3,074 matches
-
T) de scăderea vâscozității cu 50 % (notat T 50) este direct proporțional cu activitatea enzimei care se exprimă în unități. O unitate de endo-poligalacturonoză este cantitatea de enzimă care în condițiile menționate (9 ml substrat 1 % și 1 ml preparat enzimatic, la pH = 4 și la temperatură 30 C) determină reducerea vâscozității pectinei sau acidului poligalacturonic, cu 50 % în timp de 10 minute (T50 = 10, respectiv 1/T = 0,1). Pentru exprimarea directă în unități de endo poligalacturonază = 1/T50, activitatea
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
determină reducerea vâscozității pectinei sau acidului poligalacturonic, cu 50 % în timp de 10 minute (T50 = 10, respectiv 1/T = 0,1). Pentru exprimarea directă în unități de endo poligalacturonază = 1/T50, activitatea se calculează în unități pentru 1 ml extract enzimatic nediluat sau 1 g preparat enzimatic uscat. X.2.2. DETERMINAREA ACTIVITĂȚII EXO - POLIGALACTURONAZEI Determinarea activității exo - poligalacturonazei se realizează prin urmărirea creșterii puteri reducătoare a sistemului de reacție care conține pectină sau acid poligalacturonic (substrat) și enzime pectolitice. În urma
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
poligalacturonic, cu 50 % în timp de 10 minute (T50 = 10, respectiv 1/T = 0,1). Pentru exprimarea directă în unități de endo poligalacturonază = 1/T50, activitatea se calculează în unități pentru 1 ml extract enzimatic nediluat sau 1 g preparat enzimatic uscat. X.2.2. DETERMINAREA ACTIVITĂȚII EXO - POLIGALACTURONAZEI Determinarea activității exo - poligalacturonazei se realizează prin urmărirea creșterii puteri reducătoare a sistemului de reacție care conține pectină sau acid poligalacturonic (substrat) și enzime pectolitice. În urma acțiunii acestor enzime asupra substratului se
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
Într-un flacon iodometric se pipetează 10 ml substrat pectină sau acid poligalacturonic 1% (până la pH=4) și 9 ml apă distilată. Amestecul se menține la termostat la 30 C timp de 10 minute, apoi se adaugă 1 ml extract enzimatic și se omogenizează bine. Imediat se iau 5 ml din amestec și se introduc în alt flacon iodometric care conține 1 ml carbonat de sodiu 1M (proba martor, respectiv timpul zero de acțiune al enzimei). Cei 15 ml de amestec
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
aminoacizi. Sunt secretate de pancreas sub formă inactivă de prCarboxipeptidaze, care prin intervenția tripsinei (în intestin) se transformă în carboxipeptidaze active. Sunt metal-enzime care conțin Zn2+. Principiul metodei Metoda se bazează pe determinarea produșilor de hidroliză rezultați în urma acțiunii preparatului enzimatic asupra unui substrat (cazeină, hemoglobină sau altă proteină). Produșii de hidroliză pot fi dozați prin metoda titrimetrică (metoda Sörensen) sau colorimetrică (cu reactiv Folin-CiColteu, ninhidrină). a. Metoda titrimetrică Aminoacizii eliberați în urma acțiunii enzimelor proteolitice asupra substratului se dozează prin metoda
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
cu apă distilată și se omogenizează bine; soluție de carbonat de sodiu 0,5 %; soluție de acid clorhidric 0,1 N; soluție neutralizată de formol 40 %; soluție de hidroxid de sodiu 0,01 N; soluție alcoolică de fenolftaleină 1 %; extract enzimatic. Mod de lucru Se iau într-un balon Erlenmayer 10 ml soluție de cazeină 25 %, 10 ml apă distilată și 5 ml extract enzimatic. După omogenizare se prelevează imediat 10 ml din amestecul de reactiv (proba martor) se adaugă 5
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
formol 40 %; soluție de hidroxid de sodiu 0,01 N; soluție alcoolică de fenolftaleină 1 %; extract enzimatic. Mod de lucru Se iau într-un balon Erlenmayer 10 ml soluție de cazeină 25 %, 10 ml apă distilată și 5 ml extract enzimatic. După omogenizare se prelevează imediat 10 ml din amestecul de reactiv (proba martor) se adaugă 5 ml formol neutralizat, 3 picături fenolftaleină și se titrează cu hidroxid de sodiu 0,01 N până la colorația slab roz. Amestecul rămas se termostatează
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
netermostatate (Vm) obținem volumul de hidroxid de sodiu care corespunde aminoacizilor eliberați de enzimă. Activitatea enzimelor proteolitice se exprimă convențional prin: cantitatea de glicCol eliberată de enzimă în timp de o oră din 100 g cazeină, de către 1 ml extract enzimatic sau 1 g preparat enzimatic în condițiile de lucru date. b. Metoda colorimetrică Principiul metodei Metoda se bazează pe reacția de culoare pe care o dau produșii de hidroliză, solubili în acid tricloracetic, care au rezultat în urma acțiunii enzimei asupra
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
hidroxid de sodiu care corespunde aminoacizilor eliberați de enzimă. Activitatea enzimelor proteolitice se exprimă convențional prin: cantitatea de glicCol eliberată de enzimă în timp de o oră din 100 g cazeină, de către 1 ml extract enzimatic sau 1 g preparat enzimatic în condițiile de lucru date. b. Metoda colorimetrică Principiul metodei Metoda se bazează pe reacția de culoare pe care o dau produșii de hidroliză, solubili în acid tricloracetic, care au rezultat în urma acțiunii enzimei asupra substratului. Reacția se realizează cu
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
de undă de 660 nm, în cuve de 1 cm, folosind ca fond proba martor. Cu valorile obținute se trasează curba etalon trecând pe ordonată E 660 nm, iar pe abscisă micrograme de tirozină. Mod de lucru pentru determinarea activității enzimatice în două eprubete se pipetează câte 1 ml preparat enzimatic diluat corespunzător și se termostatează la 37 C timp de 5 minute. Se pipetează apoi în una din eprubete 1 ml substrat (proba activă) iar în cea de-a două
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
folosind ca fond proba martor. Cu valorile obținute se trasează curba etalon trecând pe ordonată E 660 nm, iar pe abscisă micrograme de tirozină. Mod de lucru pentru determinarea activității enzimatice în două eprubete se pipetează câte 1 ml preparat enzimatic diluat corespunzător și se termostatează la 37 C timp de 5 minute. Se pipetează apoi în una din eprubete 1 ml substrat (proba activă) iar în cea de-a două eprubetă 2 ml acid tricloracetic 0,3 N și 1
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
și se termostatează la 37 C timp de 5 minute. Se pipetează apoi în una din eprubete 1 ml substrat (proba activă) iar în cea de-a două eprubetă 2 ml acid tricloracetic 0,3 N și 1 ml preparat enzimatic (proba martor). Ambele eprubete se termostatează timp de o oră la 37 C. După expirarea timpului se oprește reacția enzimatică din proba activă cu 2 ml acid tricloracetic 0,3 N. După omogenizare, se continuă termostatarea celor două probe la
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
proba activă) iar în cea de-a două eprubetă 2 ml acid tricloracetic 0,3 N și 1 ml preparat enzimatic (proba martor). Ambele eprubete se termostatează timp de o oră la 37 C. După expirarea timpului se oprește reacția enzimatică din proba activă cu 2 ml acid tricloracetic 0,3 N. După omogenizare, se continuă termostatarea celor două probe la 37 C, timp de 20 minute. Se agită și se filtrează pe filtru cutat. Din fiecare probă filtrată se ia
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
Folin-CiCalteu și se agită. Se determină extincția probei active la 660 nm, în cuve de 1 cm, folosind ca fond proba martor și același spectrofotometru care s-a folosit pentru curba etalon. Mod de calcul Activitatea proteolitică a unui preparat enzimatic se exprimă în unități Anson. O unitate Anson (A.U.) reprezintă cantitatea de enzimă care în condiții standard pune în libertate într-un minut produși de hidroliză ai substratului (hemoglobină, cazeină, etc.) solubili în acid tricloracetic, a căror exticție este
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
de hidroliză ai substratului (hemoglobină, cazeină, etc.) solubili în acid tricloracetic, a căror exticție este echivalentă cu cea a unui miliechivalent de tirozină sau numărul de miliechivalenți de tirozină formați într-un minut de 1 ml sau 1 g preparat enzimatic. În funcție de extincția determinată la spectrofotometru se ia din curba etalon cantitatea de tirozină (T) exprimată în miligrame. Pentru a obține activitatea proteolitică a preparatului enzimatic, în unități Anson / g se aplică următoarea relație: în care: T - cantitatea de tirozină luată
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
de miliechivalenți de tirozină formați într-un minut de 1 ml sau 1 g preparat enzimatic. În funcție de extincția determinată la spectrofotometru se ia din curba etalon cantitatea de tirozină (T) exprimată în miligrame. Pentru a obține activitatea proteolitică a preparatului enzimatic, în unități Anson / g se aplică următoarea relație: în care: T - cantitatea de tirozină luată din curba etalon, transformată în grame; D - diluția preparatului enzimatic (1 ml) prin amestecul cu substratul (1 ml) și acid tricloracetic (2 ml); 181·10
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
etalon cantitatea de tirozină (T) exprimată în miligrame. Pentru a obține activitatea proteolitică a preparatului enzimatic, în unități Anson / g se aplică următoarea relație: în care: T - cantitatea de tirozină luată din curba etalon, transformată în grame; D - diluția preparatului enzimatic (1 ml) prin amestecul cu substratul (1 ml) și acid tricloracetic (2 ml); 181·10.3 - miliechivalentul tirozinei; 60 - timpul de reacție, minute; c - cantitatea de enzimă luată în lucru (în g) conținută de 1 ml soluție. X.3.1
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
între valorile 0,1 și 0,6 se realizează o altă scară etalon cu alte concentrații de tirozină. Se trasează apoi o curbă etalon trecând pe abscisă µg tirozină și pe ordonată extincțiile corespunzătoare. Mod de lucru pentru determinarea activității enzimatice În două eprubete se pipetează câte 5 ml din soluția de substrat de cazeină. Conținutul eprubetelor se aduce la temperatura de 40 C prin menținere pe o baie de apă sau termostat timp de 15 minute. În una din eprubete
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
5 ml din soluția de substrat de cazeină. Conținutul eprubetelor se aduce la temperatura de 40 C prin menținere pe o baie de apă sau termostat timp de 15 minute. În una din eprubete se adaugă 2 ml din extractul enzimatic ce trebuie analizat, iar în cea de-a doua 3 ml acid tricloracetic și 2 ml preparat enzimatic (proba martor). După omogenizare, cele două eprubete se termostatează la 40 C timp de 60 minute. După epuizarea timpului în eprubeta în
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
menținere pe o baie de apă sau termostat timp de 15 minute. În una din eprubete se adaugă 2 ml din extractul enzimatic ce trebuie analizat, iar în cea de-a doua 3 ml acid tricloracetic și 2 ml preparat enzimatic (proba martor). După omogenizare, cele două eprubete se termostatează la 40 C timp de 60 minute. După epuizarea timpului în eprubeta în care a acționat enzima se adaugă 3 ml acid tricloracetic (pentru stoparea activității) și se omogenizează. Ambele eprubete
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
de filtru. Se măsoară extincția la 280 nm folosind același aparat ca în cazul scării etalon, cuve de 1 cm și proba martor ca fond. Dacă extincțiile nu se încadrează între 0,2 și 0,5 se impune modificarea concentrației enzimatice. Pentru a evita astfel de situații, se recomandă efectuarea în paralel a mai multor probe cu concentrații diferite de preparat enzimatic. De asemenea pentru comparație se pot efectua probe cu enzime pure, de exemplu papaina, în paralel cu probele de
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
proba martor ca fond. Dacă extincțiile nu se încadrează între 0,2 și 0,5 se impune modificarea concentrației enzimatice. Pentru a evita astfel de situații, se recomandă efectuarea în paralel a mai multor probe cu concentrații diferite de preparat enzimatic. De asemenea pentru comparație se pot efectua probe cu enzime pure, de exemplu papaina, în paralel cu probele de analizat. Mod de calcul în funcție de extincția determinată la spectrofotometru se ia din curba etalon cantitatea de tirozină. Activitatea enzimatică se exprimă
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
de preparat enzimatic. De asemenea pentru comparație se pot efectua probe cu enzime pure, de exemplu papaina, în paralel cu probele de analizat. Mod de calcul în funcție de extincția determinată la spectrofotometru se ia din curba etalon cantitatea de tirozină. Activitatea enzimatică se exprimă în µg de tirozină eliberată de 1 ml sau 1 g preparat enzimatic în timp de o oră în condițiile de lucru date. în care: T - cantitatea de tirozină luată din curba etalon, în µg; 5 - diluția preparatului
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
exemplu papaina, în paralel cu probele de analizat. Mod de calcul în funcție de extincția determinată la spectrofotometru se ia din curba etalon cantitatea de tirozină. Activitatea enzimatică se exprimă în µg de tirozină eliberată de 1 ml sau 1 g preparat enzimatic în timp de o oră în condițiile de lucru date. în care: T - cantitatea de tirozină luată din curba etalon, în µg; 5 - diluția preparatului enzimatic, conform modului de lucru; C - volumul de preparat enzimatic în ml, sau cantitatea de
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]
-
se exprimă în µg de tirozină eliberată de 1 ml sau 1 g preparat enzimatic în timp de o oră în condițiile de lucru date. în care: T - cantitatea de tirozină luată din curba etalon, în µg; 5 - diluția preparatului enzimatic, conform modului de lucru; C - volumul de preparat enzimatic în ml, sau cantitatea de preparat enzimatic în grame ce se găsește în C ml. X.4. DETERMINAREA ACTIVITĂȚII LIPAZEI Lipaza face parte din clasa hidrolazelor, grupa esterazelor, ele catalizează descompunerea
Chimia alimentelor. Analiza substraturilor alimentare by Lucia Carmen Trincă, Adina Mirela Căpraru () [Corola-publishinghouse/Science/430_a_1254]