800 matches
-
10) și 1,0 μl soluție de probă (5.1) pe placa cu silicagel (3.1). Se developează cromatograma pe o distanță de 150 mm folosind solvent 3.2, într-un tanc saturat anterior cu solvent (3.2). 5.3. Developare 5.3.1. Se usucă placa la temperatura camerei. 5.3.2. Se pulverizează cu reactivul 3.6. 5.3.3. Se lasă placa la uscat pentru o oră la temperatura camerei. 5.3.4. Se observă la lumina unei
jrc990as1985 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86129_a_86916]
-
oxidarea iodurii, cu formare de iod. 2. REACTIVI Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică. 2.1. Soluții de referință: soluții apoase de clorat, bromat și iodat de potasiu (0,2% m/v) proaspăt preparate. 2.2. Solvent de developare: soluție de amoniac (28% m/v) / acetonă / butanol (60/130/30 v/v/v). 2.3. Iodură de potasiu, soluție apoasă (5% m/v). 2.4. Soluție de amidon (1 la 5% m/v). 2.5. Acid clorhidric (1 m
jrc990as1985 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86129_a_86916]
-
25 ml. 4.2. Se pun 2 μl de soluție (4.1) pe placă (2.6), împreună cu porțiuni de 2 μl din fiecare dintre cele trei soluții de referință (2.1). 4.3. Se pune placa într-un tanc de developare și se developează prin cromatografie ascendentă cu solvent 2.2 aproximativ trei sferturi din lungimea plăcii (2.6). 4.4. Se scoate placa din tancul de developare și se lasă să se evapore solventul (NB: Această etapă poate dura până la
jrc990as1985 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86129_a_86916]
-
de referință (2.1). 4.3. Se pune placa într-un tanc de developare și se developează prin cromatografie ascendentă cu solvent 2.2 aproximativ trei sferturi din lungimea plăcii (2.6). 4.4. Se scoate placa din tancul de developare și se lasă să se evapore solventul (NB: Această etapă poate dura până la 2 ore.). 4.5. Se pulverizează placa cu iodură de potasiu (2.3) și se lasă la uscat pentru aproximativ cinci minute. 4.6. Se pulverizează placa
jrc990as1985 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86129_a_86916]
-
oxidarea iodurii cu formare de iod. 2. REACTIVI Toți reactivii trebuie să fie de puritate analitică. 2.1. Soluții de referință: soluții apoase de clorat, bromat și iodat de potasiu (0,1% m/v) proaspăt preparate. 2.2. Solvent de developare: soluție de amoniac 28% (m/v) / acetona / butanol (60/130/30 v/v/v). 2.3. Soluție apoasă de iodură de potasiu (5% m/v). 2.4. Soluție de amidon (1 până la 5% m/v). 2.5. Acid clorhidric (1
jrc990as1985 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86129_a_86916]
-
ml. 4.2. Se pun 2 μl din această soluției pe linia de bază a plăcii (3.1), împreună cu porțiuni de 2 μl din fiecare dintre cele trei soluții de referință. 4.3. Se pune placa într-un tanc de developare și se developează cu solvent (2.2) prin cromatografie ascendentă aproximativ trei sferturi din lungimea plăcii (2.6). 4.4. Se îndepărtează placa din tancul de developare și se lasă să se evapore solventul la temperatura ambiantă (NB: Această etapă
jrc990as1985 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86129_a_86916]
-
trei soluții de referință. 4.3. Se pune placa într-un tanc de developare și se developează cu solvent (2.2) prin cromatografie ascendentă aproximativ trei sferturi din lungimea plăcii (2.6). 4.4. Se îndepărtează placa din tancul de developare și se lasă să se evapore solventul la temperatura ambiantă (NB: Această etapă poate dura până la două ore.). 4.5. Se pulverizează pe placă iodură de potasiu (2.3) și se lasă să se usuce aproximativ cinci minute. 4.6
jrc990as1985 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86129_a_86916]
-
g/ml aflatoxină B1 și B2 în cloroform (3.2) sau amestec de benzen/acetonitril (3.6). Aceste concentrații sunt orientative. Ele se vor ajusta astfel încât să se obțină aceeași intensitate a fluorescenței pentru ambele aflatoxine. 3.18. Solvenți de developare: 3.18.1. Cloroform (3.2)/acetonă (3.1): 9/1 (v/v), rezervor nesaturat; 3.18.2. Eter etilic (3.5)/metanol (3.4)/ apă: 96/3/1 (v/v/v), rezervor nesaturat; 3.18.3. Eter etilic (3
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
10 l din extractul obținut la 5.3 și, suprapus în același punct, 20 l din soluția standard (3.16); * 10 și 20 l din extractul obținut la 5.3. Se developează cromatograma la întuneric folosind unul din solvenții de developare (3.18). Alegerea acestuia trebuie făcută în prealabil, prin depunerea a 25 l din soluția standard calitativă (3.17) pe placă și verificarea separării complete la developare a aflatoxinelor B1 și B2. Se lasă solvenții să se evapore la întuneric
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
la 5.3. Se developează cromatograma la întuneric folosind unul din solvenții de developare (3.18). Alegerea acestuia trebuie făcută în prealabil, prin depunerea a 25 l din soluția standard calitativă (3.17) pe placă și verificarea separării complete la developare a aflatoxinelor B1 și B2. Se lasă solvenții să se evapore la întuneric, apoi se iradiază cu UV, punându-se placa la 10 cm de lampă (4.9). Spoturile de aflatoxină B1 dau o fluorescență albastră. 5.5. Determinări cantitative
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
microseringi: * în punctul A: un volum din extractul de eșantion purificat obținut la 5.3, care conține aproximativ 2,5 nm de aflatoxină B1; * în punctele B și C: 25 l din soluția standard (3.16). 5.6.2.2. Developare Se developează cromatograma în direcția I, la întuneric, folosindu-se solvent de developare (3.18.1) (strat de 1 cm într-un rezervor nesaturat) până când frontul de solvent ajunge la linia de limitare a acestuia. Se îndepărtează placa din rezervor
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
5.3, care conține aproximativ 2,5 nm de aflatoxină B1; * în punctele B și C: 25 l din soluția standard (3.16). 5.6.2.2. Developare Se developează cromatograma în direcția I, la întuneric, folosindu-se solvent de developare (3.18.1) (strat de 1 cm într-un rezervor nesaturat) până când frontul de solvent ajunge la linia de limitare a acestuia. Se îndepărtează placa din rezervor și se lasă să se usuce la întuneric, la temperatura camerei, timp de
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
cu un strat de sticlă. Se lasă să reacționeze timp de 10 minute la întuneric și se usucă cu un curent de aer la temperatura camerei. În continuare, se developează cromatograma în direcția II, la întuneric, folosindu-se solvent de developare (3.18.1) (strat de 1 cm într-un rezervor nesaturat) până când frontul de solvent ajunge la linia de limitare a acestuia. Se scoate placa din rezervor și se lasă la uscat la temperatura camerei. 5.6.2.3. Interpretarea
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
3.10. Sulfat de sodiu anhidru, granular. 3.11. Gaz inert, e.g. azot. 3.12. Acid clorhidric 1 N. 3.13. Kieselguhr (hyflosupercel), spălat în acid. 3.14. Gel de siliciu G-HR sau echivalent, pentru TLC. 3.15. Solvenți de developare. 3.15.1. Eter etilic (3.5)/metanol (3.4)/apă: 94/4,5/1,5 (v/v/v), rezervor saturat. 3.15.2. Cloroform (3.2)/acetonă (3.1): 9/1 (v/v), rezervor nesaturat. 3.16. Soluție standard
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
3.16); - în punctul E, 40 µl din soluția standard (3.16). Se usucă într-un curent ușor de aer sau de gaz inert (3.11). Spoturile obținute trebuie să aibă un diametru de aproximativ 5 mm. 5.4.2. Developarea (se respectă diagrama din figura 1) Se developează cromatograma în direcția I, la întuneric, folosind solventul de developare (3.15.1) (strat de 1 cm într-un rezervor saturat) până când frontul de solvent ajunge la linia de limitare a acestuia
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
de aer sau de gaz inert (3.11). Spoturile obținute trebuie să aibă un diametru de aproximativ 5 mm. 5.4.2. Developarea (se respectă diagrama din figura 1) Se developează cromatograma în direcția I, la întuneric, folosind solventul de developare (3.15.1) (strat de 1 cm într-un rezervor saturat) până când frontul de solvent ajunge la linia de limitare a acestuia. Se scoate placa din rezervor și se lasă să se usuce la întuneric la temperatura camerei timp de
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
solvent ajunge la linia de limitare a acestuia. Se scoate placa din rezervor și se lasă să se usuce la întuneric la temperatura camerei timp de 15 minute. Apoi se developează cromatograma în direcția II, la întuneric, folosind solventul de developare (3.15.2) (strat de 1 cm într-un rezervor nesaturat) până când frontul de solvent ajunge la linia de limitare a acestuia. Se scoate placa din rezervor și se lasă să se usuce la întuneric la temperatura camerei. 5.4
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
10 cm de lampă (4.9). Se localizează poziția spoturilor fluorescente albastre B, C, D și E de aflatoxină B1 din soluția standard. Se trasează două linii imaginare care trec prin aceste spoturi și în unghi drept față de direcțiile de developare. Intersecția P a acestor linii reprezintă locul în care se estimează să se găsească spotul de aflatoxină B1 provenit din extractul de eșantion aplicat în punctul A (figura 1). Totuși, localizarea reală a spotului de aflatoxină B1 poate fi în
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
stratul subțire trebuie preparat, se folosește silicagel amestecat cu circa 13% gips și se aplică într-un strat de 0,25 mm cu aparatură potrivită în conformitate cu instrucțiunile producătorului; 5. Micropipetă pentru măsurarea a 20 microlitri; 6. Recipient cu capac pentru developarea cromatogramelor; 7. Pulverizator; 8. Eter de petrol cu punct de fierbere între 40 și 60șC, redistilat înainte de folosire; 9. Etil eter anhidru pentru analiză; 10. Tetraclorură de carbon pentru cromatografie, redistilată înainte de folosire; 11. Acid fosfomolibdic pentru analiză; 12. Alcool
jrc1285as1988 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86424_a_87211]
-
etalon internă de tetracosaonat de metil, 0,25 mg/ml. Se dizolvă 25 mg tetracosaonat de metil în câțiva ml de n-Hexan (vezi pct. 4.6) și se diluează cu n-Hexan până la 100 ml. 4.8. Solvent de developare: toluen și n-Hexan în raport de 90:10 (v/v). 4.9. Soluție de 2,7 diclorofluoresceină, 0,5 g/l. Se dizolvă prin încălzire și se agită 50 mg de 2,7 diclorofluoresceină în 100 ml de soluție
jrc613as1980 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85751_a_86538]
-
50 mg de 2,7 diclorofluoresceină în 100 ml de soluție apoasă conținând 50% metanol. 5. APARATURĂ 5.1. Aparat pentru cromatografie în strat subțire care cuprinde următoarele: 5.1.1. o unitate de congelare, capabilă să mențină recipientul de developare și conținutul său la o temperatură de la minus 20 la minus 25C; 5.1.2. plăci din sticlă, 200 X 200 mm; 5.1.3. lampă cu raze ultraviolete; 5.1.4. coloane din sticlă, cu lungimea de aproximativ
jrc613as1980 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85751_a_86538]
-
înainte de utilizare. (Notă: activarea la 110 C timp de o oră poate fi satisfăcătoare cu condiția ca plăcile să nu se înnegrească). Se trasează liniile prin învelișul de 10 mm, de la marginile și vârful fiecărei plăci înainte de reducerea marginilor pe parcursul developării. 6.2.2. Aplicarea esterilor metilici Cu ajutorul aplicatorului (5.1.5) se depozitează 50 l soluție de esteri metilici (6.1) preparată din proba de analiză pe o linie subțire cu lungimea de aproximativ 50 mm, la cel puțin 40
jrc613as1980 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85751_a_86538]
-
de metil (4.6). Aplicarea soluțiilor necesită o atenție deosebită datorită fragilității substratului. (Notă: dacă se dorește, se pot aplica 50 l soluție de erucat metilic (4.6) pe placă pentru a ajuta la identificarea benzii de erucat metilic după developare: vezi figura). După aplicarea esterilor metilici se introduce baza plăcii în eter dietilic până ce eterul urcă la aproximativ 5 mm deasupra zonei de aplicare a probei de analiză. Această operație concentrează esterii metilici pe o bandă îngustă. 6.2.3
jrc613as1980 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85751_a_86538]
-
vezi figura). După aplicarea esterilor metilici se introduce baza plăcii în eter dietilic până ce eterul urcă la aproximativ 5 mm deasupra zonei de aplicare a probei de analiză. Această operație concentrează esterii metilici pe o bandă îngustă. 6.2.3. Developarea plăcilor Se toarnă soluția de developare (4.8) în cuvă la o adâncime de aproximativ 5 mm și se introduce cuva prevăzută cu capac într-un congelator (5.1.1) la minus 25C sau la o temperatură cât mai
jrc613as1980 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85751_a_86538]
-
se introduce baza plăcii în eter dietilic până ce eterul urcă la aproximativ 5 mm deasupra zonei de aplicare a probei de analiză. Această operație concentrează esterii metilici pe o bandă îngustă. 6.2.3. Developarea plăcilor Se toarnă soluția de developare (4.8) în cuvă la o adâncime de aproximativ 5 mm și se introduce cuva prevăzută cu capac într-un congelator (5.1.1) la minus 25C sau la o temperatură cât mai apropiată de aceasta. (În unele cazuri
jrc613as1980 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85751_a_86538]