54,545 matches
-
CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.6.1. Pregătiri 1.6.1.1. Celule Se folosesc linii celulare stabilite sau culturi de celule primare, de exemplu celule de hamster chinezesc și limfocite umane. Substanțele de testare sunt înglobate în mediul de cultură sau dizolvate într-un excipient corespunzător înainte de tratarea celulelor. 1.6.1.2. Sistemul de activare metabolică Celulele se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem corespunzător
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
exemplu celule de hamster chinezesc și limfocite umane. Substanțele de testare sunt înglobate în mediul de cultură sau dizolvate într-un excipient corespunzător înainte de tratarea celulelor. 1.6.1.2. Sistemul de activare metabolică Celulele se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem corespunzător de activare metabolică. Sistemul utilizat cel mai frecvent este o fracțiune postmitocondrială suplimentată cu un cofactor preparat din ficatul rozătoarelor tratate cu inductori enzimatici. 1.6.2. Condiții experimentale Numărul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
folosesc: solventul (dacă este altul decât mediul de cultură sau apa), amestec hepatic enzimatic activator, amestec hepatic enzimatic activator și solvent și martori netratați. În fiecare experiment se include un martor pozitiv. În cazul în care pentru activarea substanței de testare se folosește mixtura hepatică enzimatică activatoare, este folosit ca martor pozitiv un compus cunoscut că necesită activare metabolică. Doze: Se folosesc cel puțin trei doze din substanța de testare situate în cel puțin un interval logaritmic. Doza maximă inhibă activitatea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
un martor pozitiv. În cazul în care pentru activarea substanței de testare se folosește mixtura hepatică enzimatică activatoare, este folosit ca martor pozitiv un compus cunoscut că necesită activare metabolică. Doze: Se folosesc cel puțin trei doze din substanța de testare situate în cel puțin un interval logaritmic. Doza maximă inhibă activitatea mitotică în proporție de aproximativ 50% sau prezintă câteva alte semne de citotoxicitate. Dacă nu este toxică, substanța se testează până la limita superioară a solubilității sau până la o concentrație
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
și se incubează la 37oC. Limfocite umane: se adaugă sânge heparinizat la mediul de cultură, conținând fitohemaglutinină, ser fetal bovin și antibiotice se adaugă sânge integral heparinizat, incubat la 37°C. 1.6.3.2. Tratarea culturilor cu compusul de testare (i) Tratamentul fără amestec hepatic enzimatic activator Toate tratamentele trebuie să acopere timpul unui ciclu celular complet și schemele de fixare trebuie să asigure analiza primelor mitoze posterioare tratamentului celulelor tratate în diferite stadii de evoluție. Dacă tratamentul nu coincide
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
tratamentul nu coincide cu lungimea unui ciclu celular complet, se aleg timpi de fixare multipli, în vederea prelevării eșantioanelor de celule care se găseau în timpul tratamentului la stadii diferite ale ciclului celular, adică G1, S și G2. Se adaugă substanța de testare la culturile de linii celulare stabilite când acestea se găsesc în faza lor de creștere exponențială. Se tratează culturile de limfocite umane când sunt încă în stare semisincronă. (ii) Tratamentul cu amestec enzimatic hepatic activator Amestecul de activare a enzimelor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
când acestea se găsesc în faza lor de creștere exponențială. Se tratează culturile de limfocite umane când sunt încă în stare semisincronă. (ii) Tratamentul cu amestec enzimatic hepatic activator Amestecul de activare a enzimelor hepatice folosite pentru tratarea substanței de testare se menține prezent cât de mult posibil, fără a exercita un efect toxic asupra celulelor. Dacă, din motive de toxicitate, acest tratament nu acoperă un ciclu celular complet, se aleg timpi de fixare multipli în vederea prelevării eșantioanelor de celule care
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
AL MĂDUVEI OSOASE LA MAMIFERE, ANALIZA CROMOZOMIALĂ) 1. METODĂ 1.1. INTRODUCERE Vezi introducerea generală: partea B (punctul A). 1.2. DEFINIȚIE Vezi introducerea generală: partea B (punctul C). 1.3. SUBSTANȚE DE REFERINȚĂ Nici una. 1.4. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Testul citogenetică in vivo este un test de potențial mutagen pe termen scurt destinat evidențierii aberațiilor cromozomiale structurale. Acestea sunt evaluate, în general, pe parcursul primei mitoze consecutive a tratamentului. Cu mutagenele chimice, majoritatea aberațiilor induse sunt de tip cromatidian. În
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
aberațiilor cromozomiale structurale. Acestea sunt evaluate, în general, pe parcursul primei mitoze consecutive a tratamentului. Cu mutagenele chimice, majoritatea aberațiilor induse sunt de tip cromatidian. În această metodă se folosește măduva osoasă a mamiferelor expuse, prin metode adecvate, la substanțele de testare și sacrificate la intervale succesive. Înainte de a fi sacrificate, animalele sunt tratate cu ajutorul unor substanțe precum: colchinina, care împiedică formarea fusului în vederea acumulării celulelor în stadiul de tip metafază al mitozei (c-metafază). Se realizează preparate cromozomiale pornindu-se de la
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
metafază al mitozei (c-metafază). Se realizează preparate cromozomiale pornindu-se de la celulele uscate la aer, apoi colorate; se analizează apoi metafazele la microscop pentru a evidenția aberațiile cromozomiale. 1.5. CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.6.1. Pregătirea testului Se dizolvă substanțele de testare într-o soluție fiziologică. Dacă sunt substanțe insolubile, acestea se dizolvă sau se pun în suspensie în excipienți adecvați. Se folosesc soluții ale substanței de testare proaspăt preparate. Dacă se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
-se de la celulele uscate la aer, apoi colorate; se analizează apoi metafazele la microscop pentru a evidenția aberațiile cromozomiale. 1.5. CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.6.1. Pregătirea testului Se dizolvă substanțele de testare într-o soluție fiziologică. Dacă sunt substanțe insolubile, acestea se dizolvă sau se pun în suspensie în excipienți adecvați. Se folosesc soluții ale substanței de testare proaspăt preparate. Dacă se folosește un excipient, acesta nu trebuie nici să interfereze cu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.6.1. Pregătirea testului Se dizolvă substanțele de testare într-o soluție fiziologică. Dacă sunt substanțe insolubile, acestea se dizolvă sau se pun în suspensie în excipienți adecvați. Se folosesc soluții ale substanței de testare proaspăt preparate. Dacă se folosește un excipient, acesta nu trebuie nici să interfereze cu substanța de testare, nici să producă efecte toxice. 1.6.2. Condiții experimentale 1.6.2.1. Animale de experiență Se folosesc rozătoare precum: șobolanul, șoarecele
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
soluție fiziologică. Dacă sunt substanțe insolubile, acestea se dizolvă sau se pun în suspensie în excipienți adecvați. Se folosesc soluții ale substanței de testare proaspăt preparate. Dacă se folosește un excipient, acesta nu trebuie nici să interfereze cu substanța de testare, nici să producă efecte toxice. 1.6.2. Condiții experimentale 1.6.2.1. Animale de experiență Se folosesc rozătoare precum: șobolanul, șoarecele sau hamsterul chinezesc. Se repartizează la întâmplare animale tinere și sănătoase în loturi tratate și loturi martor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
sacrifică, deci, zece animale pe perioadă și pe grup, dacă programul experimental include mai multe etape de observație după tratament. Pentru lotul martor pozitiv este suficientă o singură recoltare. 1.6.2.3. Calea de administrare În general, substanțele de testare nu se administrează decât o dată. În funcție de informațiile toxicologice de care se dispune, se poate folosi un program de administrare repetată. Totuși, acesta nu poate fi folosit decât dacă substanța de testare nu are un efect citotoxic asupra măduvei osoase. Administrarea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
2.3. Calea de administrare În general, substanțele de testare nu se administrează decât o dată. În funcție de informațiile toxicologice de care se dispune, se poate folosi un program de administrare repetată. Totuși, acesta nu poate fi folosit decât dacă substanța de testare nu are un efect citotoxic asupra măduvei osoase. Administrarea se face în general pe cale orală sau prin injecție intraperitoneală. Sunt adecvate și alte căi de administrare. 1.6.2.4. Folosirea martorilor negativi și pozitivi Ca martor pozitiv se folosește
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
un compus despre care se știe că produce aberații cromozomiale in vivo. De asemenea, trebuie inclus și un lot martor negativ (tratat cu solvent). 1.6.2.5. Doze Pentru dosarul de bază, se folosește o doză din substanța de testare, respectiv doza maximă tolerată sau cea care determină apariția unor semne de citotoxicitate (de exemplu, o inhibare parțială a mitozei). Pentru compușii "netoxici", doza maximă (limită) care trebuie investigată în urma administrării unei singure doze, este de 2000 mg/kg masă
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
mai mare doză tolerată. În prima etapă, probele sunt prelevate la 24 de ore după tratament. Nu mai sunt necesare prelevări ulterioare dacă în acest stadiu rezultatele sunt cert pozitive. Deoarece cinetica ciclului celular poate fi influențată de substanța de testare, se folosește un moment de prelevare precoce și unul tardiv, spațiate în mod convenabil în intervalul 6 - 48 de ore. Pentru alte niveluri suplimentare ale dozei de tratament, probele trebuie luate în intervalul cel mai sensibil sau, dacă acestea nu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
punctul E). B12. MUTAGENEZA (TESTUL MICRONUCLEILOR CELULARI) 1. METODĂ 1.1. INTRODUCERE Vezi introducerea generală: partea B (punctul A). 1.2. DEFINIȚIE Vezi introducerea generală: partea B (punctul C). 1.3. SUBSTANȚE DE REFERINȚĂ Nici una. 1.4. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Testul micronucleului este un test in vivo pe termen scurt destinat evidențierii leziunilor cromozomiale sau a celor ale aparatului mitotic induse prin substanțe chimice. Acest test se bazează pe o creștere a numărului de micronuclee în eritrocitele policromatice ale animalelor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
în eritrocite, nucleul principal este expulzat, în timp ce micronucleul poate fi conservat în citoplasmă. Pentru acest test se folosesc eritrocite policromatice tinere care provin din măduva osoasă a mamiferelor de laborator care au fost expuse, pe căi adecvate, la substanța de testare. După extragerea măduvei osoase, se pregătesc și se colorează frotiuri. Se numără la microscop numărul de micronuclee prezente în eritrocitele policromatice și se stabilește raportul între eritrocitele policromatice și normocromatice. 1.5. CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
extragerea măduvei osoase, se pregătesc și se colorează frotiuri. Se numără la microscop numărul de micronuclee prezente în eritrocitele policromatice și se stabilește raportul între eritrocitele policromatice și normocromatice. 1.5. CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.6.1. Pregătiri Se dizolvă substanțele de testare într-o soluție izotonică. Dacă sunt insolubile, acestea se dizolvă sau se pun în suspensie în excipienți adecvați. Dacă se folosește un excipient, acesta nu trebuie nici să interfereze cu substanța
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
Se numără la microscop numărul de micronuclee prezente în eritrocitele policromatice și se stabilește raportul între eritrocitele policromatice și normocromatice. 1.5. CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.6.1. Pregătiri Se dizolvă substanțele de testare într-o soluție izotonică. Dacă sunt insolubile, acestea se dizolvă sau se pun în suspensie în excipienți adecvați. Dacă se folosește un excipient, acesta nu trebuie nici să interfereze cu substanța de testare, nici să producă efecte toxice. În general
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
6.1. Pregătiri Se dizolvă substanțele de testare într-o soluție izotonică. Dacă sunt insolubile, acestea se dizolvă sau se pun în suspensie în excipienți adecvați. Dacă se folosește un excipient, acesta nu trebuie nici să interfereze cu substanța de testare, nici să producă efecte toxice. În general, se folosesc soluții ale substanței de testare proaspăt preparate. 1.6.2. Condiții experimentale 1.6.2.1. Animale de experiență Șoarecii sunt specia recomandată, dar se pot folosi și alte mamifere. Animalele
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
insolubile, acestea se dizolvă sau se pun în suspensie în excipienți adecvați. Dacă se folosește un excipient, acesta nu trebuie nici să interfereze cu substanța de testare, nici să producă efecte toxice. În general, se folosesc soluții ale substanței de testare proaspăt preparate. 1.6.2. Condiții experimentale 1.6.2.1. Animale de experiență Șoarecii sunt specia recomandată, dar se pot folosi și alte mamifere. Animalele adulte, tinere și sănătoase se distribuie aleatoriu în loturi tratate și loturi martor. 1
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
distribuie aleatoriu în loturi tratate și loturi martor. 1.6.2.2. Număr și sex Se folosesc cel puțin 5 femele și 5 masculi pentru fiecare lot tratat și martor. Dacă în planul experimentului sunt prevăzute mai multe etape de testare după tratament, se sacrifică zece animale pentru fiecare etapă și lot. Pentru lotul martor pozitiv este suficientă o singură recoltare. 1.6.2.3. Calea de administrare În general, substanțele de testare nu se administrează decât o dată. În funcție de informațiile toxicologice
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
planul experimentului sunt prevăzute mai multe etape de testare după tratament, se sacrifică zece animale pentru fiecare etapă și lot. Pentru lotul martor pozitiv este suficientă o singură recoltare. 1.6.2.3. Calea de administrare În general, substanțele de testare nu se administrează decât o dată. În funcție de informațiile toxicologice de care se dispune, se poate folosi un program de administrare repetată. Totuși, acesta nu poate fi folosit decât dacă substanța de testare nu are un efect citotoxic asupra măduvei osoase. Administrarea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]