54,545 matches
-
apă trebuie să fie testate până la limita solubilității, folosind metode adecvate. În cazul substanțelor netoxice cu un grad ridicat de solubilitate în apă, limita superioară a concentrației se determină de la caz la caz. Celulele pot fi expuse la substanțele de testare fie în faza staționară, fie în faza creșterii, pentru perioade de până la 18 ore. În cazul perioador lungi de tratament, culturile trebuie studiate microscopic în vederea decelării formării sporilor, prezența acestora invalidând testul. Condiții de incubație Cutiile se incubează între 4
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
pentru analiza viabilității. În cazul analizei homozigotismului recesiv produs prin încrucișarea mitotică, numărul cutiilor trebuie să crească, astfel încât să furnizeze un număr corespunzător de colonii. Mod de operare Tratamentul sușelor de Saccharomices cerevisiae se realizează de obicei prin procedeul de testare în lichid, care presupune utilizarea fie de celule staționare, fie de celule în creștere. Experimentele inițiale trebuie realizate pe celule în creștere. 1 - 5 x 107 celule/ml sunt expuse la substanța chimică testată pe o perioadă de 18 ore
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
IN VITRO DE MUTAȚIE GENICĂ PE CELULE DE MAMIFERE 1. METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nu sunt specificate. 1.4. Principiul metodei de testare Pentru determinarea mutațiilor cauzate de substanțele chimice se pot folosi sisteme de culturi celulare de mamifere. Printre cele mai utilizate linii celulare se numără celulele limfomatoase L5178Y de șoarece și liniile celulare CHO și V-79 de hamster chinezesc. În
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
selectiv, pentru aflarea numărului de celule supraviețuitoare. După o perioadă de incubație corespunzătoare, se numără coloniile. Frecvența mutantelor se calculează din numărul de colonii mutante corectat în funcție de supraviețuirea celulară. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Celule Pentru această tehnică sunt disponibile mai multe linii celulare, printre care subclonele L5178Y, celulele CHO sau celulele V-79, care au o sensibilitate demonstrată la agenții chimici mutageni, o eficiență de clonare ridicată și o frecvență redusă a
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
documentație. Mediu Se utilizează medii de cultură și condiții de incubare corespunzătoare (de exemplu, temperatura, vasele de cultură folosite, concentrațiile de CO2 și umiditatea). Mediul și serul trebuie alese funcție de sistemele selective și tipul celular folosit în experiment. Substanța de testare Înainte de tratarea celulelor, substanța de testare fie poate fi preparată în mediul de cultură, fie poate fi dizolvată sau suspensionate într-un excipient corespunzător. Concentrația finală a excipientului în sistemul de cultură nu trebuie să afecteze viabilitatea sau rata de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cultură și condiții de incubare corespunzătoare (de exemplu, temperatura, vasele de cultură folosite, concentrațiile de CO2 și umiditatea). Mediul și serul trebuie alese funcție de sistemele selective și tipul celular folosit în experiment. Substanța de testare Înainte de tratarea celulelor, substanța de testare fie poate fi preparată în mediul de cultură, fie poate fi dizolvată sau suspensionate într-un excipient corespunzător. Concentrația finală a excipientului în sistemul de cultură nu trebuie să afecteze viabilitatea sau rata de creștere celulară. Activarea metabolică Celulele se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
în mediul de cultură, fie poate fi dizolvată sau suspensionate într-un excipient corespunzător. Concentrația finală a excipientului în sistemul de cultură nu trebuie să afecteze viabilitatea sau rata de creștere celulară. Activarea metabolică Celulele se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să corespundă clasei de substanțe chimice
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
pot fi folosite ca martor pozitiv: - compuși cu activitate directă: - etilmetansulfonatul, - hicantona. - compuși cu activitate indirectă: - 2-acetilaminofluoren, - 7,12-dimetilbenzantracenul, - N-nitrozodimetilamina. Dacă este necesar, poate fi inclus un martor pozitiv suplimentar, care să aparțină aceleiași clase de substanțe ca substanța de testare. Concentrațiile de expunere Trebuie folosite mai multe concentrații ale substanței de testare. Acestea trebuie alese astfel încât să producă efect toxic în raport cu concentrația, concentrația maximă determinând un nivel scăzut de supraviețuire, iar supraviețuirea la concentrația minimă fiind aproximativ aceeași cu cea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
compuși cu activitate indirectă: - 2-acetilaminofluoren, - 7,12-dimetilbenzantracenul, - N-nitrozodimetilamina. Dacă este necesar, poate fi inclus un martor pozitiv suplimentar, care să aparțină aceleiași clase de substanțe ca substanța de testare. Concentrațiile de expunere Trebuie folosite mai multe concentrații ale substanței de testare. Acestea trebuie alese astfel încât să producă efect toxic în raport cu concentrația, concentrația maximă determinând un nivel scăzut de supraviețuire, iar supraviețuirea la concentrația minimă fiind aproximativ aceeași cu cea de la martorul negativ. Substanțele relativ insolubile în apă trebuie testate până la limita
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de celule viabile care să fie de 10 ori inversul frecvenței mutațiilor spontane. Celulele trebuie expuse o perioadă corespunzătoare, în cele mai multe cazuri fiind suficiente două până la cinci ore. Celulele fără o activitate metabolică intrinsecă suficientă trebuie expuse la substanța de testare atât în prezența, cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. La sfârșitul perioadei de expunere, celulele sunt spălate în vederea îndepărtării substanței de testare și cultivate pentru determinarea viabilității și pentru a permite expresia fenotipului mutant. La sfârșitul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cinci ore. Celulele fără o activitate metabolică intrinsecă suficientă trebuie expuse la substanța de testare atât în prezența, cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. La sfârșitul perioadei de expunere, celulele sunt spălate în vederea îndepărtării substanței de testare și cultivate pentru determinarea viabilității și pentru a permite expresia fenotipului mutant. La sfârșitul perioadei de expresie, care trebuie să fie suficientă pentru a permite expresia fenotipică optimă a mutantelor induse, celulele vor crește în mediu de cultură cu și
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cultură cu și fără agenți selectivi, pentru determinarea numărului de mutante și a viabilității. Toate rezultatele se verifică într-un experiment independent. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Se indică numărul de celule pe fiecare cutie pentru substanța de testare și martori, atât în termeni de inducere a mutațiilor, cât și de supraviețuire. Se prezintă de asemenea numărul mediu de colonii per cutie și deviația standard. Frecvența mutațiilor trebuie exprimată ca număr de celule mutante raportat la numărul de celule
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - linia celulară folosită, numărul de culturi celulare, metodele de menținere a culturilor celulare, - condițiile experimentale: compoziția mediilor, concentrația CO2, concentrația substanței de testare, excipientul folosit, temperatura de incubare, timpul de incubare, durata perioadei de expresie fenotipică (dacă este cazul, raportul poate include numărul de celule cultivate și subculturile și schemele de alimentare), durata tratamentului, densitatea celulară pe parcursul tratamentului, tipul de sistem de activare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
UDS - UNSCHEDULED DNA SYNTHESIS) - TEST IN VITRO PE CELULE DE MAMIFERE 1. METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Sinteza neprogramată a ADN (UDS) reprezintă un test care permite măsurarea sintezei de reparare a ADN-ului după excizia și eliminarea unui fragment de ADN care conține regiunea alterată de agenți chimici și fizici. Testul se bazează pe încorporarea timidinei
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de șobolan, culturile de celule de mamifere se tratează cu agentul testat cu și fără un sistem exogen de activare metabolică. USD poate fi măsurată prin tehnici in vivo. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire: Substanța chimică de testare și substanța martor sau substanța de referință trebuie preparate în mediul de creștere sau dizolvate sau suspensionate într-un excipient adecvat și ulterior diluate în mediul de cultură folosit în această tehnică. Concentrația finală a
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de mamifere se tratează cu agentul testat cu și fără un sistem exogen de activare metabolică. USD poate fi măsurată prin tehnici in vivo. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire: Substanța chimică de testare și substanța martor sau substanța de referință trebuie preparate în mediul de creștere sau dizolvate sau suspensionate într-un excipient adecvat și ulterior diluate în mediul de cultură folosit în această tehnică. Concentrația finală a excipientului nu trebuie să afecteze
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
a excipientului nu trebuie să afecteze viabilitatea celulară. În acest test pot fi folosite culturi celulare primare de hepatocite de șobolan, limfocite umane sau linii celulare bine caracterizate (de exemplu, fibroblaști diploizi umani). Celulele trebuie tratate cu substanțele chimice de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Condiții experimentale Numărul culturilor Pentru fiecare metodă experimentală sunt necesare cel puțin două culturi celulare pentru autoradiografiere și șase culturi (sau mai puține, dacă există argumente științifice
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cât și pentru testele LSC efectuate fără activare metabolică. N-dimetilnitrozamina este un exemplu de compus care poate fi folosit ca martor pozitiv când se folosesc sisteme de activare metabolică. Concentrații de expunere Trebuie folosite mai multe concentrații ale substanței de testare, alese într-un interval adecvat pentru definirea răspunsului. Concentrația maximă trebuie să producă unele efecte citotoxice. Compușii relativ insolubili în apă trebuie testați până la limita superioară a solubilității. Pentru substanțele netoxice, foarte ușor solubile în apă, limita superioară a concentrației
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
menținerea culturilor. Liniile celulare bine caracterizate trebuie verificate periodic în vederea decelării contaminării cu Mycoplasma. Activare metabolică Pentru culturile primare de hepatocite nu se utilizează un sistem de activare metabolică. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele se tratează cu substanța de testare cu și fără un sistem adecvat de activare metabolică. Mod de operare Pregătirea culturilor Liniile celulare bine caracterizate se obțin din culturi de sușe (prin tripsinizare sau descuamare) cultivate cu o densitate corespunzătoare în vase de cultură și incubate la
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
C. Culturile pe termen scurt de hepatocite de șobolan se obțin permițând hepatocitelor proaspăt disociate într-un mediu adecvat să se fixeze pe suprafața de creștere. Culturile de limfocite umane sunt produse prin tehnici adecvate. Tratarea culturilor cu substanța de testare Hepatocite primare de șobolan Hepatocitele de șobolan proaspăt izolate se tratează cu substanța de testare într-un mediu ce conține 3H-TdR o perioadă de timp corespunzătoare. La sfârșitul perioadei de tratament, celulele trebuie filtrate, spălate, fixate și uscate. Lamele trebuie
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
într-un mediu adecvat să se fixeze pe suprafața de creștere. Culturile de limfocite umane sunt produse prin tehnici adecvate. Tratarea culturilor cu substanța de testare Hepatocite primare de șobolan Hepatocitele de șobolan proaspăt izolate se tratează cu substanța de testare într-un mediu ce conține 3H-TdR o perioadă de timp corespunzătoare. La sfârșitul perioadei de tratament, celulele trebuie filtrate, spălate, fixate și uscate. Lamele trebuie introduse în emulsia autoradiografică (alternativ, poate fi folosit un film fotografic), expuse, developate, colorate și
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
trebuie filtrate, spălate, fixate și uscate. Lamele trebuie introduse în emulsia autoradiografică (alternativ, poate fi folosit un film fotografic), expuse, developate, colorate și numărate. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele Tehnica de autoradiografiere: Culturile celulare se tratează cu substanța de testare o perioadă de timp corespunzătoare, apoi se tratează cu 3H-TdR. Perioadele se stabilesc în funcție de natura substanței, de activitatea sistemelor metabolizante și de tipul celulelor. Pentru determinarea maximului de USD, 3H-TdR trebuie adăugată fie simultan cu substanța de testare, fie la
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
substanța de testare o perioadă de timp corespunzătoare, apoi se tratează cu 3H-TdR. Perioadele se stabilesc în funcție de natura substanței, de activitatea sistemelor metabolizante și de tipul celulelor. Pentru determinarea maximului de USD, 3H-TdR trebuie adăugată fie simultan cu substanța de testare, fie la câteva minute după expunerea la substanța de testare. Alegerea uneia dintre aceste metode se va face în funcție de interacțiunile posibile între substanța de testare și 3H-TdR. Pentru a putea face distincția între USD și replicarea semiconservativă a ADN, aceasta
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
tratează cu 3H-TdR. Perioadele se stabilesc în funcție de natura substanței, de activitatea sistemelor metabolizante și de tipul celulelor. Pentru determinarea maximului de USD, 3H-TdR trebuie adăugată fie simultan cu substanța de testare, fie la câteva minute după expunerea la substanța de testare. Alegerea uneia dintre aceste metode se va face în funcție de interacțiunile posibile între substanța de testare și 3H-TdR. Pentru a putea face distincția între USD și replicarea semiconservativă a ADN, aceasta din urmă poate fi inhibată, de exemplu, prin utilizarea unui
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
tipul celulelor. Pentru determinarea maximului de USD, 3H-TdR trebuie adăugată fie simultan cu substanța de testare, fie la câteva minute după expunerea la substanța de testare. Alegerea uneia dintre aceste metode se va face în funcție de interacțiunile posibile între substanța de testare și 3H-TdR. Pentru a putea face distincția între USD și replicarea semiconservativă a ADN, aceasta din urmă poate fi inhibată, de exemplu, prin utilizarea unui mediu sărac în arginină, cu conținut scăzut în ser sau prin adăugare de hidroxiuree în
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]