54,545 matches
-
2.3. Calea de administrare În general, substanțele de testare nu se administrează decât o dată. În funcție de informațiile toxicologice de care se dispune, se poate folosi un program de administrare repetată. Totuși, acesta nu poate fi folosit decât dacă substanța de testare nu are un efect citotoxic asupra măduvei osoase. Administrarea se face în general pe cale orală sau prin injecție intraperitoneală. Sunt adecvate și alte căi de administrare. 1.6.2.4. Folosirea martorilor negativi și pozitivi Pentru fiecare experiment se folosesc
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
2.4. Folosirea martorilor negativi și pozitivi Pentru fiecare experiment se folosesc atât un lot martor pozitiv cât și unul negativ (tratat cu solvent). 1.6.2.5. Doze Pentru dosarul de bază, se folosește o doză din substanța de testare, respectiv doza maximă tolerată sau cea care determină apariția unor semne de citotoxicitate (de exemplu, o inhibare parțială a mitozei). Pentru compușii "netoxici", doza maximă (limită) care trebuie investigată în urma administrării unei singure doze, este de 2000 mg/kg masă
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
TESTUL DE MUTAȚIE REVERSĂ PE ESCHERICHIA COLI) 1. METODĂ 1.1. INTRODUCERE Vezi introducerea generală: partea B (punctul A). 1.2. DEFINIȚIE Vezi introducerea generală: partea B (punctul C). 1.3. SUBSTANȚE DE REFERINȚĂ Nici una. 1.4. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Sistemul de reversie cu triptofan al E. coli (trp) este un test microbian care permite măsurarea reversiei trp-→trp+ datorată unor substanțe chimice responsabile de substituția de bază la nivelul genomului uman. Se expun bacteriile la substanțele de testare cu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
DE TESTARE Sistemul de reversie cu triptofan al E. coli (trp) este un test microbian care permite măsurarea reversiei trp-→trp+ datorată unor substanțe chimice responsabile de substituția de bază la nivelul genomului uman. Se expun bacteriile la substanțele de testare cu sau fără activare metabolică. După o perioadă de incubație adecvată minimă pe mediul în cauză, se numără coloniile derivate prin reversie și se compară numărul obținut cu cel al revertanților spontani observați într-o cultură martor netratată și / sau
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
în cauză, se numără coloniile derivate prin reversie și se compară numărul obținut cu cel al revertanților spontani observați într-o cultură martor netratată și / sau în prezența solventului. 1.5. CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE Testul se poate realiza prin metodele următoare: (1) metoda preincubării; (2) metoda incorporării directe în care bacteriile și substanța de testare se amestecă cu agar-agar de acoperire și se varsă la suprafața unei cutii de agar-agar selectiv. 1.6.1
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
cultură martor netratată și / sau în prezența solventului. 1.5. CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE Testul se poate realiza prin metodele următoare: (1) metoda preincubării; (2) metoda incorporării directe în care bacteriile și substanța de testare se amestecă cu agar-agar de acoperire și se varsă la suprafața unei cutii de agar-agar selectiv. 1.6.1. Pregătire 1.6.1.1. Bacterii Se cultivă bacteriile la 37șC până la faza exponențială tardivă sau faza staționară precoce a creșterii
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
1.1. Bacterii Se cultivă bacteriile la 37șC până la faza exponențială tardivă sau faza staționară precoce a creșterii. Densitatea celulară aproximativă trebuie să fie de 108 - 109 celule/ml. 1.6.1.2. Activare metabolică Bacteriile tratate cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem de activare metabolică adecvat. Cel mai frecvent folosit sistem este o fracțiune postmitocondrială completată cu un cofactor, preparată din ficat de rozătoare tratate cu inductori enzimatici. 1.6.2. Condiții experimentale
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
sau etilnitrozoureea. (ii) pentru a asigura acțiunea activatorului de sistem metabolic. Unul din martorii pozitivii pentru activatorul sistemului metabolic pentru toate liniile este 2-aminoantracenul. Dacă este disponibil, se recomandă folosirea unui martor pozitiv din aceeași clasă ca și substanța de testare. 1.6.2.4. Concentrația substanței de testare per placă Se testează cel puțin cinci concentrații diferite de substanță, alese în progresie semilogaritmică. Substanțele se testează până la limita solubilității sau toxicității. Toxicitatea este evidențiată printr-o reducere a numărului de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
de sistem metabolic. Unul din martorii pozitivii pentru activatorul sistemului metabolic pentru toate liniile este 2-aminoantracenul. Dacă este disponibil, se recomandă folosirea unui martor pozitiv din aceeași clasă ca și substanța de testare. 1.6.2.4. Concentrația substanței de testare per placă Se testează cel puțin cinci concentrații diferite de substanță, alese în progresie semilogaritmică. Substanțele se testează până la limita solubilității sau toxicității. Toxicitatea este evidențiată printr-o reducere a numărului de colonii care suferă reversii spontane, o limpezire a
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
testul negativ. 1.6.2.5. Condiții de incubație Cutiile se incubează la 37șC timp de 48 - 72 de ore. 1.6.3. Mod de operare În metoda de încorporare directă pe cutie fără activare enzimatică, se adaugă substanța de testare și 0,1 ml de cultură bacteriană proaspătă la 2 ml de agar-agar de acoperire. Pentru testele cu activare metabolică, se adaugă la agar-agar 0,5 ml de amestec de activare de enzime hepatice conținând o cantitate adecvată de fracțiune
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
cultură bacteriană proaspătă la 2 ml de agar-agar de acoperire. Pentru testele cu activare metabolică, se adaugă la agar-agar 0,5 ml de amestec de activare de enzime hepatice conținând o cantitate adecvată de fracțiune postmitocondrială, după adăugarea substanței de testare și a bacteriilor. Conținutul fiecărui tub se amestecă și se varsă la suprafața unei cutii de agar-agar selectiv. Agar-agarul de acoperire se solidifică, iar cutiile se incubează la 37șC timp de 48 până la 72 de ore. La sfârșitul perioadei de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
solidifică, iar cutiile se incubează la 37șC timp de 48 până la 72 de ore. La sfârșitul perioadei de incubație, se numără coloniile derivate prin reversie pe cutie. Pentru metoda de preincubare, se incubează în prealabil un amestec conținând substanța de testare, 0,1 ml de cultură bacteriană proaspătă și o cantitate adecvată de amestec de activare de enzime hepatice sau aceeași cantitate de soluție tampon, înainte de adăugarea a 2,0 ml de agar-agar de acoperire. Restul modului de operare este identic
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
pregătite pentru cele două metode se pregătesc în cel puțin trei exemplare. 2. DATE Atât pentru seriile martor cât și pentru cele tratate, se prezintă numărul de colonii în care s-au produs reversii pe fiecare cutie. Pentru substanța de testare și pentru martori se prezintă rezultatele pentru fiecare cutie, numărul mediu per cutie al coloniilor derivate prin reversie și deviația standard. Rezultatele se evaluează prin metode statistice adecvate. Se efectuează cel puțin două experimente independente. Nu este obligatoriu ca al
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
coloniilor derivate prin reversie și deviația standard. Rezultatele se evaluează prin metode statistice adecvate. Se efectuează cel puțin două experimente independente. Nu este obligatoriu ca al doilea experiment să se desfășoare în mod identic cu experimentul inițial. Anumite condiții de testare pot fi modificate pentru a obține mai multe rezultate utile. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul de test conține, dacă este posibil, următoarele informații: - bacterii, linii folosite; - condiții experimentale: doze, toxicitate, compoziția mediilor de cultură, metodele de tratament
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
TEST DE MUTAȚIE REVERSĂ PE SALMONELLA TYPHIMURIUM ) 1. METODĂ 1.1. INTRODUCERE Vezi introducerea generală: partea B (punctul A). 1.2. DEFINIȚIE Vezi introducerea generală: partea B (punctul C). 1.3. SUBSTANȚE DE REFERINȚĂ Nici una. 1.4. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Sistemul de reversie cu histidină (his) al Salmonella typhimurium este un test microbian care permite măsurarea reversiei his- - his+ indusă de substanțe chimice responsabile pentru substituția de bază sau a mutațiilor care deplasează cadrul de citire în genomul organismului. Se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
his) al Salmonella typhimurium este un test microbian care permite măsurarea reversiei his- - his+ indusă de substanțe chimice responsabile pentru substituția de bază sau a mutațiilor care deplasează cadrul de citire în genomul organismului. Se expun bacteriile la substanța de testare cu sau fără activare metabolică și se varsă la suprafața unui mediu minim. După o perioadă de incubație adecvată, se numără coloniile derivate prin reversie și se compară numărul obținut cu cel al revertanților spontani observați într-o cultură martor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
incubație adecvată, se numără coloniile derivate prin reversie și se compară numărul obținut cu cel al revertanților spontani observați într-o cultură martor netratată și/sau în prezența solventului. 1.5. CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.6.1. Pregătiri 1.6.1.1. Bacterii Culturile proaspete de bacterii se incubează la 37șC până la faza exponențială tardivă sau faza staționară precoce a creșterii. Densitatea celulară aproximativă trebuie să fie 108 - 109 celule pe mililitru. 1.6
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
proaspete de bacterii se incubează la 37șC până la faza exponențială tardivă sau faza staționară precoce a creșterii. Densitatea celulară aproximativă trebuie să fie 108 - 109 celule pe mililitru. 1.6.1.2. Activare metabolică Bacteriile se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem de activare metabolică adecvat. Sistemul cel mai frecvent folosit este o fracțiune postmitocondrială la care se adaugă un cofactor preparat din ficat de rozătoare tratate cu inductori enzimatici. 1.6.2
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
de cumen (ii) pentru a asigura acțiunea activatorului de sistem metabolic. Unul din martorii pozitivii pentru activatorul sistemului metabolic pentru toate liniile este 2-aminoantracenul. Dacă este disponibil, se recomandă folosirea unui martor pozitiv din aceeași clasă ca și substanța de testare. 1.6.2.4. Concentrația substanței testate per placă Se testează cel puțin cinci concentrații diferite de substanță, alese în progresie semilogaritmică. Substanțele se testează până la limita solubilității sau toxicității. Toxicitatea este evidențiată printr-o reducere a numărului de colonii
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
testul negativ. 1.6.2.5. Condiții de incubație Plăcile se incubează la 37șC între 48 și 72 de ore. 1.6.3. Mod de operare În metoda de încorporare directă pe cutie fără activare enzimatică, se adaugă substanța de testare și 0,1 ml de cultură bacteriană proaspătă la 2 ml de agar-agar de acoperire. Pentru testele cu activare metabolică, se adaugă la agar-agar 0,5 ml de amestec de activare de enzime hepatice conținând o cantitate adecvată de fracțiune
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
cultură bacteriană proaspătă la 2 ml de agar-agar de acoperire. Pentru testele cu activare metabolică, se adaugă la agar-agar 0,5 ml de amestec de activare de enzime hepatice conținând o cantitate adecvată de fracțiune postmitocondrială, după adăugarea substanței de testare și a bacteriilor. Conținutul fiecărui tub se amestecă și se varsă la suprafața unei cutii de agar-agar selectiv. Agar-agarul de acoperire se solidifică, iar cutiile se incubează la 37șC timp de 48 până la 72 de ore. La sfârșitul perioadei de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
solidifică, iar cutiile se incubează la 37șC timp de 48 până la 72 de ore. La sfârșitul perioadei de incubație, se numără coloniile derivate prin reversie pe cutie. Pentru metoda de preincubare, se incubează în prealabil un amestec conținând substanța de testare, 0,1 ml de cultură bacteriană proaspătă și o cantitate adecvată de amestec de activare de enzime hepatice sau aceeași cantitate de soluție tampon, înainte de adăugarea a 2,0 ml de agar-agar de acoperire. Restul modului de operare este identic
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
pe cutie. Toate cutiile pregătite pentru cele două metode se pregătesc în cel puțin trei exemplare. 2. DATE Numărul per cutie al coloniilor derivate prin reversie este prezentat atât pentru seriile martor cât și pentru cele tratate. Pentru substanța de testare și pentru martori sunt prezentate rezultatele pentru fiecare cutie, numărul mediu per cutie al coloniilor derivate prin reversie și deviația standard. Rezultatele se evaluează prin metode statistice adecvate. Trebuie realizate cel puțin două experimente independente. Nu este obligatoriu ca al
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
coloniilor derivate prin reversie și deviația standard. Rezultatele se evaluează prin metode statistice adecvate. Trebuie realizate cel puțin două experimente independente. Nu este obligatoriu ca al doilea experiment să se desfășoare în mod identic cu experimentul inițial. Anumite condiții de testare pot fi modificate pentru a obține mai multe rezultate utile. 3. DATE Numărul per cutie al coloniilor derivate prin reversie este prezentat atât pentru seriile martor cât și pentru cele tratate. Pentru substanța de testare și pentru martori sunt prezentate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
experimentul inițial. Anumite condiții de testare pot fi modificate pentru a obține mai multe rezultate utile. 3. DATE Numărul per cutie al coloniilor derivate prin reversie este prezentat atât pentru seriile martor cât și pentru cele tratate. Pentru substanța de testare și pentru martori sunt prezentate rezultatele pentru fiecare cutie, numărul mediu per cutie al coloniilor derivate prin reversie și deviația standard. Rezultatele se evaluează prin metode statistice adecvate. Trebuie realizate cel puțin două experimente independente. Nu este obligatoriu ca al
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]