6,336 matches
-
cu ser negativ; Cm: control al anticorpului monoclonal (fără ser). Apendicele 1: Diluție unică (1:5) - Schemă (40 seruri/placă) ***[PLEASE INSERT THE REST OF THE TABLE FROM THE ORIGINAL]*** Controale Seruri de testare Apendicele 2: Schemă de titrare a serului (10 seruri/placă) ***[PLEASE INSERT THE REST OF THE TABLE FROM THE ORIGINAL]*** Controale Seruri de testare Protocolul de testare: Control conjugat (Cc): Godeurile 1A și 1B corespund controlului de blank ce cuprinde antigenul BTV și un conjugat. Se poate
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
negativ; Cm: control al anticorpului monoclonal (fără ser). Apendicele 1: Diluție unică (1:5) - Schemă (40 seruri/placă) ***[PLEASE INSERT THE REST OF THE TABLE FROM THE ORIGINAL]*** Controale Seruri de testare Apendicele 2: Schemă de titrare a serului (10 seruri/placă) ***[PLEASE INSERT THE REST OF THE TABLE FROM THE ORIGINAL]*** Controale Seruri de testare Protocolul de testare: Control conjugat (Cc): Godeurile 1A și 1B corespund controlului de blank ce cuprinde antigenul BTV și un conjugat. Se poate utiliza pentru
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
5) - Schemă (40 seruri/placă) ***[PLEASE INSERT THE REST OF THE TABLE FROM THE ORIGINAL]*** Controale Seruri de testare Apendicele 2: Schemă de titrare a serului (10 seruri/placă) ***[PLEASE INSERT THE REST OF THE TABLE FROM THE ORIGINAL]*** Controale Seruri de testare Protocolul de testare: Control conjugat (Cc): Godeurile 1A și 1B corespund controlului de blank ce cuprinde antigenul BTV și un conjugat. Se poate utiliza pentru a etalona cititorul ELISA. Control AcM (Cm): Coloanele 1 și 2, rândurile G
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
C, D, E și F. Aceste godeuri cuprind antigenul BTV, antiserul puternic pozitiv și, respectiv, slab pozitiv, AcM și conjugatul. Control negativ (C-) Godeurile 2A și 2B corespund controalelor negative, care cuprind antigenul BTV, antiserul BTV negativ, AcM și conjugatul. Ser de testare: Pentru studii serologice la scară mare și teste de control rapide, serurile se pot testa într-o diluție unică 1:5 (apendicele 1). Eventual, 10 seruri se pot testa într-o serie de diluții de la 1:5 până la
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
respectiv, slab pozitiv, AcM și conjugatul. Control negativ (C-) Godeurile 2A și 2B corespund controalelor negative, care cuprind antigenul BTV, antiserul BTV negativ, AcM și conjugatul. Ser de testare: Pentru studii serologice la scară mare și teste de control rapide, serurile se pot testa într-o diluție unică 1:5 (apendicele 1). Eventual, 10 seruri se pot testa într-o serie de diluții de la 1:5 până la 1:640 (apendicele 2). Vor rezulta informații cu privire la titrul anticorpului din serul de testare
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
controalelor negative, care cuprind antigenul BTV, antiserul BTV negativ, AcM și conjugatul. Ser de testare: Pentru studii serologice la scară mare și teste de control rapide, serurile se pot testa într-o diluție unică 1:5 (apendicele 1). Eventual, 10 seruri se pot testa într-o serie de diluții de la 1:5 până la 1:640 (apendicele 2). Vor rezulta informații cu privire la titrul anticorpului din serul de testare. Procedura: 1. Se diluează antigenul BTV la concentrația pretitrată în PBS, se agită energic
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
control rapide, serurile se pot testa într-o diluție unică 1:5 (apendicele 1). Eventual, 10 seruri se pot testa într-o serie de diluții de la 1:5 până la 1:640 (apendicele 2). Vor rezulta informații cu privire la titrul anticorpului din serul de testare. Procedura: 1. Se diluează antigenul BTV la concentrația pretitrată în PBS, se agită energic cu ajutorul unui aparat cu ultrasunete pentru a dispersa agregatele de virus (în absența unui aparat cu ultrasunete, se agită puternic cu pipeta) și se
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
Se spală plăcile de trei ori prin umplearea și se golirea godeurilor cu PBS nesteril și se usucă cu hârtie sugativă. 3. Godeurile de control: Se adaugă 100 µl tampon de blocare în godeurile Cc. Se adaugă 50 µl de ser de control pozitiv și negativ, într-o diluție de 1:5 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), în godeurile C-, C + și, respectiv, C++. Se adaugă 50 µl de tampon de blocare în godeurile de control
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
și se usucă cu hârtie sugativă. 3. Godeurile de control: Se adaugă 100 µl tampon de blocare în godeurile Cc. Se adaugă 50 µl de ser de control pozitiv și negativ, într-o diluție de 1:5 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), în godeurile C-, C + și, respectiv, C++. Se adaugă 50 µl de tampon de blocare în godeurile de control AcM. Metoda de titrare unică: Se adaugă fiecare ser de testare in dilutie de 1
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
de 1:5 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), în godeurile C-, C + și, respectiv, C++. Se adaugă 50 µl de tampon de blocare în godeurile de control AcM. Metoda de titrare unică: Se adaugă fiecare ser de testare in dilutie de 1:5 cu tampon de blocare, in duplicat, in godeurile coloanelor de la 3 la 12 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), conform schemei anterioare. sau Metoda de titrare a serului: Se
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
de tampon de blocare în godeurile de control AcM. Metoda de titrare unică: Se adaugă fiecare ser de testare in dilutie de 1:5 cu tampon de blocare, in duplicat, in godeurile coloanelor de la 3 la 12 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), conform schemei anterioare. sau Metoda de titrare a serului: Se prepară o serie de diluții în progresie geometrică ale fiecărui eșantion de testare (de la 1:5 la 1:640) într-un tampon de blocare
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
fiecare ser de testare in dilutie de 1:5 cu tampon de blocare, in duplicat, in godeurile coloanelor de la 3 la 12 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), conform schemei anterioare. sau Metoda de titrare a serului: Se prepară o serie de diluții în progresie geometrică ale fiecărui eșantion de testare (de la 1:5 la 1:640) într-un tampon de blocare in cele opt godeuri ale fiecărei coloane de la 3 la 12. 4. Imediat după adăugarea
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
Se prepară o serie de diluții în progresie geometrică ale fiecărui eșantion de testare (de la 1:5 la 1:640) într-un tampon de blocare in cele opt godeuri ale fiecărei coloane de la 3 la 12. 4. Imediat după adăugarea serului de testare, se diluează AcM la 1:100 într-un tampon de blocare și se adaugă 50 µl în toate godeurile plăcii, cu excepția blank-ului. 5. Se incubează pentru 60 de minute la 37 °C. Se spală de trei ori cu
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
în toate godeurile plăcii. Se așteaptă dezvoltarea culorii pentru aproximativ 10 minute și se întrerupe reacția cu acid sulfuric 1M (50 µl pe godeu). Culoarea ar trebui să se dezvolte în godeurile de control AcM și în godeurile ce conțin ser fără anticorpi de BTV. 9. Se examinează și se înregistrează plăcile fie cu ochiul liber, fie folosind un cititor spectrofotometric. Analiza rezultatelor: Cu ajutorul unui program, pe calculator se editează valorile densității optice (DO) și procentul de inhibiție (PI) ale serurilor
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
ser fără anticorpi de BTV. 9. Se examinează și se înregistrează plăcile fie cu ochiul liber, fie folosind un cititor spectrofotometric. Analiza rezultatelor: Cu ajutorul unui program, pe calculator se editează valorile densității optice (DO) și procentul de inhibiție (PI) ale serurilor de testare și blank pe baza valorii medii înregistrate în godeurile de control antigen. Aceste valori ale DO și PI se utilizează pentru a determina dacă testul a fost efectuat în limitele acceptabile. Limitele superioare (UCL) și cele inferioare (LCL
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
înregistrate în godeurile de control antigen. Aceste valori ale DO și PI se utilizează pentru a determina dacă testul a fost efectuat în limitele acceptabile. Limitele superioare (UCL) și cele inferioare (LCL) ale controlului AcM (antigen plus AcM în absența serului de testare) se situează între valorile 0,4 și 1,4 ale DO. Plăcile care nu sunt conforme criteriilor menționate anterior trebuie respinse. În absența unui program pe calculator, se editează valorile DO cu ajutorul unei imprimante ELISA. Se calculează valoarea
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
control antigen, care este echivalentă cu 100 %. Se determină valoarea DO la 50 % și se calculează manual pozitivitatea și negativitatea fiecărui eșantion. Procentul valorii de inhibiție (PI) = 100 - (DO a fiecărui control/media DO a Cm) × 100. Godeurile ce contin serul de control negativ in duplicat, godeurile de blank in duplicat, ar trebui să înregistreze valori ale PI între + 25 % și -25 % și, respectiv, între + 95 % și + 105 %. Neconformitatea cu aceste limite nu invalidează placa, însă avertizează cu privire la formarea unei culori
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
negativ in duplicat, godeurile de blank in duplicat, ar trebui să înregistreze valori ale PI între + 25 % și -25 % și, respectiv, între + 95 % și + 105 %. Neconformitatea cu aceste limite nu invalidează placa, însă avertizează cu privire la formarea unei culori de fond. Serurile de control puternic și slab pozitive ar trebui să înregistreze valori ale PI între + 81 % și + 100 % și, respectiv, între + 51 % și + 80 %. Pragul de diagnostic pentru serurile de testare este 50 % (PI de 50 % sau DO de 50 %). Eșantioanele
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
limite nu invalidează placa, însă avertizează cu privire la formarea unei culori de fond. Serurile de control puternic și slab pozitive ar trebui să înregistreze valori ale PI între + 81 % și + 100 % și, respectiv, între + 51 % și + 80 %. Pragul de diagnostic pentru serurile de testare este 50 % (PI de 50 % sau DO de 50 %). Eșantioanele ce prezintă valori ale PI > 50 % se consideră negative. Eșantioanele ce prezintă valori ale PI mai mari si mai mici decât pragul pentru godeurile in duplicat se
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
cu ochiul liber; eșantioanele slab pozitive sau cele puternic negative pot fi mai dificil interpretabile cu ochiul liber. Prepararea antigenului virusului BTV pentru ELISA: 1. Se spală de trei ori 40-60 de linii celulare BHK-21 confluente cu mediu Eagle fără ser și se infectează cu serotipul 1 al virusului bolii limbii albastre în mediul Eagle fără ser. 2. Se incubează la 37 °C și se examinează zilnic efectul citopatic (CPE). 3. Când CPE este complet în 90-100 % din placa fiecarei linii
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
ochiul liber. Prepararea antigenului virusului BTV pentru ELISA: 1. Se spală de trei ori 40-60 de linii celulare BHK-21 confluente cu mediu Eagle fără ser și se infectează cu serotipul 1 al virusului bolii limbii albastre în mediul Eagle fără ser. 2. Se incubează la 37 °C și se examinează zilnic efectul citopatic (CPE). 3. Când CPE este complet în 90-100 % din placa fiecarei linii celulare, se recoltează virusul agitând pentru a desprinde celulele aderente la pereți. 4. Se centrifughează la
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
o concentrare de la 50 la 100 de ori mai mare pentru a fi eficient. Acest lucru se poate realiza prin orice procedură de concentrare proteică standard; antigenul viral poate fi inactivat prin adăugarea a 0,3 % (v/v) de beta-propiolactonă. Ser de control pozitiv cunoscut Cu ajutorul antigenului și serului internațional de referință, se produce un ser național standard, standardizat pentru a obține o proporție optimă fata de serul de referință internațional, liofilizat și utilizat în fiecare test ca ser de control
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
mai mare pentru a fi eficient. Acest lucru se poate realiza prin orice procedură de concentrare proteică standard; antigenul viral poate fi inactivat prin adăugarea a 0,3 % (v/v) de beta-propiolactonă. Ser de control pozitiv cunoscut Cu ajutorul antigenului și serului internațional de referință, se produce un ser național standard, standardizat pentru a obține o proporție optimă fata de serul de referință internațional, liofilizat și utilizat în fiecare test ca ser de control cunoscut. Ser de testare Procedura: Se toarnă agaroză
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
lucru se poate realiza prin orice procedură de concentrare proteică standard; antigenul viral poate fi inactivat prin adăugarea a 0,3 % (v/v) de beta-propiolactonă. Ser de control pozitiv cunoscut Cu ajutorul antigenului și serului internațional de referință, se produce un ser național standard, standardizat pentru a obține o proporție optimă fata de serul de referință internațional, liofilizat și utilizat în fiecare test ca ser de control cunoscut. Ser de testare Procedura: Se toarnă agaroză 1 % preparată în tampon de borat sau
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
viral poate fi inactivat prin adăugarea a 0,3 % (v/v) de beta-propiolactonă. Ser de control pozitiv cunoscut Cu ajutorul antigenului și serului internațional de referință, se produce un ser național standard, standardizat pentru a obține o proporție optimă fata de serul de referință internațional, liofilizat și utilizat în fiecare test ca ser de control cunoscut. Ser de testare Procedura: Se toarnă agaroză 1 % preparată în tampon de borat sau de barbitol de sodiu, pH de la 8,5 la 9,0, într-
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]