545 matches
-
genezei anomaliei, această poziție pare a fi caracterizată de o instabilitate specială, probabil datorită abundenței codonilor pentru prolină. Incidența mare a delețiilor la nivelul domeniului CH1 se poate datora ușurinței de a lega această leziune de efectele sale secundare profunde. Mutantele care apar spontan în liniile celulare de plasmacitom, menținute in vitro, includ două care prezintă deleții parțiale ale catenei H. Una dintre acestea implică domeniul CH1 (Secher și colab., 1974). 7.2. POLIMORFISMELE COMPLEMENTULUI Analiza polimorfismului lui C3 a dovedit
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
și colab., 1974). 7.2. POLIMORFISMELE COMPLEMENTULUI Analiza polimorfismului lui C3 a dovedit existența unei alele null (asintetice sau nonsintetice) înainte de a se fi descoperit vreun caz de deficiență a lui C3. Alelele mai puțin comune ale factorului B reprezintă mutante într-o altă parte a moleculei comparativ cu diferențele alelice comune, deoarece în condiții de clivaj natural, în cursul activării căii alternative, alelele comune merg cu un fragment, pe când cele rare merg cu un alt fragment, de obicei cu fragmentul
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
a fost cauzată de dezechilibrul de linkage dintre mutația în gena HCRTR 2 și HLADQB 1*0602 sau DQA1*0102. Această mutație este de dată recentă, iar timpul scurs de la acest eveniment mutațional până în prezent nu a permis separarea alelei mutante HCRTR 2 de alelele HLA. Capitolul 12 TIPAJUL ÎN TRANSPLANTURI BAZAT PE ANALIZA ADN Genele care codifică pentru catena grea a moleculelor HLA clasa I și ambele catene α și β ale moleculelor HLA clasa II sunt grupate într-o
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
degenerarea sau redundanța codului genetic universal). Dacă încărcătura electrică a aminoacidului care a înlocuit pe cel inițial este diferită de a celui care a fost substituit, rezultă o variantă hemoglobinică ce poate fi recunoscută după modificarea mobilității sale electroforetice, iar mutantele hemoglobinice care nu și-au modificat sarcina electrică și nici mobilitatea electroforetică, pot fi recunoscute numai dacă au indus modificarea funcției hemoglobinei și au determinat o anumită boală - o hemoglobinopatie. Dar, majoritatea mutațiilor hemoglobinice, indiferent dacă au modificat sau nu
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
falciformă sau drepanocitoză. Ulterior, anomalia a fost depistată frecvent (8%) în populația de negri din SUA. Bolnavii sufereau de anemie hemolitică și de episoade recurente de dureri abdominale și ale musculaturii scheletului, ceea ce se explică prin efectul pleiotropic al genei mutante HbS manifestat la nivel molecular prin substituția în β6 a acidului glutamic cu valina, la nivel celular, prin deformarea eritrocitelor: la presiuni reduse de oxigen acestea iau formă de seceră, iar în urma acroșării eritrocitelor falciforme are loc obturarea vaselor sangvine
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de modificare produsă într-o moleculă proteinică de o schimbare alelică într-o singură genă implicată în sinteză”. Această concluzie a fost formulată în anul 1949, independent unul de celălalt de E.A. Beet și J.V. Neel aceștia precizând că alela mutantă apare în condiție homozigotă (βSβS) la persoanele suferinde de anemie falciformă și în condiție heterozigotă (βAβS) la persoane aparent sănătoase dar ale căror eritrocite capătă formă de seceră (caracterul sickling), atunci când sunt expuse la condiții de hipoxie experimentală (în laborator
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
au introdus și simbolurile pentru structura genetică, după cum urmează: genotipul normal βAβA, genotipul pentru anemia falciformă βSβS („S” derivat de la Sickle-cell anemia) și genotipul pentru caracterul sickling adică fenotipul celular falciform βAβS, cu genotip heterozigot, respectiv pentru „purtători” ai alelei mutante. În anul 1956, V.M. Ingram lucra în același laborator din Cambridge, în care celebrul Max Perutz își continua cercetările în cristalografie, Francisc Sanger stabilise secvența de aminoacizi a insulinei, iar Crick și Watson elaborase modelul de structură bicatenară a ADN
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
a condus la apariția hemoglobinei anormale HbS se pare că s-a produs într-o regiune a Africii care cuprinde Senegalul, Benin și Bantum și s-a răspândit în toate zonele bântuite de malarie, prin avantajul selectiv pe care alela mutantă l-a conferit purtătorilor ei, față de malarie. În SUA, condiția heterozigotă s-a perpetuat în populația de negrii, aduși ca sclavi din Africa, în urmă cu mai mult de două secole. Modificarea prin substituție sau deleție a secvenței de aminoacizi
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
Modelul ereditar al anemiei falciforme nu este atât de simplu, pe cât pare în aparență. Deoarece cele două alele HbA și HbS sunt în egală măsură funcționale, dar cu eficiență diferită în sinteza tipului corespunzător de catenă β - normală în HbA, mutantă în HbS, se admite caracterul de codominanță al acestui model, în care se exprimă ambele alele, cu apariția unui fenotip nou (HbA - HbS), diferit de cel al formelor homozigote (HbA HbA și HbS HbS). După alte interpretări, în acest caz
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
catenă Hbα alungită. Codonul terminator UAA al mesagerului normal pentru Hbα, prin mutație de substituție (tranziție A → G) sau de transversie A → T) la nivel de ADN, devine, la nivel de ARNm pentru globină, CAA codificator pentru Gln, rezultând hemoglobina mutantă Constant Spring, sau AAA care codifică pentru Lys, rezultând hemoglobina mutantă Icaria. Același codon terminator, prin mutație A → C, devine codonul GAA care codifică pentru Glu, condiționând apariția hemoglobinei mutante Seal Rock, iar când mutația A → G modifică a doua
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
prin mutație de substituție (tranziție A → G) sau de transversie A → T) la nivel de ADN, devine, la nivel de ARNm pentru globină, CAA codificator pentru Gln, rezultând hemoglobina mutantă Constant Spring, sau AAA care codifică pentru Lys, rezultând hemoglobina mutantă Icaria. Același codon terminator, prin mutație A → C, devine codonul GAA care codifică pentru Glu, condiționând apariția hemoglobinei mutante Seal Rock, iar când mutația A → G modifică a doua bază a tripletei de nucleotide, rezultă codonul UCA, codificator pentru Ser
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de ARNm pentru globină, CAA codificator pentru Gln, rezultând hemoglobina mutantă Constant Spring, sau AAA care codifică pentru Lys, rezultând hemoglobina mutantă Icaria. Același codon terminator, prin mutație A → C, devine codonul GAA care codifică pentru Glu, condiționând apariția hemoglobinei mutante Seal Rock, iar când mutația A → G modifică a doua bază a tripletei de nucleotide, rezultă codonul UCA, codificator pentru Ser, condiționând formarea hemoglobinei mutante Koya Dora. Hemoglobina Hb Wayne este determinată de o deleție a celui de al treilea
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
terminator, prin mutație A → C, devine codonul GAA care codifică pentru Glu, condiționând apariția hemoglobinei mutante Seal Rock, iar când mutația A → G modifică a doua bază a tripletei de nucleotide, rezultă codonul UCA, codificator pentru Ser, condiționând formarea hemoglobinei mutante Koya Dora. Hemoglobina Hb Wayne este determinată de o deleție a celui de al treilea nucleotid din cel de al 139-lea codon din ADN, astfel că pentru reconstituirea unui codon funcțional în ARNm este „împrumutat” primul nucleotid al celui
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
clusterului genic, între diferitele gene individuale ale acestuia. Cromozomii cross- over (rezultați în urma unui asemenea schimb nereciproc de material genetic) vor prezenta, unul o deleție, cel de al doilea o duplicație de codoni, respectiv de gene similare, rezultând gene globinice mutante care condiționează sinteza unor hemoglobine anormale denumite GunHill, Lepore și, respectiv, Anti-Lepore (fig. 16.16). Mutațiile frameshift, de schimbare a cadrului de citire conduc la formarea de hemoglobine instabile prin alungirea catenei, ca în cazul hemoglobinei Cranston, în urma conversiei unui
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
mutații au o frecvență mare, prin screening-ul lor se pot elabora programe preventive de diagnostic spre estimarea riscului de boală (Antonarakis și colab., 1985). După datele OMS, aproape 275 milioane de oameni sunt heterozigoți aparent sănătoși, dar purtători de gene mutante ale globinelor, cei mai mulți datorită mutațiilor β-talasemice (peste 60 milioane, în Asia) sau α0 -talasemice (30 milioane, în Asia), HbE/β-talasemici (peste 84 milioane, în Asia) și pentru anemia falciformă (aproximativ 50 milioane, în Africa, și peste 50 milioane, în India
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
sinteza catenei Hbβ este normală. Talasemia α poate fi ocazional asociată cu un număr intact de gene Hbα, după cum rezultă din hibridizarea moleculară. Mecanismele genetice ar putea fi similare cu cele din β-talasemii care nu sunt asociate cu deleția genică. Mutanta de terminare a genei Hbα care apare în cazul sintezei hemoglobinei Constant Spring (HbCoSp) determină o blocare semnificativă a sintezei hemoglobinei și se asociază cu talasemia α, probabil datorită instabilității relative a ARNm pentru HbCoSp. Boala HbH este determinată de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
că în urma mutației s-a pierdut situsul de restricție Dde I. Indivizii heterozigoți (purtători) pentru mutația βS, cu formula genotipică βAβS pot fi detectați prin revelarea a trei benzi electroforetice, una corespunzătoare fragmentului lung de 376 p.n, reprezentând alela mutantă dintr-unul din cei doi cromozomi omologi ai perechii 11, și alte două, de 201 p.n. și 175 p.n., corespunzătoare alelei normale βA, din cel de al doilea cromozom omolog al perechii 11. Testul pentru identificarea heterozigoților (purtătorilor) în analizele
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
introduce între lamă și lamelă și se supune unei atmosfere sărăcite în oxigen, situație în care o parte dintre eritrocite iau formă de seceră, pe când altele (cele cu hemoglobină normală) păstrează formă de disc plat. La persoanele purtătoare ale genei mutante β6 S, 60% din hemoglobină este normală și 40% este de tip mutant, aici fiind vorba de un raport de codominanță între alela normală β6A și alela mutantă β6S. Analiza electroforetică a ADN permite evidențierea mutației punctiforme ce are loc
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
hemoglobină normală) păstrează formă de disc plat. La persoanele purtătoare ale genei mutante β6 S, 60% din hemoglobină este normală și 40% este de tip mutant, aici fiind vorba de un raport de codominanță între alela normală β6A și alela mutantă β6S. Analiza electroforetică a ADN permite evidențierea mutației punctiforme ce are loc în gena pentru catena β, în cazul anemiei falciforme. Această mutație schimbă o pereche A-T într-una T-A la nivel de secvență genică din ADN, afectând
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
GAGG, oferă posibilitatea detecției mutației HbS în ADN din orice celulă a organismului uman. Corespunzând pozițiilor 6 și 7 din β-globină, ocupate de acidul glutamic, catena transcrisă din ADN are secvența CTCCTC, în gena normală și secvența CACCTC, în alela mutantă HbS. Consecințele unei asemenea substituții singulare de nucleotid sunt de-a dreptul dramatice, în cazul anemiei falciforme. O singură transversie A → T induce modificarea codonului GAG, în codonul GTG, la nivelul ADN, și, în virtutea complementarității, a codonului CUC, în codon
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
rezultate în urma acțiunii enzimei de restricție Dde I, prin care se pot evidenția direct cele trei genotipuri posibile: homozigot normal (βAβ A), heterozigot (βAβS) și homozigot mutant (βSβS), această tehnică permițând stabilirea cu exactitate a condiției de purtător al alelei mutante a persoanelor aparent normale (βAβS) care prin testul simplu, de rutină, din cadrul screening-ului populațional se dovedesc a prezenta caracterul sickling (eritrocitele iau formă de seceră, atunci când preparatul hematologic este supus unei concentrații reduse de oxigen). În anumite analize RFLP poate
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
fi încorporată într-unul din primerii utilizați în reacția PCR pentru a modifica comportamentul la denaturare al fragmentului de interes și pentru a îmbunătăți separarea fragmentelor. Ulterior, identificarea și caracterizarea directă a mutațiilor se realizează prin amplificare specifică a alelei mutante cu ajutorul metodei ARMS-PCR sau prin metoda PCR-RFLP. Aceste metode indică exact mutația produsă în gena globinică, fiind și metode de verificare, absolut necesare într-un diagnostic molecular. Metoda ARMS-PCR, descrisa pentru prima dată de Newton și colaboratorii, este o modificare
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
prin simpla examinare a migrării produsului PCR specific prin electroforeză în gel de agaroză. Metoda constă în utilizarea a doi primeri care prezintă aceeași secvență de nucleotide cu excepția nucleotidului terminal 3’, unul complementar cu alela normală, iar celălalt cu alela mutantă. Pentru amplificarea enzimatică se folosește Taq-polimeraza, enzimă care nu are activitate 3’→5’ exonucleazică, ceea ce implică necesitatea unei perfecte complementarități a primerului cu capătul 3’ al matriței ADN. Rezultatul se obține în urma electroforezei în gel de agaroză prin prezența sau
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
fi încorporată într-unul dintre primerii utilizați în reacția PCR pentru a modifica comportamentul la denaturare al fragmentului de interes și pentru a îmbunătăți separarea fragmentelor. Ulterior, identificarea și caracterizarea directă a mutațiilor se realizează prin amplificare specifică a alelei mutante cu ajutorul metodei ARMS-PCR sau prin metoda PCR-RFLP. Aceste metode indică exact mutația produsă în gena globinică, fiind și metode de verificare, absolut necesare într-un diagnostic molecular. Metoda ARMS-PCR (fig. 16.30), descrisă pentru prima dată de Newton și colaboratorii
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
constă în utilizarea, în două reacții PCR separate, a doi primeri ARMS care prezintă aceeași secvență de nucleotide ca și matrița ADN, cu excepția nucleotidului terminal 3’. Un primer este complementar la capătul 3’ cu alela normală, iar celălalt - cu alela mutantă. Pentru amplificarea enzimatică se folosește Taq-polimeraza enzimă care nu are activitate 3’→5’ exonucleazică, ceea ce pentru realizarea polimerizării implică necesitatea unei perfecte complementarități a primerului cu capătul 3’ al matriței ADN. Rezultatul se obține în urma electroforezei în gel de agaroză
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]