1,373 matches
-
soluții de colagenază cu un grad ridicat de puritate (Liberază, Boehringer sau Roche Pharmaceuticals). Acestea realizează o digestie enzimatică mai puțin agresivă asupra țesutului pancreatic, permițând astfel recuperarea intactă a unui număr mai mare de celule (3, 16). Purificarea izolatului insular În urma procesului de izolare descris mai sus rezultă o emulsie care conține, în egală măsură, țesut insular și țesut acinar. Îndepărtarea țesutului acinar excedentar se face prin centrifugare computerizată (12), dar, din cauza diferenței minime de densitate dintre țesutul pancreatic endocrin
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
digestie enzimatică mai puțin agresivă asupra țesutului pancreatic, permițând astfel recuperarea intactă a unui număr mai mare de celule (3, 16). Purificarea izolatului insular În urma procesului de izolare descris mai sus rezultă o emulsie care conține, în egală măsură, țesut insular și țesut acinar. Îndepărtarea țesutului acinar excedentar se face prin centrifugare computerizată (12), dar, din cauza diferenței minime de densitate dintre țesutul pancreatic endocrin și cel exocrin, în timpul purificării se pierde și un număr considerabil de celule β (5). Acest compromis
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
Langerhans transplantate este, de asemenea, foarte important. Este nevoie de ~ 6000 insule / kg.corp pentru funcționarea grefei, dar pentru obținerea unei insulinoindependențe de durată sunt necesare cel puțin 9000 insule / kg.corp, ceea ce înseamnă, cu aproximație, cam 50% din populația insulară a unui pancreas normal (19). Cu tehnicile de izolare și purificare actuale, acest număr de insule ar putea fi obținut prin procesarea unui singur pancreas (15, 19). De cele mai multe ori, însă, este nevoie de procesarea a două pancreasuri pentru un
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
ore de lucru continuu, reușește să obțină 20-50% din insulele existente în pancreasul inițial (19). Tehnica Transplantul propriu-zis este o procedură chirurgicală simplă, care nu durează mai mult de o oră. Până acum, cel mai bun sediu pentru implantarea celulelor insulare pare să fie ficatul. De altfel, aceste două organe (pancreasul și ficatul) au multe elemente comune, fiind incluse de Paulescu în ceea ce el a numit „aparatul asimilator”. Emulsia insulară este perfuzată lent (în ~ 20’) în vena portă. Abordul unei vene
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
o oră. Până acum, cel mai bun sediu pentru implantarea celulelor insulare pare să fie ficatul. De altfel, aceste două organe (pancreasul și ficatul) au multe elemente comune, fiind incluse de Paulescu în ceea ce el a numit „aparatul asimilator”. Emulsia insulară este perfuzată lent (în ~ 20’) în vena portă. Abordul unei vene se face de obicei printr-un cateter percutan ghidat echografic, după ce, în prealabil, pacientului i s-a făcut anestezie locală (11). După ce s-au atașat în circulația hepatică, celulele
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
și nu sunt toxice pentru celula β (19), în schimb sunt foarte scumpe. Încapsularea insulelor pancreatice permite, cel puțin teoretic, ca transplantul acestora să nu necesite un tratament imunosupresiv ulterior. Această tehnologie experimentală utilizează niște membrane semipermeabile care protejează țesutul insular de atacul sistemului imunitar al gazdei, dar permit trecerea glucozei, insulinei, nutrienților și reziduurilor metabolice. Monitorizarea post-transplant Urmărirea post-transplant a pacienților se face, în primul rând, prin monitorizarea valorilor glicemice. Glicemia va fi măsurată zilnic în prima săptămână și de
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
și nivelul HbA1c. Nici unul nu a mai avut episoade hipoglicemice. Circa 2/3 au rămas insulinoindependenți pentru cel puțin 10 luni, iar hiperglicemia provocată oral a fost uneori normalizată. Cauzele rezultatelor modeste obținute până în 1999 au fost următoarele: masa terapeutică insulară a fost prea mică; o mare parte din insulele infuzate nu ajungeau să fie funcționale (erau distruse); principala cauză a distrugerii celulelor insulare era atât întârzierea în procesarea pancreasului, cât și imunosupresia aplicată; în alte cazuri, imunosupresia nu putea preveni
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
provocată oral a fost uneori normalizată. Cauzele rezultatelor modeste obținute până în 1999 au fost următoarele: masa terapeutică insulară a fost prea mică; o mare parte din insulele infuzate nu ajungeau să fie funcționale (erau distruse); principala cauză a distrugerii celulelor insulare era atât întârzierea în procesarea pancreasului, cât și imunosupresia aplicată; în alte cazuri, imunosupresia nu putea preveni rejecția acută sau cronică a insulelor (17). „Protocolul Edmonton” folosește o serie de strategii menite să ocolească principalele obstacole caracteristice transpantului insular (9
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
celulelor insulare era atât întârzierea în procesarea pancreasului, cât și imunosupresia aplicată; în alte cazuri, imunosupresia nu putea preveni rejecția acută sau cronică a insulelor (17). „Protocolul Edmonton” folosește o serie de strategii menite să ocolească principalele obstacole caracteristice transpantului insular (9). Mai întâi, ischemia „rece” durează, în medie, ~ 5 ore, iar la procesarea pacreasului se pune accentul pe obținerea unei emulsii insulare cât mai pure. În al doilea rând, se folosesc cel puțin 10 000 insule / kg.corp, ceea ce, de
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
cronică a insulelor (17). „Protocolul Edmonton” folosește o serie de strategii menite să ocolească principalele obstacole caracteristice transpantului insular (9). Mai întâi, ischemia „rece” durează, în medie, ~ 5 ore, iar la procesarea pacreasului se pune accentul pe obținerea unei emulsii insulare cât mai pure. În al doilea rând, se folosesc cel puțin 10 000 insule / kg.corp, ceea ce, de cele mai multe ori, înseamnă doi sau chiar trei donatori la un singur recipient. În sfârșit, dar nu în ultimul rând, schema tratamentului imunosopresiv
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
de insule proaspete; înlocuirea proteinelor străine din serurile folosite pentru prelucrare (ser de vițel) cu soluții de albumină umană, mai compatibile; utilizarea transplantului de insule la pacienți fără insuficiență renală; folosirea unor „donatori dubli de pancreas” pentru a obține masa insulară recomandată; modificarea și ameliorarea tehnicilor de izolare a insulelor; folosirea unei echipe multidisciplinare sudate și disciplinate. Tot în viziunea grupului de la Edmonton (17, 19), selecția pacienților pentru transplantul izolat de insule (pe care grupul lor îl preferă) ar trebui făcută
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
depășit de numărul potențialilor candidați. Deocamdată, cercetările pentru soluționarea acestei probleme se îndreaptă în două direcții principale: Xenotransplantul cu celulele β de origine animală. Chiar dacă maimuțele antropoide sunt din punct de vedere genetic cele mai apropiate rude ale omului, țesutul insular porcin pare să fie cel mai potrivit pentru transplant (8). De altfel, insulina de porc a fost folosită ani de zile cu rezultate destul de bune, iar în unele țări este încă în uz. Principala problemă a xenotransplantului este incompatibilitatea imunologică
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92269_a_92764]
-
cele două tipuri de țesut, se știe mai puțin. S-a constatat, totuși, că acinii „tele-insulari” (mai depărtați de insule) sunt mai mici și conțin mai puține granule de zimogen decât acinii „peri-insulari”. S-a sugerat că secreția endocrină complexă insulară joacă un rol important în reglarea secreției exocrine, pe căile denumite „axele insulino-acinare” (1). În adevăr, sistemul venos portal insulo-acinar transferă sângele conținând hormonii secretați în insulă (evident și insulina) în parenchimul acinar. În pancreasul adult, delimitarea dintre țesutul endocrin
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
sistemul venos portal insulo-acinar transferă sângele conținând hormonii secretați în insulă (evident și insulina) în parenchimul acinar. În pancreasul adult, delimitarea dintre țesutul endocrin și cel exocrin este dificil de identificat, fiind uneori reprezentată de membranele bazale de care celulele insulare se atașează. Cel mai ades, insulele sunt delimitate de o „capsulă” parțială, alcătuită din fibre de colagen și fibroblaști. Absența unei structuri solide de delimitare a insulelor față de țesutul acinar creează probleme mari în obținerea unui număr mare de insule
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
compactă de celule epiteliale, intercalate în țesutul acinar, întrepătrunse de o densă rețea capilară. Masa endocrină totală reprezintă ~ 2% din pancreas și cântărește ~ 1,5 g. Experimental, dintr-un pancreas de 68 g au fost izolate 1395 mg de țesut insular. Insulele realizează cea mai compactă colecție de celule secretorii diferite, care, toate, sunt implicate în reglarea metabolismului energetic. Spațiul dintre celule este mic, iar celulele alăturate sunt deseori legate prin diferite tipuri de joncțiuni intercelulare. Insulele adulte cuprind peste 90
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
mărimii diferite a granulelor secretorii. Prezența insulinei numai în celule B a fost precizată numai în 1959 de Lacy (20). Celulele D au fost descrise de Bloom în 1931, iar celulele PP de către Kimmel în 1971 (15, 35). Deși celulele insulare se aseamănă mult între ele, diferențierea cea mai simplă între celulele A și B poate fi făcută analizând granulele secretorii, al căror diametru este în jur de 250 nm. Granulele insulinice apar sub forma unor cristale dense, înconjurate de un
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
în centrul insulei, fiind înconjurate de celulele A, D și PP; dimpotrivă, la maimuțe, pisici și cai, celulele A, D și PP se găsesc în centrul insulei, iar celulele B preferențial la periferie (35). La om, în perioada fetală, celulele insulare îmbracă modelul rozătoarelor (cu celulele B în centru), la adult distribuția fiind diferită. Reconstrucțiile tridimensionale indică existența unei mase β-celulare continue, care de o parte vine în contact numai cu alte celule B, iar de altă parte, numai cu celule
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
insulă. O celulă B poate veni în contact cu 2-3 capilare diferite. Polaritatea celulei B este identificată prin bogăția mare în granule secretorii în apropierea polului vascular (apical) al celulei. Diferitele regiuni ale pancreasului conțin o proporție diferită de celule insulare. Partea posterioară a capului pancreasului (provenind din mugurele embrionar ventral) conține numeroase celule PP și puține celule A. Dimpotrivă, partea anterioară a capului (ca și corpul și coada), care provin din mugurele embrionar primordial dorsal, conțin numai celule A și
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
a capului (ca și corpul și coada), care provin din mugurele embrionar primordial dorsal, conțin numai celule A și foarte puține celule PP. Fiecare insulă este irigată de una sau mai multe arteriole, care se ramifică într-o rețea densă insulară. Comparativ cu țesutul acinar, insulele pancreatice primesc de 5-10 ori mai mult sânge per volum de țesut. De altfel, bogăția de capilare din pancreas este proporțională cu mărimea masei β-celulare. Identificarea insulelor poate fi făcută ușor tocmai datorită bogăției lor
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
fig. 1). Celulele A, D și PP, aflate în vecinătatea celulelor B, pot acționa asupra acestora din urmă în mod paracrin. Importanța individuală a acestor influențe este greu de apreciat in vivo. În afara acțiunii de tip paracrin, controlul hormonal intra-insular al eliberării insulinei poate fi mediat și prin joncțiunile intercelulare și „cuplarea electrică” intercelulară. Reamintim că legăturile moleculare intercelulare jocă un rol important în păstrarea vitalității și viabilității insulelor (15). 2. Considerații filogenetice 2.1. Elemente de filogeneză Studiul amplasamentului
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
celulelor ?), în timp ce insulele mici sunt dominate de prezența celulelor β. La mamiferele superioare și la om, insulele (foarte numeroase) sunt dispersate în întregul pancreas, ele fiind străjuite de jur împrejur de țesut acinar. Această dispunere mărește enorm interfața celule insulare / celule acinare, fapt care sugerează o intervenție trofică a hormonilor insulari asupra celulelor acinare. Acest lucru este sugerat de faptul că aproape totdeauna sângele care pătrunde în insulă prin mici arteriole este drenat în capilare și venule care trec prin
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
La mamiferele superioare și la om, insulele (foarte numeroase) sunt dispersate în întregul pancreas, ele fiind străjuite de jur împrejur de țesut acinar. Această dispunere mărește enorm interfața celule insulare / celule acinare, fapt care sugerează o intervenție trofică a hormonilor insulari asupra celulelor acinare. Acest lucru este sugerat de faptul că aproape totdeauna sângele care pătrunde în insulă prin mici arteriole este drenat în capilare și venule care trec prin celulele acinare, înainte de a se vărsa în venele mai mari (un
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
trezit ca potențială sursă de insule transplantabile la om. Datele obținute de noi însă nu lasă mari speranțe pentru obținerea unui număr suficient de mare de insule din această sursă. Din punct de vedere embriologic trebuie menționat că diferitele celule insulare apar într-o cronologie anume (6, 9, 18): primele apar celulele ? (în mugurele pancreatic dorsal); curând după ele apar celulele β și celulele PP, care înmuguresc din tubii exocrini; la urmă apar celulele δ și celulele imunoreactive pentru gastrină
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
heterozigoți prezintă un diabet moderat (8). PDX1 a fost implicat în agenezia pancreasului, în MODY4 și în etiopatogenia T2DM. Un alt rol al PDX1 este legat de reglarea pe care această proteină o exercită asupra activității protectoare a unor gene insulare, incluzând insulina (27), GLUT2 (41), glucokinaza (42), polipeptidul amiloidic (31) și somatostatinul (22). Folosind tehnici imunocitochimice, Elrick și Docherty (2001) au pus în evidență deplasarea PDX1 din periferia nucleului celular și din nucleoplasmă ca răspuns la modificările glicemice, care se
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]
-
corticale, hipotalamice, limbice), capabile să integreze sutele de mesaje biochimice, metabolice sau hormonale care circulă între organele ce asigură aportul alimentar și țesuturile consumatoare de energie. În cele ce urmează ne vom referi pe scurt asupra relațiilor existente între celulele insulare. Aceste celule au o distribuție programată și indusă de poziția lor pe traseul de circulație sanguină care începe la un pol al insulei și se termină la polul opus. În afara mesajelor care circulă pe acest traseu, celulele insulare se găsesc
Tratat de diabet Paulescu by Constantin Ionescu-Tîrgovişte () [Corola-publishinghouse/Science/92241_a_92736]