650 matches
-
de imunofluorescență este considerat pozitiv atunci când eșantionul conține cel puțin 5 x 103 celule caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie. În acest caz, eșantionul este considerat ca fiind potențial contaminat și trebuie continuate testele. (ii) Testul de imunofluorescență este considerat negativ atunci când eșantionul conține mai puțin de 5 x 103 celule pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie și proba este considerată necontaminată. Nu este necesară continuarea testelor. 5. TESTUL FISH Principiu În cazul în care testul
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
suspensie și proba este considerată necontaminată. Nu este necesară continuarea testelor. 5. TESTUL FISH Principiu În cazul în care testul FISH este folosit ca test de depistare inițial și rezultatul său este pozitiv, trebuie să se efectueze un test de imunofluorescență ca al doilea test obligatoriu de depistare. În cazul în care testul FISH este folosit ca test secundar, iar rezultatul său este pozitiv, diagnosticul trebuie completat de teste suplimentare, astfel cum se indică în diagrama funcțională. Nota bene: Se utilizează
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
nedorite de celule fluorescente morfologic atipice și de bacterii saprofite care provoacă reacții încrucișate și au mărimea și morfologia asemănătoare cu C. m. ssp. sepedonicus. Fenomenul menționat este, cu toate acestea, mult mai puțin frecvent decât în cazul testului de imunofluorescență. 5.3.5. Doar celulele fluorescente de mărime și cu morfologie caracteristice trebuie luate în considerare (a se vedea punctul 5.3.2). 5.3.6. Interpretarea rezultatului testului FISH: (i) rezultatele testului FISH sunt valabile atunci când prin intermediul filtrului FITC
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
să fie observate cu filtrul rodamină în preparatele de martori pozitivi. 6. TESTUL PCR Principii În cazul în care testul PCR este folosit ca test principal de depistare și rezultatul său este pozitiv, trebuie să se efectueze un test de imunofluorescență ca test secundar de depistare obligatoriu. În cazul în care testul PCR este folosit ca test secundar, iar rezultatul său este pozitiv, diagnosticul trebuie completat de teste suplimentare, astfel cum se indică în diagrama funcțională. Exploatarea completă a metodei menționate
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de acid pe bază de glicerol - Producție de acid pe bază de lactoză - sau slab Producție de acid pe bază de ramnoză - Producție de acid pe bază de salicină - Colorare Gram (a se vedea apendicele 9) + 9.2. Test de imunofluorescență (IF) (a) Se prepară o suspensie de aproximativ 106 celule pe mililitru într-un tampon de imunofluorescență (a se vedea apendicele 3). (b) Se prepară o diluție la jumătate dintr-un antiser adecvat. (c) Se urmează procedura testului de imunofluorescență
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
acid pe bază de ramnoză - Producție de acid pe bază de salicină - Colorare Gram (a se vedea apendicele 9) + 9.2. Test de imunofluorescență (IF) (a) Se prepară o suspensie de aproximativ 106 celule pe mililitru într-un tampon de imunofluorescență (a se vedea apendicele 3). (b) Se prepară o diluție la jumătate dintr-un antiser adecvat. (c) Se urmează procedura testului de imunofluorescență (a se vedea secțiunea 4). (d) Pentru ca un test IF să fie pozitiv, titrul obținut cu cultura
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
imunofluorescență (IF) (a) Se prepară o suspensie de aproximativ 106 celule pe mililitru într-un tampon de imunofluorescență (a se vedea apendicele 3). (b) Se prepară o diluție la jumătate dintr-un antiser adecvat. (c) Se urmează procedura testului de imunofluorescență (a se vedea secțiunea 4). (d) Pentru ca un test IF să fie pozitiv, titrul obținut cu cultura trebuie să fie echivalent cu cel obținut cu martorul pozitiv. 9.3. Test PCR (a) Se prepară o suspensie de aproximativ 106 celule
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
să se obțină nouă replici ale fiecărei probe martor. Se depozitează la temperaturi între -16 și -24 °C până în momentul utilizării. Prezența și cuantificarea C. m. ssp. sepedonicus în probele martori trebuie confirmate în primul rând printr-un test de imunofluorescență. Pentru testul PCR, se extrage ADN pe baza probelor martori pozitivi și negativi din fiecare serie de probe. Pentru testele IF și FISH, se efectuează încercări pe probele martori pozitivi și negativi ai fiecărei serii de probe. În cazul testelor
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
centrifugare. Na2HPO4.12H2O 2,7 g NaH2PO4.2H2O 0,4 g Apă distilată 1,00 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează cu autoclavă timp de 15 minute la 121 °C. 2. Tampoane pentru testele de imunofluorescență 2.1. Tampon IF (tampon cu fosfat la 10 mM, pH 7,2) Tamponul menționat este utilizat pentru diluția anticorpilor. Na2HPO4.12H2O 2,7 g NaH2PO4.2H2O 0,4 g NaCl 8,0 g Apă distilată 1,0 l Se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
în condiții adecvate: - toți tuberculii care fac parte din eșantion și, în măsura posibilului, toate plantele care fac parte din eșantion; - orice extract rezidual și material suplimentar preparat pentru testul sau testele de depistare, precum lamele preparate pentru testele de imunofluorescență și - orice documentație relevantă, până la încheierea respectivelor proceduri. După caz, conservarea tuberculilor va permite testarea varietăților. 2. În cazul confirmării prezenței organismului, trebuie să se păstreze și să se conserve în condiții adecvate: - materialul menționat la punctul 1; - o probă
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de prezenta anexă se aplică în egală măsură și deșeurilor legate de manipularea, eliminarea și tratarea loturilor contaminate. 1 JO L 259, 18.10.1993, p. 2. 2 Descrierea simptomelor figurează în secțiunea 2. 3 Testele adecvate sunt: - testul de imunofluorescență (secțiunea 4); - testul PCR (secțiunea 6); - testul FISH (secțiunea 5). 4 Deși izolarea prin dizolvare și însămânțare pe medii de cultură a agentului patogen provenit din materialul vegetal care prezintă simptome caracteristice este o sarcină simplă, punerea în cultură riscă
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de depistare bazat pe principii biologice diferite pentru a verifica primul rezultat pozitiv. În cazul în care al doilea test sau următoarele sunt negative, proba este considerată negativă. În acest caz nu este necesară efectuarea altor teste. 12 Test de imunofluorescență (IF). Se utilizează întotdeauna un anticorp policlonal pentru testele de imunofluorescență. Se poate obține o specificitate mai mare (a se vedea secțiunea 4), asociind anticorpului menționat anticorpi monoclonali suplimentari. 13 Test PCR. Se utilizează reactivi și protocoale PCR validate în
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
rezultat pozitiv. În cazul în care al doilea test sau următoarele sunt negative, proba este considerată negativă. În acest caz nu este necesară efectuarea altor teste. 12 Test de imunofluorescență (IF). Se utilizează întotdeauna un anticorp policlonal pentru testele de imunofluorescență. Se poate obține o specificitate mai mare (a se vedea secțiunea 4), asociind anticorpului menționat anticorpi monoclonali suplimentari. 13 Test PCR. Se utilizează reactivi și protocoale PCR validate în mod corespunzător (a se vedea secțiunea 6). 14 Test FISH. Se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
au aplicat următoarele teste sanitar-veterinare, cu rezultate negative: - pentru depistarea brucelozei, un test serologic efectuat în conformitate cu procedura stabilită în anexa C la Directiva 64/432/CEE; - pentru depistarea infecției cu Campylobacter foetus, fie un test de depistare a anticorpilor prin imunofluorescență pe un eșantion de material prepuțial sau de spălătură vaginală artificială, fie, în cazul femelelor, un test de aglutinare a mucusului vaginal 1; - pentru depistarea infecției cu Trichomonas foetus, fie un examen microscopic și un test de cultură pe un
32006D0016-ro () [Corola-website/Law/294669_a_295998]
-
mucusului vaginal pentru depistarea infecției cu Campylobacter foetus; 1.5.2. tuturor taurilor utilizați pentru producția de material seminal li s-a aplicat, cu rezultate negative, pentru depistarea infecției cu Campylobacter foetus, fie un test de depistare a anticorpilor prin imunofluorescență, fie un test de cultură, efectuat pe parcursul celor douăsprezece luni anterioare colectării pe un eșantion de material prepuțial sau de spălătură vaginală artificială. 1.6. Materialul seminal destinat exportului provine de la tauri donatori: 1.6.1. care îndeplinesc cerințele prevăzute
32006D0016-ro () [Corola-website/Law/294669_a_295998]
-
și teste de detectare 1. Testul eliminării exsudatului bacterian din tulpină 2. Detectarea granulelor de poli-β-hidroxibutirat (PHB) 3. Testul de seroaglutinare 4. Izolarea selectivă 4.1. Testul de însămânțare pe medii selective 4.2. Procedura de îmbogățire 5. Testul de imunofluorescență (testul IF) 6. Testul de reacție în lanț a polimerazei (testul PCR) 6.1. Metode de purificare a ADN (a) Metoda Pastrik (2000) (b) Alte metode 6.2. PCR 6.3. Analiza produsului PCR 7. Testul FISH 8. Testele ELISA
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
o geantă frigorifică în termen de 24 ore. 1.1.6. Este absolut necesar ca toate controalele pozitive și eșantioanele de R. solanacearum să fie prelucrate separat pentru a evita orice contaminare. Această condiție se aplică atât pentru lamele de imunofluorescență, cât și pentru ansamblul testelor. 1.2. Teste A se vedea diagrama și descrierea testelor și a protocoalelor optimizate în apendicele corespunzătoare: Izolare selectivă (a se vedea secțiunea VI.A.4) Testul IF (a se vedea secțiunea VI.A.5
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
care se prevede o inhibare sau o îmbogățire a R. solanacearum din cauza populațiilor considerabile de anumite bacterii saprofite concurente, îmbogățirea extractelor de eșantioane până la centrifugare sau alte acțiuni de concentrare pot determina obținerea unor rezultate mai bune. 5. Test de imunofluorescență Principiu Ținând seama de capacitatea sa recunoscută de a atinge pragurile impuse, se recomandă utilizarea testului de imunofluorescență ca principal test de selecție. În cazul în care testul de imunofluorescență este utilizat ca principal test de selecție și rezultatul lui
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
concurente, îmbogățirea extractelor de eșantioane până la centrifugare sau alte acțiuni de concentrare pot determina obținerea unor rezultate mai bune. 5. Test de imunofluorescență Principiu Ținând seama de capacitatea sa recunoscută de a atinge pragurile impuse, se recomandă utilizarea testului de imunofluorescență ca principal test de selecție. În cazul în care testul de imunofluorescență este utilizat ca principal test de selecție și rezultatul lui este pozitiv, trebuie efectuat un test de izolare, un test PCR sau un test FISH drept test secundar
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
pot determina obținerea unor rezultate mai bune. 5. Test de imunofluorescență Principiu Ținând seama de capacitatea sa recunoscută de a atinge pragurile impuse, se recomandă utilizarea testului de imunofluorescență ca principal test de selecție. În cazul în care testul de imunofluorescență este utilizat ca principal test de selecție și rezultatul lui este pozitiv, trebuie efectuat un test de izolare, un test PCR sau un test FISH drept test secundar. În cazul în care testul de imunofluorescență este utilizat ca test secundar
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
cazul în care testul de imunofluorescență este utilizat ca principal test de selecție și rezultatul lui este pozitiv, trebuie efectuat un test de izolare, un test PCR sau un test FISH drept test secundar. În cazul în care testul de imunofluorescență este utilizat ca test secundar și rezultatul lui este pozitiv, analiza trebuie completată cu teste suplimentare după cum prevede diagrama funcțională. Notă: Se utilizează o sursă validată de anticorpi de R. solanacearum (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
obține o reacție optimă atunci când se testează o suspensie de 105-106 celule pe ml din sușa omologă de R. solanacearum folosind un conjugat corespunzător de izotiocianat de fluoresceină (FITC), în conformitate cu recomandările producătorului. Toate antiserurile policlonale validate au un titru de imunofluorescență de cel puțin 1: 2 000. La efectuarea testului, diluțiile de lucru ale anticorpilor trebuie să fie aproximativ egale sau egale cu cele ale titrului. Testul trebuie efectuat cu extracte de eșantion proaspăt preparate. După caz, se pot folosi și
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
instrucțiunile specifice ale furnizorilor de anticorpi. În cazul în care este necesar, lamele fixate pot fi refrigerate sau depozitate într-o cutie de uscare pe perioada necesară (cel mult trei luni) înainte de un nou test. 5.3. Procedura testului de imunofluorescență (i) În conformitate cu metoda de pregătire a lamelor de test indicată la punctul 5.1 (i): Se prepară un set de diluții duble. Primul godeu ar trebui să fie de 1/2 din titru (T/2), celelalte fiind de 1/4
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu metoda de pregătire a lamelor de test indicată la punctul 5.1 (ii): Se prepară diluția de lucru a anticorpilor în tampon pentru imunofluorescență. Diluția de lucru are efect asupra specificității. Figura 1: Pregătirea lamei de test în conformitate cu punctele 5.1. (i) și 5.3. (i) Diluții ale extractului concentrat resuspendat 1/100 1/1 1/1 1/1 1/1 Diluții ale extractului
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
3.2. Se incubează lamele pe hârtie umedă acoperite timp de 30 de minute la temperatura ambiantă (18-25 °C). 5.3.3. Se scutură picăturile de antiser de pe fiecare lamă și se clătesc lamele cu atenție cu un tampon pentru imunofluorescență. Se spală timp de cinci minute în soluție tampon IF-Tween (apendicele 4) și apoi în tampon IF. Se evită orice vaporizare sau scurgere care ar putea conduce la o contaminare încrucișată. Excesul de umezeală se îndepărtează cu grijă cu o
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]