6,336 matches
-
de 2³ pentru patru HAU sau 2² pentru opt HAU cu serul martor negativ și un titru cuprins într-o singură diluție a titrului cunoscut al serului martor pozitiv. 3. Interpretarea testelor Antigenul utilizat va influența nivelul la care un ser este considerat pozitiv: - pentru patru HAU un ser pozitiv este orice ser care prezintă un titru de 2² sau mai mare, pentru opt HAU un ser pozitiv este orice ser care prezintă un titru de 2³ sau mai mare. 1
jrc2401as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87555_a_88342]
-
opt HAU cu serul martor negativ și un titru cuprins într-o singură diluție a titrului cunoscut al serului martor pozitiv. 3. Interpretarea testelor Antigenul utilizat va influența nivelul la care un ser este considerat pozitiv: - pentru patru HAU un ser pozitiv este orice ser care prezintă un titru de 2² sau mai mare, pentru opt HAU un ser pozitiv este orice ser care prezintă un titru de 2³ sau mai mare. 1 JO L 303, 31.10.1990, p. 6
jrc2401as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87555_a_88342]
-
martor negativ și un titru cuprins într-o singură diluție a titrului cunoscut al serului martor pozitiv. 3. Interpretarea testelor Antigenul utilizat va influența nivelul la care un ser este considerat pozitiv: - pentru patru HAU un ser pozitiv este orice ser care prezintă un titru de 2² sau mai mare, pentru opt HAU un ser pozitiv este orice ser care prezintă un titru de 2³ sau mai mare. 1 JO L 303, 31.10.1990, p. 6. 2 JO L 340
jrc2401as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87555_a_88342]
-
serului martor pozitiv. 3. Interpretarea testelor Antigenul utilizat va influența nivelul la care un ser este considerat pozitiv: - pentru patru HAU un ser pozitiv este orice ser care prezintă un titru de 2² sau mai mare, pentru opt HAU un ser pozitiv este orice ser care prezintă un titru de 2³ sau mai mare. 1 JO L 303, 31.10.1990, p. 6. 2 JO L 340, 31.12.1993, p. 35.
jrc2401as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87555_a_88342]
-
Interpretarea testelor Antigenul utilizat va influența nivelul la care un ser este considerat pozitiv: - pentru patru HAU un ser pozitiv este orice ser care prezintă un titru de 2² sau mai mare, pentru opt HAU un ser pozitiv este orice ser care prezintă un titru de 2³ sau mai mare. 1 JO L 303, 31.10.1990, p. 6. 2 JO L 340, 31.12.1993, p. 35.
jrc2401as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87555_a_88342]
-
ALBASTRE PRIN FOLOSIREA ANTICORPULUI MONOCLONAL 3-17-A3 Testul depistează anticorpii formați pentru toate serotipurile cunoscute ale virusului bolii limbii albastre (VBLA). Principiul testului constă în întreruperea reacției între antigenul VBLA și un anticorp monoclonal specific de grup (3-17-A3) prin adăugarea diluțiilor serului de testare. Anticorpii VBLA prezenți în serul de testare blochează reacția anticorpului monoclonal (ACM) și determină reducerea dezvoltării scontate a culorii la adăugarea substratului enzimatic. MATERIALE ȘI REACTIVI 1. Plăci de microtitrare cu fundul plat. 2. Antigenul: se prepară după
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
depistează anticorpii formați pentru toate serotipurile cunoscute ale virusului bolii limbii albastre (VBLA). Principiul testului constă în întreruperea reacției între antigenul VBLA și un anticorp monoclonal specific de grup (3-17-A3) prin adăugarea diluțiilor serului de testare. Anticorpii VBLA prezenți în serul de testare blochează reacția anticorpului monoclonal (ACM) și determină reducerea dezvoltării scontate a culorii la adăugarea substratului enzimatic. MATERIALE ȘI REACTIVI 1. Plăci de microtitrare cu fundul plat. 2. Antigenul: se prepară după descrierea de mai jos. 3. Tampon de
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
microtitrare cu fundul plat. 2. Antigenul: se prepară după descrierea de mai jos. 3. Tampon de blocare: 5% (w/v), lapte praf deshidratat "Marvel", 0,1% (v/v) Tween-20 (furnizat sub formă de sirop monolaurat de sorbiton de polioxietilenă) în ser fiziologic tamponat cu fosfat (PBS). 4. Anticorpul monoclonal: 3-17-A3 (furnizat sub formă de supernatant de cultură de țesut hibridom) depozitat la -20° sau liofilizat, diluat în proporție de 1/50 cu tampon de blocare înainte de utilizare, îndreptat împotriva polipeptidei p7
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
ACID. 8. Un agitator orbital. 9. Un cititor al plăcii Elisa (testul poate fi citit vizual). FORMAT DE TESTARE H G F E D C B A Gol Antigen+ conjugat 1 ACM martor Antigen+ ACM+ conjugat 2 + ve martor Antigen+ ser pozitiv+ ACM+ conjugat 3 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 Seruri de testare 1/2 1/4 1/8 1/16 1/2 1/4 1/8 1/16 4
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
F E D C B A Gol Antigen+ conjugat 1 ACM martor Antigen+ ACM+ conjugat 2 + ve martor Antigen+ ser pozitiv+ ACM+ conjugat 3 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 Seruri de testare 1/2 1/4 1/8 1/16 1/2 1/4 1/8 1/16 4 5 Seruri de testare 6 7 8 9 10 11 12 PROTOCOL DE TESTARE Martor orb Rândul 1 A-H este
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
ACM+ conjugat 3 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 Seruri de testare 1/2 1/4 1/8 1/16 1/2 1/4 1/8 1/16 4 5 Seruri de testare 6 7 8 9 10 11 12 PROTOCOL DE TESTARE Martor orb Rândul 1 A-H este un martor orb constând din antigenul VBLA și conjugat. Acesta poate fi utilizat pentru acoperirea cititorului Elisa. ACM martor Rândul 2
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
este martorul pozitiv. Acesta constă din antigen VBLA, diluții de antiser pozitiv VBLA, ACM și conjugat. Este inclus ca indicator pentru funcționarea corespunzătoare a testului și, de la un test la altul, ar trebui să se obțină niveluri similare de inhibiție. Serurile de testare În formatul de testare prezentat mai sus pot fi testate 18 seruri, la o rată de diluție de 1/2, 1/4, 1/8 și 1/16. Aceasta oferă unele indicii asupra titrului anticorpului din serurile de testare
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
și conjugat. Este inclus ca indicator pentru funcționarea corespunzătoare a testului și, de la un test la altul, ar trebui să se obțină niveluri similare de inhibiție. Serurile de testare În formatul de testare prezentat mai sus pot fi testate 18 seruri, la o rată de diluție de 1/2, 1/4, 1/8 și 1/16. Aceasta oferă unele indicii asupra titrului anticorpului din serurile de testare. Plaja de diluare ar putea fi extinsă ulterior pentru obținerea de titruri de punct
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
de inhibiție. Serurile de testare În formatul de testare prezentat mai sus pot fi testate 18 seruri, la o rată de diluție de 1/2, 1/4, 1/8 și 1/16. Aceasta oferă unele indicii asupra titrului anticorpului din serurile de testare. Plaja de diluare ar putea fi extinsă ulterior pentru obținerea de titruri de punct final de diluție serică. Alternativ, pentru studiile serologice pe scară largă, serurile pot fi testate la o singură diluție (1/4) sau la două
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
8 și 1/16. Aceasta oferă unele indicii asupra titrului anticorpului din serurile de testare. Plaja de diluare ar putea fi extinsă ulterior pentru obținerea de titruri de punct final de diluție serică. Alternativ, pentru studiile serologice pe scară largă, serurile pot fi testate la o singură diluție (1/4) sau la două diluții (1/2 și 1/4) ca test de screening rapid. PROCEDURA 1. Diluați antigenul VBLA la concentrația pre-titrată în PBS, sonicați scurt pentru dispersarea virusului agregat (dacă
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați plăcile de trei ori prin inundare și goliți godeurile cu PBS nesteril și uscați pe hârtie absorbantă. 3. Adăugați 50 μl tampon de blocare pentru fiecare godeu. Adăugați serurile de testare și serul pozitiv în godeurile corespunzătoare și diluați de-a lungul plăcii utilizând o pipetă multi-canal. Nu adăugați ser la martorul orb sau la martorul ACM. 4. Imediat după adăugarea serurilor de testare, diluați ACM în tamponul de
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
60 de minute pe un agitator orbital. Spălați plăcile de trei ori prin inundare și goliți godeurile cu PBS nesteril și uscați pe hârtie absorbantă. 3. Adăugați 50 μl tampon de blocare pentru fiecare godeu. Adăugați serurile de testare și serul pozitiv în godeurile corespunzătoare și diluați de-a lungul plăcii utilizând o pipetă multi-canal. Nu adăugați ser la martorul orb sau la martorul ACM. 4. Imediat după adăugarea serurilor de testare, diluați ACM în tamponul de blocare (la diluția pre-titrată
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
cu PBS nesteril și uscați pe hârtie absorbantă. 3. Adăugați 50 μl tampon de blocare pentru fiecare godeu. Adăugați serurile de testare și serul pozitiv în godeurile corespunzătoare și diluați de-a lungul plăcii utilizând o pipetă multi-canal. Nu adăugați ser la martorul orb sau la martorul ACM. 4. Imediat după adăugarea serurilor de testare, diluați ACM în tamponul de blocare (la diluția pre-titrată) și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii, cu excepția martorului orb. 5. Incubați la 37ș C timp
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
tampon de blocare pentru fiecare godeu. Adăugați serurile de testare și serul pozitiv în godeurile corespunzătoare și diluați de-a lungul plăcii utilizând o pipetă multi-canal. Nu adăugați ser la martorul orb sau la martorul ACM. 4. Imediat după adăugarea serurilor de testare, diluați ACM în tamponul de blocare (la diluția pre-titrată) și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii, cu excepția martorului orb. 5. Incubați la 37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați de trei ori
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
toate godeurile plăcii. Lăsați culoarea să se dezvolte timp de aproximativ 10 minute și opriți reacția cu 1 M acid sulfuric (50 μl pentru un godeu). Culoarea trebuie să se dezvolte în godeurile martorului AMC și în godeurile care conțin seruri FĂRĂ anticorpi VBLA. 9. Examinați și înregistrați plăcile fie vizual, fie utilizând un cititor spectrofotometric. ANALIZA REZULTATELOR Calculați media citirii OD din martorii AMC. Aceasta reprezintă valoarea de inhibiție 0%. Citirea densităților optice din serurile de testare se exprimă ca
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
și în godeurile care conțin seruri FĂRĂ anticorpi VBLA. 9. Examinați și înregistrați plăcile fie vizual, fie utilizând un cititor spectrofotometric. ANALIZA REZULTATELOR Calculați media citirii OD din martorii AMC. Aceasta reprezintă valoarea de inhibiție 0%. Citirea densităților optice din serurile de testare se exprimă ca valoare de inhibiție procentuală, utilizându-se următoarea formulă: Valorile de inhibiție mai mari de 40% la o diluție a serului de 1/4 sunt considerate pozitive. Citirea vizuală este posibilă deoarece o inhibiție de 40
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
citirii OD din martorii AMC. Aceasta reprezintă valoarea de inhibiție 0%. Citirea densităților optice din serurile de testare se exprimă ca valoare de inhibiție procentuală, utilizându-se următoarea formulă: Valorile de inhibiție mai mari de 40% la o diluție a serului de 1/4 sunt considerate pozitive. Citirea vizuală este posibilă deoarece o inhibiție de 40% este valoarea cea mai scăzută perceptibilă cu ochiul. PREPARAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA 1. Spălați 10 șiruri de celule confluente BHK-21 de trei ori cu mediu
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
4 sunt considerate pozitive. Citirea vizuală este posibilă deoarece o inhibiție de 40% este valoarea cea mai scăzută perceptibilă cu ochiul. PREPARAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA 1. Spălați 10 șiruri de celule confluente BHK-21 de trei ori cu mediu Eagle fără ser și infectați cu serotipul 1 al virusului bolii limbii albastre în mediul Eagle fără ser. 2. Incubați la 37ș C și examinați zilnic pentru efectul citopatic (ecp). 3. Când ecp este evident în 80- 90% din stratul celular al fiecărui
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
cea mai scăzută perceptibilă cu ochiul. PREPARAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA 1. Spălați 10 șiruri de celule confluente BHK-21 de trei ori cu mediu Eagle fără ser și infectați cu serotipul 1 al virusului bolii limbii albastre în mediul Eagle fără ser. 2. Incubați la 37ș C și examinați zilnic pentru efectul citopatic (ecp). 3. Când ecp este evident în 80- 90% din stratul celular al fiecărui șir, recoltați virusul prin scuturarea celulelor rămase lipite pe sticlă. 4. Centrifugați la 2 000-
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
necesită o concentrație de 50 până la 100 de ori pentru a fi eficient. Acest lucru se poate realiza prin orice procedură standard de concentrare proteică; virusul din antigen poate fi inactivat prin adăugarea a 0,3% (v/v) beta-propiolactonă. 2. Ser martor pozitiv cunoscut Prin utilizarea serulului și antigenului internațional de referință, se produce un ser standard național, standardizat pentru o proporție optimă împotriva serului internațional de referință, liofilizat și utilizat ca ser martor cunoscut la fiecare test. 3. Ser de
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]