KorAP: Find »[drukola/base=hibridizare & drukola/pos=noun]« with Poliqarp

<1 ...21 22 23 24 >

593 matches

Corola-website/Law/295065_a_296394

hârtie de filtru impregnată cu hibmix 1x (a se vedea apendicele 7). Se pune la preincubat cutia timp de cel puțin 10 minute în cuptorul de hibridizare, la o temperatură de 55 °C. 5.2.4. Se prepară soluția de hibridizare (a se vedea apendicele 7) având la bază 45 μl pe lamă, apoi se pune la preincubat timp de cinci minute la o temperatură de 55 °C. 5.2.5. Se așază lamele pe o placă încălzită la 45 °C

32006L0056-ro (2006) [Corola-website/Law/295065_a_296394]
45 μl pe lamă, apoi se pune la preincubat timp de cinci minute la o temperatură de 55 °C. 5.2.5. Se așază lamele pe o placă încălzită la 45 °C și se varsă 10 μl de soluție de hibridizare în fiecare dintre cele patru godeuri ale fiecărei lame. 5.2.6. Se acoperă fiecare lamă cu două lamele (24 x 24 mm), avându-se grijă să nu se prindă aer, apoi se așază lamele în camera de hibridizare umedă

32006L0056-ro (2006) [Corola-website/Law/295065_a_296394]
de hibridizare în fiecare dintre cele patru godeuri ale fiecărei lame. 5.2.6. Se acoperă fiecare lamă cu două lamele (24 x 24 mm), avându-se grijă să nu se prindă aer, apoi se așază lamele în camera de hibridizare umedă preîncălzită și se lasă acolo o noapte, în obscuritate și la o temperatură de 55 °C, pentru a permite desfășurarea hibridizării. 5.2.7. Se prepară trei pahare de laborator care conțin 1 l de apă ultrapură, 1 l

32006L0056-ro (2006) [Corola-website/Law/295065_a_296394]
x 24 mm), avându-se grijă să nu se prindă aer, apoi se așază lamele în camera de hibridizare umedă preîncălzită și se lasă acolo o noapte, în obscuritate și la o temperatură de 55 °C, pentru a permite desfășurarea hibridizării. 5.2.7. Se prepară trei pahare de laborator care conțin 1 l de apă ultrapură, 1 l de hibmix 1x (334 ml de hibmix 3x și 666 ml de apă ultrapură) și 1 l de hibmix 1/2x (167

32006L0056-ro (2006) [Corola-website/Law/295065_a_296394]
1.3. Condiții ale reacției PCR Se execută următorul program: 1 ciclu de: (i) 3 minute la 95 °C: denaturarea matricei ADN; 10 cicluri de: (ii) 1 minut la 95 °C: denaturarea matricei ADN; (iii) 1 minut la 64 °C: hibridizare cu primerii; (iv) 1 minut la 72 °C: extinderea ADN-ului complementar; 25 de cicluri de: (v) 30 secunde la 95 °C: denaturarea matricei ADN; (vi) 30 secunde la 62 °C: hibridizare cu primerii; (vii) 1 minut la 72 °C

32006L0056-ro (2006) [Corola-website/Law/295065_a_296394]
matricei ADN; (iii) 1 minut la 64 °C: hibridizare cu primerii; (iv) 1 minut la 72 °C: extinderea ADN-ului complementar; 25 de cicluri de: (v) 30 secunde la 95 °C: denaturarea matricei ADN; (vi) 30 secunde la 62 °C: hibridizare cu primerii; (vii) 1 minut la 72 °C: extinderea ADN-ului complementar; 1 ciclu de: (viii) 5 minute la 72 °C: extindere finală; (ix) se menține la 4 °C. Nota bene: Acest program a fost optimizat pentru o utilizare cu

32006L0056-ro (2006) [Corola-website/Law/295065_a_296394]
Soluție de fixare de înlocuire: etanol la 96 %. 3. Hibmix 3X NaCl 2,7 M Tri-HCl 60 mM (pH 7,4) EDTA (filtru sterilizat și trecut prin autoclavă) 15 mM Se diluează până la 1 x, după caz. 4. Soluție de hibridizare Hibmix 1X Dodecilsulfat de sodiu (SDS) 0,01 % Sondă EUB 338 5 ng/μl Sondă CMSCY 301 5 ng/μl Se prepară cantități de soluție de hibridizare, respectând calculele din tabel. Pentru fiecare lamă (care conține 2 probe diferite în

32006L0056-ro (2006) [Corola-website/Law/295065_a_296394]
autoclavă) 15 mM Se diluează până la 1 x, după caz. 4. Soluție de hibridizare Hibmix 1X Dodecilsulfat de sodiu (SDS) 0,01 % Sondă EUB 338 5 ng/μl Sondă CMSCY 301 5 ng/μl Se prepară cantități de soluție de hibridizare, respectând calculele din tabel. Pentru fiecare lamă (care conține 2 probe diferite în duplicat), sunt necesari 90 μl de soluție de hibridizare. Tabel: Cantități sugerate pentru prepararea amestecului de hibridizare 2 8 Apă ultrapură sterilă 50,1 200,4 Hibmix

32006L0056-ro (2006) [Corola-website/Law/295065_a_296394]
Sondă EUB 338 5 ng/μl Sondă CMSCY 301 5 ng/μl Se prepară cantități de soluție de hibridizare, respectând calculele din tabel. Pentru fiecare lamă (care conține 2 probe diferite în duplicat), sunt necesari 90 μl de soluție de hibridizare. Tabel: Cantități sugerate pentru prepararea amestecului de hibridizare 2 8 Apă ultrapură sterilă 50,1 200,4 Hibmix 3 x 30,0 120,0 1 % Dodecilsulfat de sodiu 0,9 3,6 Sonda EUB 338 (100 ng/μl) 4,5

32006L0056-ro (2006) [Corola-website/Law/295065_a_296394]
301 5 ng/μl Se prepară cantități de soluție de hibridizare, respectând calculele din tabel. Pentru fiecare lamă (care conține 2 probe diferite în duplicat), sunt necesari 90 μl de soluție de hibridizare. Tabel: Cantități sugerate pentru prepararea amestecului de hibridizare 2 8 Apă ultrapură sterilă 50,1 200,4 Hibmix 3 x 30,0 120,0 1 % Dodecilsulfat de sodiu 0,9 3,6 Sonda EUB 338 (100 ng/μl) 4,5 18,0 Sonda CMSCY 301 (100 ng/μl

32006L0056-ro (2006) [Corola-website/Law/295065_a_296394]
Corola-website/Law/295071_a_296400

mai multor dispoziții tehnice legate de măsurile de combatere. (5) Ținând seama de aceste progrese, este necesar să se actualizeze măsurile prevăzute în anumite anexe la Directiva 98/57/CE. (6) În ceea ce privește procedurile de detectare și identificare, a fost introdusă hibridizarea fluorescentă in situ (FISH), o metodă modernă de detectare. De asemenea, au fost incluse îmbunătățirile aduse metodei PCR (reacție în lanț a polimerazei), diferitelor elemente tehnice ale procedurii actuale de detectare și identificare, precum și metodelor de detectare și identificare a

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
de control pozitiv din sușa omologă sau din orice altă sușă de referință de R. solanacearum, în suspensie în extract de cartof, în conformitate cu apendicele 3 B. Utilizarea unei oligosonde eubacteriene marcate cu izotiocianat de fluoresceină (FITC) permite controlul procesului de hibridizare colorând toate eubacteriile prezente în eșantion. Materialele de control pozitiv și negativ standardizate disponibile pentru acest test sunt prevăzute în apendicele 3 litera A. Materialul de control se testează în același mod ca și eșantioanele. 7.1. Fixarea extractului de

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
10 Lamelle 1 = lamela 1 Lamelle 2 = lamela 2 7.1.6. Se usucă lamele la aer (sau într-un uscător, la 37 °C), apoi se fixează prin trecere prin flamă. Procedura poate fi întreruptă în acest stadiu și întreprinsă hibridizarea a doua zi. Lamele trebuie păstrate la adăpost de praf, într-un loc uscat și la temperatura ambiantă. 7.2. Hibridizare 7.2.1. Se deshidratează celulele prin băi succesive de etanol de 50 %, 80 % și 96 % cu o durată

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
la 37 °C), apoi se fixează prin trecere prin flamă. Procedura poate fi întreruptă în acest stadiu și întreprinsă hibridizarea a doua zi. Lamele trebuie păstrate la adăpost de praf, într-un loc uscat și la temperatura ambiantă. 7.2. Hibridizare 7.2.1. Se deshidratează celulele prin băi succesive de etanol de 50 %, 80 % și 96 % cu o durată de un minut fiecare. Se aranjează lamele pe un suport și se lasă la uscat în aer liber. 7.2.2

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
pregătește o cameră de incubare umedă căptușind fundul unei cutii ermetice cu hârtie absorbantă sau cu hârtie de filtru impregnată cu hibmix 1X (a se vedea apendicele 7). Cutia se preincubează timp de cel puțin zece minute în cuptorul de hibridizare la o temperatură de 45 °C. 7.2.3. Se picură 10 μl de soluție de hibridizare (apendicele 7) în opt ferestre (ferestrele 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 și 10; a se vedea figura 7.1) ale fiecărei

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
de filtru impregnată cu hibmix 1X (a se vedea apendicele 7). Cutia se preincubează timp de cel puțin zece minute în cuptorul de hibridizare la o temperatură de 45 °C. 7.2.3. Se picură 10 μl de soluție de hibridizare (apendicele 7) în opt ferestre (ferestrele 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 și 10; a se vedea figura 7.1) ale fiecărei lame lăsând goale cele două ferestre din mijloc (3 și 8). 7.2.4. Se acoperă cu

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
mm) prima și ultimele patru ferestre având grijă să nu rămână aer sub ele. Lamele se introduc în camera umedă încălzită în prealabil și se lasă timp de cinci ore în cuptor la 45 °C în întuneric, pentru a permite hibridizarea. 7.2.5. Se pregătesc trei pahare de laborator conținând 1 l de apă Milli Q (biologie moleculară), 1 l de hibmix 1X [334 ml de hibmix 3X și 666 ml de apă Milli Q (biologie moleculară)] și 1 l

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
Gibco BRL. 1.3. Condițiile reacției PCR Se urmează procedura: 1 ciclu de: (i) 2 minute la 96 °C: denaturarea matricei ADN 35 cicluri de: (ii) 20 secunde la 94 °C: denaturarea matricei ADN (iii) 20 secunde la 68 °C: hibridizare cu primeri (iv) 30 secunde la 72 °C: extinderea ADN suplimentar 1 ciclu de: (v) 10 minute la 72 °C (extinderea finală) (vi) Se menține la 4 °C. Notă: Acest program a fost optimizat pentru o utilizare cu ciclorul termic

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
de concentrație. 2.3. Condițiile reacției PCR Se urmează procedura: 1 ciclu de: (i) 5 minute la 95 °C: denaturarea matricei ADN 35 cicluri de: (ii) 30 secunde la 95 °C: denaturarea matricei ADN (iii) 30 secunde la 68 °C: hibridizare cu primeri (iv) 45 secunde la 72 °C: extinderea ADN suplimentar 1 ciclu de: (v) 5 minute la 72 °C (extinderea finală) (vi) Se menține la 4 °C. Notă: Acest program a fost optimizat pentru o utilizare cu ciclorul termic

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
a ADN. 3.3. Condițiile reacției PCR Se urmează procedura: 1 ciclu de: (i) 5 minute la 95 °C: denaturarea matricei ADN 35 cicluri de: (ii) 30 secunde la 95 °C: denaturarea matricei ADN (iii) 30 secunde la 58 °C: hibridizare cu primeri (iv) 45 secunde la 72 °C: extinderea ADN suplimentar 1 ciclu de: (v) 5 minute la 72 °C (extinderea finală) (vi) Se menține la 4 °C. Notă: Acest program a fost optimizat pentru o utilizare cu ciclorul termic

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
reacțiile specifice biovarului 1/2 și biovarului 3/4/5: 1 ciclu de: (i) 5 minute la 95 °C: denaturarea matricei ADN 35 cicluri de: (ii) 30 secunde la 95 °C: denaturarea matricei ADN (iii) 30 secunde la 58 °C: hibridizare cu primeri (iv) 45 secunde la 72 °C: extinderea ADN suplimentar 1 ciclu de: (v) 5 minute la 72 °C (extinderea finală) (vi) Se menține la 4 °C. Notă: Acest program a fost optimizat pentru o utilizare cu ciclorul termic

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
de praf la 4 °C până la utilizare. 3. Hibmix 3 x NaCl 2,7 M Tris/HCl 60 mM (pH 7,4) EDTA (filtru sterilizat în autoclavă) 15 mM Se diluează până la 1 x, după cum este prevăzut. 4. Soluție de hibridizare Hibmix 1 x Dodecilsulfat de sodiu (DSS) 0,01 % Formamidă 30 % Sondă EUB 338 5 ng/μl Sondă OLI-1 sau OLI-2 5 ng/μl Se prepară cantități de soluție de hibridizare în conformitate cu calculul din tabelul 1. Pentru fiecare lamă (conținând

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
până la 1 x, după cum este prevăzut. 4. Soluție de hibridizare Hibmix 1 x Dodecilsulfat de sodiu (DSS) 0,01 % Formamidă 30 % Sondă EUB 338 5 ng/μl Sondă OLI-1 sau OLI-2 5 ng/μl Se prepară cantități de soluție de hibridizare în conformitate cu calculul din tabelul 1. Pentru fiecare lamă (conținând două dubluri de eșantioane diferite), este nevoie de 90 μl de soluție de hibridizare. IMPORTANT: FORMAMIDA ESTE FOARTE TOXICĂ. PRIN URMARE, SE POARTĂ MĂNUȘI ȘI SE IAU MĂSURILE DE SIGURANȚĂ NECESARE

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
338 5 ng/μl Sondă OLI-1 sau OLI-2 5 ng/μl Se prepară cantități de soluție de hibridizare în conformitate cu calculul din tabelul 1. Pentru fiecare lamă (conținând două dubluri de eșantioane diferite), este nevoie de 90 μl de soluție de hibridizare. IMPORTANT: FORMAMIDA ESTE FOARTE TOXICĂ. PRIN URMARE, SE POARTĂ MĂNUȘI ȘI SE IAU MĂSURILE DE SIGURANȚĂ NECESARE! Tabelul 1. Cantități recomandate pentru prepararea amestecului de hibridizare Numărul de lame 1 4 6 8 10 Apă ultrapură sterilă 23,1 92

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]
conținând două dubluri de eșantioane diferite), este nevoie de 90 μl de soluție de hibridizare. IMPORTANT: FORMAMIDA ESTE FOARTE TOXICĂ. PRIN URMARE, SE POARTĂ MĂNUȘI ȘI SE IAU MĂSURILE DE SIGURANȚĂ NECESARE! Tabelul 1. Cantități recomandate pentru prepararea amestecului de hibridizare Numărul de lame 1 4 6 8 10 Apă ultrapură sterilă 23,1 92,4 138,6 184,8 231,0 Hibmix 3X 30,0 120,0 180,0 240,0 300,0 Dodecilsulfat de sodiu (DSS) de 1 % 0

32006L0063-ro (2006) [Corola-website/Law/295071_a_296400]