942 matches
-
5 minute în soluție tampon IF - Tween și apoi 5 minute în tampon IF (apendicele 3). Excesul de umiditate se îndepărtează cu grijă. 2.3.4. Se aranjează lamele pe hârtie de filtru umedă. Se acoperă godeurile de testare și godeurile FITC cu diluția conjugatului FITC utilizat pentru determinarea titrului. Volumul conjugatului aplicat în godeuri trebuie să fie echivalent cu volumul antiserului aplicat. 2.3.5. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.6. Se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
apendicele 3). Excesul de umiditate se îndepărtează cu grijă. 2.3.4. Se aranjează lamele pe hârtie de filtru umedă. Se acoperă godeurile de testare și godeurile FITC cu diluția conjugatului FITC utilizat pentru determinarea titrului. Volumul conjugatului aplicat în godeuri trebuie să fie echivalent cu volumul antiserului aplicat. 2.3.5. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.6. Se agită picăturile de conjugat de pe lama. Se clătesc și se spală conform pct. 2
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
conjugat de pe lama. Se clătesc și se spală conform pct. 2.3.3. Se îndepărtează cu grijă excesul de umiditate. 2.3.7. Se pipeteaza 5-10 мl glicerol - tampon fosfat 0,1 M (apendicele 3) sau ceva similar în fiecare godeu și se acoperă. 2.4. Citirea testului IF Se examinează lamele de testare la un microscop cu epifluorescenta, cu filtre compatibile pentru excitarea FITC, sub imersie în ulei, la o mărire de 500-1000 de ori. Se examinează godeurile de-a
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
în fiecare godeu și se acoperă. 2.4. Citirea testului IF Se examinează lamele de testare la un microscop cu epifluorescenta, cu filtre compatibile pentru excitarea FITC, sub imersie în ulei, la o mărire de 500-1000 de ori. Se examinează godeurile de-a lungul a doua diametre în unghi drept și de-a lungul perimetrului. Se verifică mai întâi lama de control pozitiv. Celulele trebuie să fie intens fluorescente și complet colorate. NOTĂ: Testul trebuie repetat dacă apare o colorație anormală
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
perimetrului. Se verifică mai întâi lama de control pozitiv. Celulele trebuie să fie intens fluorescente și complet colorate. NOTĂ: Testul trebuie repetat dacă apare o colorație anormală. Se citesc lamele de testare. Se observă mai întâi absența celulelor fluorescente în godeurile de control cu FITC. Celulele fluorescente din controlul cu FITC indică legături nespecifice ale conjugatului, autofluorescenta sau contaminare. NOTĂ: Dacă se observă acestea, testul trebuie repetat. Se observă celule intens fluorescente cu o morfologie caracteristică bacteriei Ralstonia solanacearum în godeurile
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
godeurile de control cu FITC. Celulele fluorescente din controlul cu FITC indică legături nespecifice ale conjugatului, autofluorescenta sau contaminare. NOTĂ: Dacă se observă acestea, testul trebuie repetat. Se observă celule intens fluorescente cu o morfologie caracteristică bacteriei Ralstonia solanacearum în godeurile de testare. Intensitatea fluorescentei trebuie să fie echivalentă cu cea a tulpinii de control pozitiv, la aceeași diluție a antiserului. Celulele cu o colorație incompletă sau cu o fluorescenta slabă nu trebuie luate în considerare dacă nu sunt în număr
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
Se agită. 3.3. Se aplică 100 мl în fiecare dintre cele două repetiții (minimum două repetiții) de pe plăcile de microtitrare. Se incubează o oră la 37°C sau peste noapte la 4°C. 3.4. Se îndepărtează extractele din godeuri. Se spală godeurile de trei ori cu PBS - Tween (apendicele 5), lăsându-se ultima soluție de spălare cel putin 5 minute în godeuri 3.5. Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului de Ralstonia solanacearum în tampon de blocare (apendicele 5
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
3. Se aplică 100 мl în fiecare dintre cele două repetiții (minimum două repetiții) de pe plăcile de microtitrare. Se incubează o oră la 37°C sau peste noapte la 4°C. 3.4. Se îndepărtează extractele din godeuri. Se spală godeurile de trei ori cu PBS - Tween (apendicele 5), lăsându-se ultima soluție de spălare cel putin 5 minute în godeuri 3.5. Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului de Ralstonia solanacearum în tampon de blocare (apendicele 5). Se pipeteaza 100
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
o oră la 37°C sau peste noapte la 4°C. 3.4. Se îndepărtează extractele din godeuri. Se spală godeurile de trei ori cu PBS - Tween (apendicele 5), lăsându-se ultima soluție de spălare cel putin 5 minute în godeuri 3.5. Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului de Ralstonia solanacearum în tampon de blocare (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl diluție de antiser în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.6. Se îndepărtează antiserul
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
Tween (apendicele 5), lăsându-se ultima soluție de spălare cel putin 5 minute în godeuri 3.5. Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului de Ralstonia solanacearum în tampon de blocare (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl diluție de antiser în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.6. Se îndepărtează antiserul din godeuri. Se spală conform pct. 3.4. 3.7. Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat ce conține fosfataza alcalina în tampon de blocare. Se aplică
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
5. Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului de Ralstonia solanacearum în tampon de blocare (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl diluție de antiser în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.6. Se îndepărtează antiserul din godeuri. Se spală conform pct. 3.4. 3.7. Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat ce conține fosfataza alcalina în tampon de blocare. Se aplică 100 мl de diluție conjugata în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C.
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
la 37°C. 3.6. Se îndepărtează antiserul din godeuri. Se spală conform pct. 3.4. 3.7. Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat ce conține fosfataza alcalina în tampon de blocare. Se aplică 100 мl de diluție conjugata în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.8. Se îndepărtează conjugatul din godeuri. Godeurile se spală conform pct. 3.4 și 3.6. 3.9. Se prepară soluția de substrat ce conține fosfataza alcalina (apendicele 5). Se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
3.7. Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat ce conține fosfataza alcalina în tampon de blocare. Se aplică 100 мl de diluție conjugata în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.8. Se îndepărtează conjugatul din godeuri. Godeurile se spală conform pct. 3.4 și 3.6. 3.9. Se prepară soluția de substrat ce conține fosfataza alcalina (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl în godeuri. Se incubează timp de 30 de minute până la o oră, în
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
7. Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat ce conține fosfataza alcalina în tampon de blocare. Se aplică 100 мl de diluție conjugata în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.8. Se îndepărtează conjugatul din godeuri. Godeurile se spală conform pct. 3.4 și 3.6. 3.9. Se prepară soluția de substrat ce conține fosfataza alcalina (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl în godeuri. Se incubează timp de 30 de minute până la o oră, în întuneric
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
o oră la 37°C. 3.8. Se îndepărtează conjugatul din godeuri. Godeurile se spală conform pct. 3.4 și 3.6. 3.9. Se prepară soluția de substrat ce conține fosfataza alcalina (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl în godeuri. Se incubează timp de 30 de minute până la o oră, în întuneric, la temperatura camerei. 3.10. Se citește absorbanta la 409 nm. Interpretarea testului ELISA: Testul ELTSA este negativ dacă densitatea optică (DO) a probei este Testul ELISA este
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
încărcare pe parafilm. Se adaugă 12 мl din produsul PCR din proba, din controlul pozitiv sau din controlul de apă și se amestecă prin aspirarea ușoară în vârful pipetei înainte de încărcare. Volumele date pot fi modificate pentru a corespunde capacității godeurilor din gelul agarizat. 4.6.5. Crodeurile se încarcă atent cu gel. Pentru referință se include un marker de ADN corespunzător în cel puțin unul dintre godeuri. 4.6.6. Se conectează firele de alimentare și cele ale echipamentului pentru
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
vârful pipetei înainte de încărcare. Volumele date pot fi modificate pentru a corespunde capacității godeurilor din gelul agarizat. 4.6.5. Crodeurile se încarcă atent cu gel. Pentru referință se include un marker de ADN corespunzător în cel puțin unul dintre godeuri. 4.6.6. Se conectează firele de alimentare și cele ale echipamentului pentru electroforeza. Gelul este pus sub tensiune la 5 - 8 V/cm până când partea din față a indicatorului de urmărire este la 1 cm de capătul gelului. 4
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
intensificarea fluorescentei. Na(2)HPO(4) 12H(2)O - 3,2 g NaH(2)PO(4) 2H(2)O - 0,15 g Glicerol - 50 ml Apă distilata - 100 ml Apendice 4 Determinarea nivelului de contaminare în testul IF Suprafață (S) godeului a unei lame cu multe godeuri: pi*D^2 S = (1) 4 în care: D este diametrul godeului Suprafață (s) câmpului obiectivului: pi*d^2 s = (2) 4 în care d este diametrul câmpului Se calculează "d" fie prin măsurare
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
12H(2)O - 3,2 g NaH(2)PO(4) 2H(2)O - 0,15 g Glicerol - 50 ml Apă distilata - 100 ml Apendice 4 Determinarea nivelului de contaminare în testul IF Suprafață (S) godeului a unei lame cu multe godeuri: pi*D^2 S = (1) 4 în care: D este diametrul godeului Suprafață (s) câmpului obiectivului: pi*d^2 s = (2) 4 în care d este diametrul câmpului Se calculează "d" fie prin măsurare directă sau din următoarele formule: pi
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
O - 0,15 g Glicerol - 50 ml Apă distilata - 100 ml Apendice 4 Determinarea nivelului de contaminare în testul IF Suprafață (S) godeului a unei lame cu multe godeuri: pi*D^2 S = (1) 4 în care: D este diametrul godeului Suprafață (s) câmpului obiectivului: pi*d^2 s = (2) 4 în care d este diametrul câmpului Se calculează "d" fie prin măsurare directă sau din următoarele formule: pi*i^2 s = ──────────, (3) G^2K^2 x 4 în care ��i
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
radical din ── , pi din formulă (3) pi*i^2 4 x G^2K^2 x 4 i d = radical din ─────────────── = ── pi GK Se calculează numărul de celule fluorescente tipice pe câmp (c). Se calculează numărul de celule fluorescente tipice pe godeu (C). S C = c * ─── s Se calculează numărul de celule fluorescente tipice/ml de depozit resuspendat (N). 1000 N = C x ──── x F, y în care y = volumul de depozit pe godeu, F = factorul de diluție al depozitului. Apendice 5
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
Se calculează numărul de celule fluorescente tipice pe godeu (C). S C = c * ─── s Se calculează numărul de celule fluorescente tipice/ml de depozit resuspendat (N). 1000 N = C x ──── x F, y în care y = volumul de depozit pe godeu, F = factorul de diluție al depozitului. Apendice 5 Materiale pentru testul ELISA Tampon de căptușire, ce conține carbonat dublu concentrat, pH 9,6 Na(2)CO(3) - 6,36 g NaHCO(3) - 11,72 g Apă distilata - 1 l Se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
diluții (10θ, 10κ, 10â) în apă distilată (figura 1). 5.2.2. Din fiecare diluție a depozitului său din fiecare suspensie de C.m. spp. sepedonicus (aproximativ 10^6 celule/ml), se pipetează un volum standard măsurat, suficient pentru a acoperi godeul (aproximativ 25 мl), în godeurile unei lame cu spoturi multiple după cum se prezintă în figura 1. 5.2.3. Se lasă la uscat la o temperatură de aproximativ 37°C și se fixează cu soluție de etanol 95% sau prin
EUR-Lex () [Corola-website/Law/152220_a_153549]
-
apă distilată (figura 1). 5.2.2. Din fiecare diluție a depozitului său din fiecare suspensie de C.m. spp. sepedonicus (aproximativ 10^6 celule/ml), se pipetează un volum standard măsurat, suficient pentru a acoperi godeul (aproximativ 25 мl), în godeurile unei lame cu spoturi multiple după cum se prezintă în figura 1. 5.2.3. Se lasă la uscat la o temperatură de aproximativ 37°C și se fixează cu soluție de etanol 95% sau prin flambare. 5.2.4. Se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/152220_a_153549]
-
lame cu spoturi multiple după cum se prezintă în figura 1. 5.2.3. Se lasă la uscat la o temperatură de aproximativ 37°C și se fixează cu soluție de etanol 95% sau prin flambare. 5.2.4. Se acoperă godeurile respective cu antiser pentru C.m. spp. sepedonicus la diluțiile recomandate, TFS de 0.01, pH 7.2, conform figurii 1. (Se utilizează TFS pentru controlul ITCF). Diluția de lucru a antiserului trebuie să fie egală cu aproximativ jumătate din titrul
EUR-Lex () [Corola-website/Law/152220_a_153549]