62,260 matches
-
trebuie să nu afecteze viabilitatea celulară. În cazul substanțelor toxice, cea mai mare concentrație testată nu trebuie să reducă supraviețuirea la mai puțin de 5 - 10%. Substanțele relativ insolubile în apă trebuie să fie testate până la limita solubilității, folosind metode adecvate. În cazul substanțelor netoxice cu un grad ridicat de solubilitate în apă, limita superioară a concentrației se determină de la caz la caz. Celulele pot fi expuse la substanțele de testare fie în faza staționară, fie în faza creșterii, pentru perioade
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
per cutie și deviația standard. Frecvența mutațiilor trebuie exprimată ca număr de celule mutante raportat la numărul de celule supraviețuitoare. Eficiența de clonare și cea de supraviețuire se exprimă ca procent din nivelul martor. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - linia celulară folosită, numărul de culturi celulare, metodele de menținere a culturilor celulare, - condițiile experimentale: compoziția mediilor, concentrația CO2, concentrația substanței de testare, excipientul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
tehnici in vivo. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire: Substanța chimică de testare și substanța martor sau substanța de referință trebuie preparate în mediul de creștere sau dizolvate sau suspensionate într-un excipient adecvat și ulterior diluate în mediul de cultură folosit în această tehnică. Concentrația finală a excipientului nu trebuie să afecteze viabilitatea celulară. În acest test pot fi folosite culturi celulare primare de hepatocite de șobolan, limfocite umane sau linii celulare bine
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
efectuate fără activare metabolică. N-dimetilnitrozamina este un exemplu de compus care poate fi folosit ca martor pozitiv când se folosesc sisteme de activare metabolică. Concentrații de expunere Trebuie folosite mai multe concentrații ale substanței de testare, alese într-un interval adecvat pentru definirea răspunsului. Concentrația maximă trebuie să producă unele efecte citotoxice. Compușii relativ insolubili în apă trebuie testați până la limita superioară a solubilității. Pentru substanțele netoxice, foarte ușor solubile în apă, limita superioară a concentrației se stabilește de la caz la
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
citotoxice. Compușii relativ insolubili în apă trebuie testați până la limita superioară a solubilității. Pentru substanțele netoxice, foarte ușor solubile în apă, limita superioară a concentrației se stabilește de la caz la caz. Celule Mediile de creștere, concentrația CO2, temperatura și umiditatea adecvate sunt necesare pentru menținerea culturilor. Liniile celulare bine caracterizate trebuie verificate periodic în vederea decelării contaminării cu Mycoplasma. Activare metabolică Pentru culturile primare de hepatocite nu se utilizează un sistem de activare metabolică. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele se tratează
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
trebuie verificate periodic în vederea decelării contaminării cu Mycoplasma. Activare metabolică Pentru culturile primare de hepatocite nu se utilizează un sistem de activare metabolică. Liniile celulare bine caracterizate și limfocitele se tratează cu substanța de testare cu și fără un sistem adecvat de activare metabolică. Mod de operare Pregătirea culturilor Liniile celulare bine caracterizate se obțin din culturi de sușe (prin tripsinizare sau descuamare) cultivate cu o densitate corespunzătoare în vase de cultură și incubate la 37 C. Culturile pe termen scurt
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
obțin din culturi de sușe (prin tripsinizare sau descuamare) cultivate cu o densitate corespunzătoare în vase de cultură și incubate la 37 C. Culturile pe termen scurt de hepatocite de șobolan se obțin permițând hepatocitelor proaspăt disociate într-un mediu adecvat să se fixeze pe suprafața de creștere. Culturile de limfocite umane sunt produse prin tehnici adecvate. Tratarea culturilor cu substanța de testare Hepatocite primare de șobolan Hepatocitele de șobolan proaspăt izolate se tratează cu substanța de testare într-un mediu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de cultură și incubate la 37 C. Culturile pe termen scurt de hepatocite de șobolan se obțin permițând hepatocitelor proaspăt disociate într-un mediu adecvat să se fixeze pe suprafața de creștere. Culturile de limfocite umane sunt produse prin tehnici adecvate. Tratarea culturilor cu substanța de testare Hepatocite primare de șobolan Hepatocitele de șobolan proaspăt izolate se tratează cu substanța de testare într-un mediu ce conține 3H-TdR o perioadă de timp corespunzătoare. La sfârșitul perioadei de tratament, celulele trebuie filtrate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
aleator, alese la distanță unul de celălalt. Cantitatea de 3H-TdR încorporată în citoplasmă se determină prin numărarea a trei arii de mărimea nucleului, din citoplasma fiecărei celule numărate. Determinările LSC Pentru determinarea prin LSC a USD, se utilizează un număr adecvat de culturi pentru fiecare concentrație a substanței de testare și pentur martori. Toate rezultatele trebuie confirmate într-un experiment independent. 2. DATE Datele sunt prezentate sub formă de tabele. 2.1. Determinările autoradiografice Cantitatea de 3H-TdR încorporată în citoplasmă și
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
șirului. 2.2. Tehnica LSC În tehnica LSC, 3H-TdR încorporată trebuie raportată folosind ca unitate de măsură dpm/ g ADN; pentru descrierea distribuției încorporării se poate folosi media dpm/ g ADN cu deviația standard. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - celulele folosite, densitatea și numărul de pasaje celulare în momentul tratamentului, numărul de culturi celulare, - metodele folosite pentru menținerea culturilor, inclusiv compoziția mediului, temperatura
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
decela contaminarea cu Mycoplasma. * Trebuie folosite medii de cultură și condiții de incubare (de exemplu temperatură, vase de cultură, concentrația CO2 și umiditate) corespunzătoare. * Substanțele testate pot fi preparate în mediul de cultură sau dizolvate sau suspensionate într-un excipient adecvat înainte de începerea tratamentului celulelor. Concentrația finală de excipient în mediul de cultură nu trebuie să afecteze în mod semnificativ viabilitatea celulară sau rata de creștere, iar efectele asupra frecvenței SCE trebuie monitorizate printr-un solvent martor. Celulele se tratează cu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
etilmetansulfonatul, - compuși cu activare indirectă: - ciclofosfamida. După caz, se poate introduce un martor pozitiv suplimentar din aceeași clasă chimică cu substanța de testare. Concentrații de expunere Se vor folosi cel puțin trei concentrații ale substanței de testare, spațiate în mod adecvat. Concentrația maximă trebuie să producă un efect toxic semnificativ, permițând totuși producerea unei replicări celulare corespunzătoare. Substanțele relativ insolubile în apă trebuie testate până la limita superioară a solubilității prin metode adecvate. Pentru substanțele netoxice foarte ușor solubile în apă, limita
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
trei concentrații ale substanței de testare, spațiate în mod adecvat. Concentrația maximă trebuie să producă un efect toxic semnificativ, permițând totuși producerea unei replicări celulare corespunzătoare. Substanțele relativ insolubile în apă trebuie testate până la limita superioară a solubilității prin metode adecvate. Pentru substanțele netoxice foarte ușor solubile în apă, limita superioară a concentrației se stabilește de la caz la caz. Mod de operare Pregătirea culturilor Liniile celulare bine caracterizate se obțin din culturile de rezervă (de exemplu, prin tripsinizare sau prin descuamare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
pe cultură trebuie ajustat astfel încât în momentul prelevării culturile să nu fie confluente în proporție mai mare de 50%. Ca alternativă, se pot folosi suspensiile de culturi celulare. Culturile de limfocite umane se pot obține din sânge heparinizat, prin tehnici adecvate și sunt incubate la 37 C. Tratament Celulele aflate în stadiul de creștere exponențială se tratează cu substanța de testare pe o perioadă de timp corespunzătoare, în majoritatea cazurilor fiind suficiente una sau două ore. Durata tratamentului poate fi extinsă
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
un experiment independent. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Pentru fiecare cultură tratată sau martor se menționează separat numărul de SCE pentru fiecare metafază și numărul de SCE pe cromozom pentru fiecare metafază. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - celulele folosite, metodele de întreținere a culturilor celulare, - condițiile de desfășurare a testului: compoziția mediului, concentrația CO2, concentrația substanței de testare, excipientul folosit, temperatura
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
din tulpina Muller-5. De asemenea, se pot folosi femele din alte sușe marcate corespunzător, cu multiple inversiuni pe cromozomul X. Substanța de testare Substanțele trebuie dizolvate în apă. Substanțele insolubile în apă pot fi dizolvate sau suspensionate într-un excipient adecvat (de exemplu, un amestec de etanol și Tween-60 sau 80), apoi diluate cu apă sau soluție salină înainte de administrare. Se recomandă evitarea folosirii ca excipient a dimetilsulfoxidului (DMSO). Număr de animale Sensibilitatea și specificitatea testului se fixează de la început, odată cu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
fiecare concentrație de expunere și pentru fiecare perioadă de împerechere, pentru fiecare mascul tratat. Trebuie raportat numărul de clustere de diferite dimensiuni per mascul. Aceste rezultate trebuie confirmate într-un experiment separat. Pentru evaluarea SLRL se vor folosi metode statistice adecvate. Trebuie luată în considerare aglomerarea de gene letale recesive provenite de la un singur mascul, care trebuie evaluată cu metode statistice corespunzătoare. 3. RAPORTAREA 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - tulpina: tulpinile sau
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
are o validitate și o fiabilitate demonstrate și documentate. Mediu Se utilizează medii și condiții experimentale corespunzătoare testului de transformare efectuat. Substanța de testare Substanțele testate pot fi preparată în mediile de cultură sau dizolvate ori suspensionate într-un excipient adecvat, înainte de tratarea celulelor. Concentrația finală a excipientului în sistem nu trebuie să afecteze viabilitatea celulară, rata de creștere sau incidența transformărilor. Activarea metabolică Celulele trebuie să tratate cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
transformărilor. Activarea metabolică Celulele trebuie să tratate cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Dacă tipul celular folosit are activitate metabolică intrinsecă, natura acestei activități trebuie să fie cunoscută și adecvată clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi În fiecare experiment trebuie folosiți martori pozitivi, atât un compus cu activitate directă cât și un compus ce necesită activare metabolică. De asemenea, trebuie folosit și un martor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
se utilizează substanțe martor pozitive și negative. Când experimente efectuate recent în același laborator oferă rezultate acceptabile cu privire la martorii pozitivi, aceste rezultate pot fi folosite ca martori pozitivi în experimentul curent. Substanțele martor pozitiv trebuie folosite la o doză scăzută, adecvată (ex: MMS, intraperitoneal într-o doză de 10 mg/kg) pentru a demonstra sensibilitatea testului. Doze În mod normal se utilizează trei doze de tratament. Doza maximă trebuie să producă efecte toxice sau să reducă fertilitatea animalelor tratate. În anumite
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de sarcină în faza de preimplantare se pot calcula în funcție de diferența dintre numărul de corpora lutea și numărul implanturilor sau urmărind reducerea numărului mediu de implanturi per uter la lotul tratat în comparație cu lotul martor. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - specie, linie, vârsta și greutatea animalelor, numărul animalelor pe sexe folosite atât în lotul tratat cât și în lotul martor, - substanța de testare, excipientul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
folosi recoltări suplimentare efectuate într-un interval de 6 - 24 ore. Pregătirea testiculelor Pentru analiza mitozelor spermatogoniilor, animalele sunt injectate intraperitoneal cu o doză adecvată de inhibitor al fusului mitotic (ex. colchicina). Apoi animalele sunt sacrificate la intervale de timp adecvate: pentru șoareci, intervalul variază între trei și cinci ore, în timp ce pentru hamsterii chinezești pot fi necesare mai mult de cinci ore. Se folosește tehnica de uscare la aer. Procedura standard poate fi modificată în funcție de specia folosită. Suspensia de celule obținută
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
substanței de testare din apă în biomasă nu invalidează în mod necesar testul. 1.6. Descrierea metodei de testare 1.6.1. Pregătire 1.6.1.1. Echipament și materiale * echipament obișnuit de laborator, * vase de testare cu un volum adecvat (de exemplu, vasele conice de 250 ml sunt adecvate dacă volumul soluției de testare este de 100 ml), * aparatură pentru cultivare: laboratorul sau incinta în care se poate menține o temperatură în limita de 21-25șC, ±2 șC și o iluminare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
subspicatus", in: Rudolph/Boje: Ökotoxikologie, ecomed, Landsberg, 1986. Apendice EXEMPLU DE METODĂ PENTRU CULTURA ALGELOR Observații generale Scopul cultivării pe baza metodei de mai jos este acela de a obține culturi de alge pentru testele de toxicitate. Se folosesc metode adecvate pentru a garanta lipsa infectării cu bacterii a culturilor de alge ( ISO 4833). Se recomandă utilizarea culturilor necontaminate, dar culturile cu un singur tip de alge sunt esențiale. Toate operațiile se efectuează în condiții sterile pentru a evita contaminarea cu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cu substratul de bază sau este pulverizată uniform peste el, cu un pulverizator de cromatografie fină sau similar. Dacă este insolubilă în apă, substanța de testare se poate dizolva într-un volum cât se poate de mic de solvent organic adecvat (de exemplu, hexan, acetonă sau cloroform). Se pot folosi numai agenți care se volatilizează rapid pentru a solubiliza, dispersa sau emulsiona substanța de testare. Substratul trebuie aerisit înainte de utilizare. Cantitatea de apă evaporată trebuie înlocuită. Martorul trebuie să conțină aceeași
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]