13,759 matches
-
ultracentrifugarea celulelor de cultură MT-2. Au rezultat fracțiuni rupte din celulele inițial integre. În lichidul de cultură al acestor fracțiuni celulare au fost descoperite particule având o densitate similară cu cea a unor retrovirusuri animale cunoscute în acel moment. Respectivele particule au fost purificate iar din ele a fost preparat un cADN, cu ajutorul unui revers transcriptaze endogene (prezentă și ea în acele particule). În ultimă instanță, s-a văzut că preparatul c ADN lubridează cu ADN-ul celular din celulele de
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
fost descoperite particule având o densitate similară cu cea a unor retrovirusuri animale cunoscute în acel moment. Respectivele particule au fost purificate iar din ele a fost preparat un cADN, cu ajutorul unui revers transcriptaze endogene (prezentă și ea în acele particule). În ultimă instanță, s-a văzut că preparatul c ADN lubridează cu ADN-ul celular din celulele de cultură MT-2, dar în nici un caz cu ADN-ul extras din oricare alte celule ale organismului. Această probă de genetică moleculară dovedea
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
aceste celule somatice ca și în celulele germinative (și care persistă sute de generații în culturi celulare, fără o producție evidentă de virus). Teoria susține conjectural Rememorări istorice: de la „discrazia” canceroasă la oncogeneza plurifactorială existența de virogene endogene (codificatoare de particule C) și oncogene (responsabile cu transformarea oncogenă a celulelor normale) care sunt ținute neexprimate prin mecanisme efectuate de represori din celulele normale. În acest mod, variați agenți fizico-chimici carcinogeni ca radiațiile, carcinogenii chimici, virusurile exogene, pot declanșa exprimarea acestei „informații
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
aripi, fenomen observat la musculița de oțet (Drosophila), celebra „insectă-cobai“ a geneticii celulare, care l-a făcut atât de cunoscut în anii ’30 pe Th. H. Morgan. Lipsa aripilor la Drosophila este o consecință a funcționării defectuoase a genei Wnt. Particula nt este o componentă a numelui altei gene, de data aceasta de la șoarece (Int). Așa cum se observă în fig. 2-28, și ligandul Wnt este prins de: b) Receptorul Frizzled (engl. = ondulat), respectiva unire producându-se cu ajutorul unor co-factori. Partea catalitică
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
protozoar ciliat, Tetrahymena thermophila, care, spre deosebire de alte eucariote, posedă un micronucleu cu setul normal de cromozomi și în adiție un macronucleu cu cromozomi fragmentați în multiple segmente mici de ADN, cu aceleași gene ca și cele pentru ARN ribosomal. Această particula ritate a făcut posibilă determinarea secvențelor ADN extra cromo zomial, a cărui capete prezintă multiple repetiții ale unui hexanucleotid CCCCAA, găsit și la ADNul din micronuclei. Pentru a clarifica această observație, Elizabeth H. Blackburn l-a asociat în investigații pe
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
caracte rizată printr-o viață limitată. Trei linii celulare transformate au indus tumori la animalul de aceeași specie. Din aceste tumori au fost inițiate culturi in vitro, evidențiin du-se prezența antigenului viral în toate trei cazurile, precum și prezența de particule herpes-like în celulele liniei T-TR 1, testate prin examinare la microscopul electronic. De regulă, nu s-a demonstrat prezența de virus infectant nici în celulele liniilor transformate și nici în celulele liniilor tumorale testate. Astfel, Georgeta Danielescu și colab
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
se înțeleagă rolul pe care aceste „micromalaxoare chimice“ îl vor juca în dezasamblarea marilor molecule de proteine dezafectate fiziologic (D. nandi). Subcomponentele proteasomului sunt definite prin coeficientul lor de sedimentare moleculară de aprox. 2000 kilodaltoni (K Da). El conține o particulă miez de 20S și două capete reglatorii de 19S. Așa cum se observă din fig. 4-13, proteasomii sunt formați din patru nivele de molecule. Cele două de la extremități, subunitățile alfa, au rol structural (de susținere a edificiului), în timp ce subunitățile mijlocii, beta
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
subunitățile alfa, au rol structural (de susținere a edificiului), în timp ce subunitățile mijlocii, beta, secretă proteaze ce vor descompune moleculele de proteină „condamnate“ (marcate cu ubiquitină). Fig. 4-16. Structura schematică a proteasomilor. În registrul superior sunt marcate capetele (cărămizii) formate din particule de 11S, care reglează intrarea marilor molecule de proteine rezultate din procesul apoptotic în camera de dezasamblare (colorată în albastru). În registrul inferior sunt indicate cele patru etaje structurale de câte șapte elemente, fiecare la 20S. La extremități, elementele alfa
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
și au rol mixt, de susținere și proteoliză. În celulele eucariote de la animalele superioare, se constată însă o largă diferențiere structurală și funcțională. S. nandi descrie, în 2006, mai multe tipuri de subunități alfa, unele cu rol de stocare pentru particule reglatorii (există și un proces aparte, de reglare a funcționării proteasomului), altele care blochează accesul „necomandat“ (anarhic) al proteinelor „condamnate“ în interiorul cavității etc. În 2007 au fost diferențiate, în cadrul familiei de subcomponente beta, unități cu roluri fiziologice diferite: particule beta
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
pentru particule reglatorii (există și un proces aparte, de reglare a funcționării proteasomului), altele care blochează accesul „necomandat“ (anarhic) al proteinelor „condamnate“ în interiorul cavității etc. În 2007 au fost diferențiate, în cadrul familiei de subcomponente beta, unități cu roluri fiziologice diferite: particule beta chimiotripsin-like tripsin-like: peptidil-glutamil-peptid-hidrolizante ș.a. Proteasomii pot exprima și valențe de răspuns față de diverși stimuli din ambient. Astfel, ca răspuns la semnale pro-inflamatorii, ca de pildă față de citokine, apar proteasomi „înarmați“ cu alte specificități de substrat, ca de pildă beta
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
Temin și Harry Rubin,8 tineri cercetători din laboratorul lui Renato Dulbecco, care în 1958 au introdus metoda acoperirii monostratului de fibroblaste infectate cu diferite diluții de RSV, cu un strat subțire de agar.9 Astfel, a fost împiedicată difuzarea particulelor virale de la o celulă infectată inițial la cele din jurul ei, pe suprafața monostratului putându-se citi doar „original foci“. Respectiva tehnică, socotită a fi fost o adevărată revoluție în cuantificarea retrovirusurilor oncogene, a permis studiul interacțiunii dintre o celulă singulară
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
celulă infectată inițial la cele din jurul ei, pe suprafața monostratului putându-se citi doar „original foci“. Respectiva tehnică, socotită a fi fost o adevărată revoluție în cuantificarea retrovirusurilor oncogene, a permis studiul interacțiunii dintre o celulă singulară și o unică particulă virală. E. Descoperirea fenomenului de replicare defectivă și nondefectivă, ca premiză a înțelegerii transformării canceroase la nivel molecular. Încă dinainte de anii ’40 ai secolului XX, Peyton Rous a remarcat un fapt ce părea să contrazică „adevăruri clasice“ în virusologia acelor
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
disecția amănunțită a genomului mai multor retrovirusuri, atât animale (în primul rând „istoricul“ RSV, apoi a unor retrovirusuri de la alte păsări și mamifere sălbatice și domestice) cât și umane. 5.2.1. Structura virionului și modul său de multiplicare O particulă clasică de retrovirus (zis „minimal“, conține, privită dinspre exterior către interior ca în fig. 5-2): a) o anvelopă proteinică ce derivă din membrana plasmatică a celulei gazdă; b) o capsidă, tot un înveliș proteinic; c) două molecule de ARN și
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
le înmulțească într-un timp cât mai scurt; c) în fine, genomul retrovirusurilor mai conține și unele „secvențe de semnal de împachetare“ (p engl. Packing signal) care fac ca noile molecule de ARN nou sintetizat să poată fi încorporate în particule virale proaspete (fig. 5-1). Despre cea de-a patra genă, - v-Src - care nu e implicată în dinamica multiplicării virale, în schimb joacă rolul determinant în cancerizarea celulei gazdă, vom vorbi pe larg în paginile care urmează. Aceasta pentru că ea a
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
care urmează. Aceasta pentru că ea a constituit un adevărat „cal troian“ în cucerirea primelor certitudini ale rolului jucat în geneza neoplaziilor animale și umane de către virusurile oncogene (în special retrovirusuri. A se vedea pp. 288-292). Fig. 5-2. Structura schematizată a particulei „clasice“ de retrovirus. În registrul superior, porțiunea ARn care conține genomul. Se disting genele Gag, Pol și env. În registrul inferior se disting: anvelopa proteinică cu receptori (codificată de gena enu), capsida proteinică, iar în interiorul acesteia genomul, format din cele
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
secvență LTR (U3-R-U5) absentă la ARN-ul viral infecțios și confecționată printr-un mecanism complex, cu ocazia integrării în genomul celulei gazdă. Această LTR conține semnalele necesare pentru transcripție de către ARN polimeraza II celulară și de maturare a transcriptului. 1. Particula virală completă conținând anvelopa, capsida cu ARn-ul codificator (roșu) și reverstranscriptaza (galben) se adsoarbe pe receptorul de pe suprafața membranei plasmatice. 2. Complexul ARn + reverstranscriptază pătrunde în celula victimă; 3. Reverstranscriptaza catalizează înscrierea mesajului adus de catena + de ARn într-o
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
G. Steven Martin,15 descoperitorul v-Src, o schemă privind relația de strictă determinare fenotipală și de replicare defectivă / nondefectivă a trei variante de virioni ai RSC (fig. 5-5). În figură trebuie urmărit modul în care genele care compun genomul respectivelor particule de RSV își impun influența codificatoare asupra elaborării unor particule proteinice ce intervin în replicarea defectivă și în transformarea defectivă. Replicarea non-defectivă: genomul viral conține toate cele patru gene și anume, trei implicate în multiplicarea particulei virale: gag, pol și
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
de strictă determinare fenotipală și de replicare defectivă / nondefectivă a trei variante de virioni ai RSC (fig. 5-5). În figură trebuie urmărit modul în care genele care compun genomul respectivelor particule de RSV își impun influența codificatoare asupra elaborării unor particule proteinice ce intervin în replicarea defectivă și în transformarea defectivă. Replicarea non-defectivă: genomul viral conține toate cele patru gene și anume, trei implicate în multiplicarea particulei virale: gag, pol și env și una, v-Src, care codifică proteine oncogene ce impun
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
care compun genomul respectivelor particule de RSV își impun influența codificatoare asupra elaborării unor particule proteinice ce intervin în replicarea defectivă și în transformarea defectivă. Replicarea non-defectivă: genomul viral conține toate cele patru gene și anume, trei implicate în multiplicarea particulei virale: gag, pol și env și una, v-Src, care codifică proteine oncogene ce impun transformarea fenotipului celular normal (fibroblastic, experimentele fiind efectuate pe culturi de fibroblaste embrionare de Gallus domesticus) în fenotip neoplazic. Este cazul unor sușe virale de RSV
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
transformante. În terminologia lui Peter H. Duesberg și Peter K. Vogt elaborată în 1970, acestea sunt subunități de tip a. Replicarea defectivă realizată în cazul: - unei mutații care a anihilat funcțional gena env (codificatoare de glico proteine pentru anvelopa noilor particule de virus; | 2875. Contribuția oncovirusologiei la descifrarea mecanismelor moleculare ale carcinogenezei în general - unor variante ale sușei Bryan în care lipsește și gena Pol (care codifică asamblarea structurală a reverstranscriptazei, absolut necesară transcrierii ARN viral în ADN-ul celulei agresate
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
ale carcinogenezei în general - unor variante ale sușei Bryan în care lipsește și gena Pol (care codifică asamblarea structurală a reverstranscriptazei, absolut necesară transcrierii ARN viral în ADN-ul celulei agresate). În ambele situații, celula singulară infectată cu o unică particulă virală se transformă în sens neoplazic, dar fie că nu eliberează particule noi de virus infecțios, fie că eliberează totuși particule noi de virus, dar acestea nu sunt infectante (ca în cazul tulpinei Bryan). Suprainfectarea cu un virus helper din
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
și gena Pol (care codifică asamblarea structurală a reverstranscriptazei, absolut necesară transcrierii ARN viral în ADN-ul celulei agresate). În ambele situații, celula singulară infectată cu o unică particulă virală se transformă în sens neoplazic, dar fie că nu eliberează particule noi de virus infecțios, fie că eliberează totuși particule noi de virus, dar acestea nu sunt infectante (ca în cazul tulpinei Bryan). Suprainfectarea cu un virus helper din familia leucozelor aviare (RAV), face ca celula să devină productivă, eliberând particule
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
absolut necesară transcrierii ARN viral în ADN-ul celulei agresate). În ambele situații, celula singulară infectată cu o unică particulă virală se transformă în sens neoplazic, dar fie că nu eliberează particule noi de virus infecțios, fie că eliberează totuși particule noi de virus, dar acestea nu sunt infectante (ca în cazul tulpinei Bryan). Suprainfectarea cu un virus helper din familia leucozelor aviare (RAV), face ca celula să devină productivă, eliberând particule infecțioase de RSV (particule de tip C). Multiplicarea virală
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
particule noi de virus infecțios, fie că eliberează totuși particule noi de virus, dar acestea nu sunt infectante (ca în cazul tulpinei Bryan). Suprainfectarea cu un virus helper din familia leucozelor aviare (RAV), face ca celula să devină productivă, eliberând particule infecțioase de RSV (particule de tip C). Multiplicarea virală fără transformare neoplazică (transformare defectivă), situație prezentată schematic în partea dreaptă a fig. 5-5 poate fi întâlnită și la unele mutante ale virusului Rous. Genomul viral conține, așa cum se observă, toate
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]
-
infecțios, fie că eliberează totuși particule noi de virus, dar acestea nu sunt infectante (ca în cazul tulpinei Bryan). Suprainfectarea cu un virus helper din familia leucozelor aviare (RAV), face ca celula să devină productivă, eliberând particule infecțioase de RSV (particule de tip C). Multiplicarea virală fără transformare neoplazică (transformare defectivă), situație prezentată schematic în partea dreaptă a fig. 5-5 poate fi întâlnită și la unele mutante ale virusului Rous. Genomul viral conține, așa cum se observă, toate cele trei gene care
Oncogeneza virală by Petre Calistru, Radu Iftimovici, Ileana Constantinescu, Petre-Adrian Muțiu () [Corola-publishinghouse/Science/91991_a_92486]