat, celulele de C. m. ssp. sepedonicus marcate cu Cy3 apar colorate în roșu fluorescent. Se compară morfologia celulelor cu cea a martorilor pozitivi. Celulele trebuie să fie complet colorate și să prezinte o fluorescență vie. În caz de colorare anormală, testul FISH (secțiunea 9.4) trebuie repetat. Se examinează ferestrele pe baza a două diametre perpendiculare și în jurul perimetrului. Pentru probele care nu prezintă celule sau care prezintă doar un număr redus de celule
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
în jurul perimetrului. Pentru probele care nu prezintă celule sau care prezintă doar un număr redus de celule se observă cel puțin 40 de câmpuri microscopice. 5.3.2. Se caută în ferestrele lamelor de test prezența celulelor care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică pentru C. m. ssp. sepedonicus (a se vedea site-ul web http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intensitatea fluorescenței trebuie să fie echivalentă cu cea a sușei martor pozitiv sau superioară
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Se caută în ferestrele lamelor de test prezența celulelor care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică pentru C. m. ssp. sepedonicus (a se vedea site-ul web http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intensitatea fluorescenței trebuie să fie echivalentă cu cea a sușei martor pozitiv sau superioară acesteia. Celulele a căror colorare este incompletă sau care prezintă o fluorescență slabă nu trebuie luate în considerare. 5.3.3. La cea mai mică suspiciune de contaminare
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
se vedea site-ul web http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intensitatea fluorescenței trebuie să fie echivalentă cu cea a sușei martor pozitiv sau superioară acesteia. Celulele a căror colorare este incompletă sau care prezintă o fluorescență slabă nu trebuie luate în considerare. 5.3.3. La cea mai mică suspiciune de contaminare, testul trebuie repetat. Acest lucru se poate întâmpla în cazul în care toate lamele dintr-un lot prezintă celule pozitive din cauza contaminării tamponului sau
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de mărime și cu morfologie caracteristice trebuie luate în considerare (a se vedea punctul 5.3.2). 5.3.6. Interpretarea rezultatului testului FISH: (i) rezultatele testului FISH sunt valabile atunci când prin intermediul filtrului FITC se observă celule care prezintă o fluorescență vie de culoare verde și o mărime și o morfologie caracteristice pentru C. m. ssp. sepedonicus, iar prin intermediul filtrului rodamină se observă celule care prezintă o fluorescență vie de culoare roșie la toți martorii pozitivi și la nici un martor negativ
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
FISH sunt valabile atunci când prin intermediul filtrului FITC se observă celule care prezintă o fluorescență vie de culoare verde și o mărime și o morfologie caracteristice pentru C. m. ssp. sepedonicus, iar prin intermediul filtrului rodamină se observă celule care prezintă o fluorescență vie de culoare roșie la toți martorii pozitivi și la nici un martor negativ. În cazul în care proba conține celule care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică, se evaluează numărul mediu de celule caracteristice pe câmp microscopic și
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
caracteristice pentru C. m. ssp. sepedonicus, iar prin intermediul filtrului rodamină se observă celule care prezintă o fluorescență vie de culoare roșie la toți martorii pozitivi și la nici un martor negativ. În cazul în care proba conține celule care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică, se evaluează numărul mediu de celule caracteristice pe câmp microscopic și se calculează numărul celulelor respective pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie (a se vedea apendicele 4). Probele care conțin cel puțin 5
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
extract concentrat repus în suspensie sunt considerate ca fiind negative; (ii) testul FISH este negativ în cazul în care nu se observă, prin intermediul filtrului rodamină, celule de mărimea și cu morfologia caracteristice pentru C. m. ssp. sepedonicus care prezintă o fluorescență vie de culoare roșie, cu condiția ca astfel de celule caracteristice cu o fluorescență vie și de culoare roșie să fie observate cu filtrul rodamină în preparatele de martori pozitivi. 6. TESTUL PCR Principii În cazul în care testul PCR
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]