58,615 matches
-
CEREVISIAE 1. METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nu sunt specificate. 1.4. Principiul metodei de testare Pentru măsurarea potențialului mutagen al unor agenți chimici, cu sau fără activare metabolică, pot fi folosite diverse sușe haploide și diploide ale drojdiei Saccharomyces cerevisiae. Au fost utilizate metode de producere a mutațiilor directe în tulpini haploide, cum ar fi măsurarea transformării din mutanți roșii, care au nevoie
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
realizează de obicei printr-o metodă de testare în lichid care presupune utilizarea fie de celule staționare, fie de celule în creștere. Experimentele inițiale trebuie realizate pe celule în creștere. 1 - 5 x 107 celule/ml sunt expuse la substanța chimică testată pe o perioadă de 18 ore, la o temperatură de 28 - 37˚C, cu agitare; dacă este necesar; pe parcursul expunerii, se adaugă o cantitate corespunzătoare de sistem de activare metabolică. La sfârșitul tratamentului, celulele sunt centrifugate, spălate și însămânțate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
se realizează de obicei prin procedeul de testare în lichid, care presupune utilizarea fie de celule staționare, fie de celule în creștere. Experimentele inițiale trebuie realizate pe celule în creștere. 1 - 5 x 107 celule/ml sunt expuse la substanța chimică testată pe o perioadă de 18 ore, la o temperatură de 28 - 37˚C, cu agitare; dacă este cazul, pe parcursul tratamentului, se adaugă o cantitate corespunzătoare de sistem de activare metabolică. La sfârșitul tratamentului celulele sunt centrifugate, spălate și însămânțate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
DE MAMIFERE 1. METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nu sunt specificate. 1.4. Principiul metodei de testare Pentru determinarea mutațiilor cauzate de substanțele chimice se pot folosi sisteme de culturi celulare de mamifere. Printre cele mai utilizate linii celulare se numără celulele limfomatoase L5178Y de șoarece și liniile celulare CHO și V-79 de hamster chinezesc. În aceste linii celulare, sistemele cele mai utilizate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Celule Pentru această tehnică sunt disponibile mai multe linii celulare, printre care subclonele L5178Y, celulele CHO sau celulele V-79, care au o sensibilitate demonstrată la agenții chimici mutageni, o eficiență de clonare ridicată și o frecvență redusă a mutațiilor spontane. Celulele pot fi analizate periodic pentru verificarea stabilității cariotipului și se examinează în vederea decelării contaminării cu micoplasmă. Pentru mutațiile genice cauzate de substanțele chimice se pot utiliza
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
demonstrată la agenții chimici mutageni, o eficiență de clonare ridicată și o frecvență redusă a mutațiilor spontane. Celulele pot fi analizate periodic pentru verificarea stabilității cariotipului și se examinează în vederea decelării contaminării cu micoplasmă. Pentru mutațiile genice cauzate de substanțele chimice se pot utiliza și alte tipuri de celule, cu condiția ca validitatea utilizării în acest scop să fie pe deplin argumentată cu documentație. Mediu Se utilizează medii de cultură și condiții de incubare corespunzătoare (de exemplu, temperatura, vasele de cultură
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să corespundă clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi Fiecare experiment include martori pozitivi, folosind atât un compus cu activitate directă, cât și un compus ce necesită activare metabolică. De asemenea, trebuie folosit și un martor negativ (excipient). Exemple de substanțe
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de referință Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Sinteza neprogramată a ADN (UDS) reprezintă un test care permite măsurarea sintezei de reparare a ADN-ului după excizia și eliminarea unui fragment de ADN care conține regiunea alterată de agenți chimici și fizici. Testul se bazează pe încorporarea timidinei marcate cu tritiu (timidină tritiată) (3H-TdR) în ADN-ul celulelor mamifere care nu sunt în faza S a ciclului celular. Încorporarea 3H-TdR se poate determina prin autoradiografiere sau prin LSC (liquid scintillation
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de celule de mamifere se tratează cu agentul testat cu și fără un sistem exogen de activare metabolică. USD poate fi măsurată prin tehnici in vivo. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire: Substanța chimică de testare și substanța martor sau substanța de referință trebuie preparate în mediul de creștere sau dizolvate sau suspensionate într-un excipient adecvat și ulterior diluate în mediul de cultură folosit în această tehnică. Concentrația finală a excipientului nu trebuie
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Concentrația finală a excipientului nu trebuie să afecteze viabilitatea celulară. În acest test pot fi folosite culturi celulare primare de hepatocite de șobolan, limfocite umane sau linii celulare bine caracterizate (de exemplu, fibroblaști diploizi umani). Celulele trebuie tratate cu substanțele chimice de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Condiții experimentale Numărul culturilor Pentru fiecare metodă experimentală sunt necesare cel puțin două culturi celulare pentru autoradiografiere și șase culturi (sau mai puține, dacă există
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Alternativ, dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să fie corespunzătoare clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Numărul de culturi Pentru fiecare punct experimental se folosesec cel puțin două culturi. Folosirea martorilor pozitivi și negativi În toate experimentele se folosesc martori pozitivi, folosind atât un compus cu activare directă, cât și un compus ce
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
asemenea, se folosește și un martor pentru excipient. Exemple de substanțe ce pot fi folosite ca martori pozitivi: - compuși cu activare directă: - etilmetansulfonatul, - compuși cu activare indirectă: - ciclofosfamida. După caz, se poate introduce un martor pozitiv suplimentar din aceeași clasă chimică cu substanța de testare. Concentrații de expunere Se vor folosi cel puțin trei concentrații ale substanței de testare, spațiate în mod adecvat. Concentrația maximă trebuie să producă un efect toxic semnificativ, permițând totuși producerea unei replicări celulare corespunzătoare. Substanțele relativ
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
testare și BrdU pentru întreaga perioadă de cultură de două cicluri celulare. Culturile de limfocite umane trebuie tratate când sunt într-o stare semisincronă. Celulele trebuie analizate în perioada celei de-a doua diviziuni post-tratament, asigurând astfel expunerea la substanța chimică în cele mai sensibile stadii ale ciclului celular. Cu toate culturile la care s-a adăugat BrdU se va lucra la întuneric sau iluminare slabă de la o sursă incandescentă până în momentul prelevării celulelor, pentru reducerea la minim a fotolizei ADN
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
MAMIFERE 1. METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Pentru determinarea modificărilor fenotipice in vitro induse de substanțele chimice asociate cu transformări maligne in vivo, se folosesc sisteme de cultură de celule de mamifere. Cele mai des utilizate celule sunt C3H10T1/2, 3T3, SHE și celule de la șobolani Fisher. Testele urmăresc modificările în morfologia celulară, formarea de focare sau
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și celule de la șobolani Fisher. Testele urmăresc modificările în morfologia celulară, formarea de focare sau modificări în dependența de ancorare pe agar-agar semisolid. Există sisteme folosite mai rar care depistează alte modificări celulare morfologice sau fiziologice în urma expunerii la substanțe chimice cancerigene. Nici unul din mecanismele testate in vitro nu are o legătură definită și directă cu cancerul. Anumite sisteme de testare pot detecta promotori tumorali. Citotoxicitatea poate fi determinată prin măsurarea efectelor materialului testat asupra capacităților de formare de colonii (eficiența
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
pot detecta promotori tumorali. Citotoxicitatea poate fi determinată prin măsurarea efectelor materialului testat asupra capacităților de formare de colonii (eficiența de clonare) sau asupra ratei de creștere a culturilor. Măsurarea citotoxicității are rolul de a stabili dacă expunerea la substanța chimică testată are relevanță toxicologică, dar nu poate fi folosită pentru a calcula frecvența transformărilor în toate testele, deoarece unele dintre acestea pot necesita incubare prelungită și/sau recultivare. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
trebuie să tratate cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Dacă tipul celular folosit are activitate metabolică intrinsecă, natura acestei activități trebuie să fie cunoscută și adecvată clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi În fiecare experiment trebuie folosiți martori pozitivi, atât un compus cu activitate directă cât și un compus ce necesită activare metabolică. De asemenea, trebuie folosit și un martor negativ (pentru excipient). Printre
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Efectele genei letale dominante determină moartea embrionului sau a fetusului. Inducerea genelor letale dominante prin expunere la o substanță chimică indică faptul că acea substanță a acționat la nivelul țesutului germinativ al speciei testate. Este cunoscut faptul că genele letale dominante se datorează unei anomalii cromozomiale (numerice și structurale). Moartea embrionului, în cazul în care femelele sunt tratate poate fi
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
timp poate fi rezultatul morții celulare (a spermatocitului și/sau a spermatogoniei). 1.5. Criterii calitative Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Dacă este posibil, substanțele folosite se dizolvă sau se suspensionează într-o soluție izotonică salină. Substanțele chimice insolubile în apă pot fi dizolvate sau suspensionate în excipiente corespunzătoare. Excipientul folosit nu trebuie să interfereze chimic cu substanța de testare și nu trebuie să producă efecte toxice. Pentru testarea chimică, se folosesc preparate proaspete. Condiții experimentale Calea de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
6. Descrierea metodei de testare Pregătire Dacă este posibil, substanțele folosite se dizolvă sau se suspensionează într-o soluție izotonică salină. Substanțele chimice insolubile în apă pot fi dizolvate sau suspensionate în excipiente corespunzătoare. Excipientul folosit nu trebuie să interfereze chimic cu substanța de testare și nu trebuie să producă efecte toxice. Pentru testarea chimică, se folosesc preparate proaspete. Condiții experimentale Calea de administrare De regulă, compusul testat trebuie administrat o singură dată. Pe baza informațiilor toxicologice se poate utiliza un
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
se suspensionează într-o soluție izotonică salină. Substanțele chimice insolubile în apă pot fi dizolvate sau suspensionate în excipiente corespunzătoare. Excipientul folosit nu trebuie să interfereze chimic cu substanța de testare și nu trebuie să producă efecte toxice. Pentru testarea chimică, se folosesc preparate proaspete. Condiții experimentale Calea de administrare De regulă, compusul testat trebuie administrat o singură dată. Pe baza informațiilor toxicologice se poate utiliza un test cu administrare repetată. Căile normale de administrare sunt: intubarea orală sau injectarea intraperitoneală
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
metodei de testare Acest test de citogeneză in vivo detectează aberațiile cromozomiale structurale ale spermatogoniilor. Testul constă în analiza mitozei spermatogoniei pentru a decela tipul de aberație cromatidiană și cromozomială. Metoda utilizează preparate din mamifere care au tratate cu substanța chimică de testare administrată pe căi specifice și sacrificate la diferite intervale de timp. Animalele sunt tratate în continuare cu inhibitori ai fusului mitotic cum ar fi colchicina pentru a opri celulele în stadiul de metafază a mitozei (c-metafază), apoi
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și apoi colorate, care se examinează microscopic. Analiza spermatocitelor în stadiul diachineză-metafaza I permite obținerea unor informații suplimentare referitoare la translocarea multivalentă a spermatogoniei, în urma tratamentului. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Substanțele chimice testate se dizolvă în soluție izotonică salină. Dacă sunt insolubile, acestea se dizolvă sau se suspensionează în excipiente corespunzătoare. Se utilizează soluții proaspăt preparate. Excipientul folosit pentru realizarea soluției nu trebuie să interfereze cu substanța de testare și nu trebuie
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cu solvent. Testul petei decelează apariția presupuselor mutații somatice ce survin în celulele fetale. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei Pregătire Dacă este posibil, substanțele testate se dizolvă sau se suspensionează în soluție izotonică salină. Substanțele chimice insolubile în apă sunt dizolvate sau suspensionate în excipienți corespunzători. Excipientul nu trebuie să interfereze cu substanța de testare și nu trebuie să producă efecte toxice. Se utilizează soluții proaspăt preparate. Animalele de experiență Se împerechează șoareci din rasa T
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
F1. Femelele XO sunt identificate citogenetic prin prezența a doar 39 de cromozomi în mitozele celulare din măduva osoasă. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea testului Pregătire Substanțele de testare se dizolvă în soluție izotonică salină. Substanțele chimice insolubile în apă se dizolvă sau se suspensionează într-un excipient corespunzător. Se utilizează soluții proaspăt preparate Excipientul nu trebuie să interfereze cu substanța de testare și nu trebuie să producă efecte toxice. Calea de administrare Calea de administrare obișnuită
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]