694 matches
-
la o secvență Cµ, fie la o secvență Cδ (după Alberts și colab., 1994). Excizia buclei va aduce segment genic D în nemijlocita vecinătate a segmentului genic JH și acestea vor fi reunite covalent prin activitatea ligazică. Prin împerecherea și recombinarea secvenței de recunoaștere aflată la capătul 5’ al unui suprasegment reunit D-JH și secvența de recunoaștere de la capătul 3’ al unui segment genic VH va rezulta suprasegmentul recombinat VH-D-JH. Într-o manieră similară se realizează și recombinarea de segmente
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
împerecherea și recombinarea secvenței de recunoaștere aflată la capătul 5’ al unui suprasegment reunit D-JH și secvența de recunoaștere de la capătul 3’ al unui segment genic VH va rezulta suprasegmentul recombinat VH-D-JH. Într-o manieră similară se realizează și recombinarea de segmente genice pentru receptorii de antigene din celulele T (TCR). În joncțiunile D-JH și VH-D-JH apar variații de secvență prin deleții și inserții (adiții) de noi nucleotide, precum și prin substituții. În sectorul desemnat N al regiunii variabile a
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
tip de secvență consens și de spațiator. Spațierea dintre componentele secvențelor consens corespunde aproape la unul sau la două tururi de dublu-helix, ceea ce reflectă o relație geometrică importantă în reacțiile de reunire de segmente genice. Este posibil ca proteinele de recombinare să se atașeze la ADN în maniera în care ARN polimeraza se asociază specific cu secvența promotorului, după cum represorul se asociază specific cu operatorul, promotorul și operatorul având secvențe care se constituie în elemente tipice de recunoaștere de către proteine specifice
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
operatorul, promotorul și operatorul având secvențe care se constituie în elemente tipice de recunoaștere de către proteine specifice. Rearanjamentul de segmente genice imunoglobulinice presupune rupere -reunire cu specificitate de situs, dar mecanismul acesta este distinct de acela întâlnit în cazurile de recombinare omoloagă (crossing-over, conversie). Natura generală a reacțiilor care conduc la constituirea genelor funcționale pentru catena ușoară de tip k a imunoglobulinelor a fost prezentată în figura 3.6. Aceeași reacție se înregistrează și în constituirea genelor funcționale pentru catena grea
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
funcționale pentru catena ușoară de tip k a imunoglobulinelor a fost prezentată în figura 3.6. Aceeași reacție se înregistrează și în constituirea genelor funcționale pentru catena grea a imunoglobulinelor, cu excepția faptului că, în acest caz, apar două evenimente de recombinare (primul D-J, cel de al doilea V -DJ) înainte de reunirea suprasegmentului rezultat cu segmentul genic pentru regiunea constantă (C). Procesul de rupere-reunire apare ca reacții separate, astfel că o ruptură dublu-catenară realizată la nivelul heptamerilor situați la capetele unităților
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de transesterificare are multe asemănări cu reacțiile de tip topoizomerazic catalizate de proteine rezolvaze ale transpozonilor bacterieni. Paralelismul acestor reacții este susținut de omologia dintre RAG1 și proteinele invertazice bacteriene care realizează inversarea segmentelor specifice din ADN, prin reacții de recombinare specifice. De fapt, proteinele RAG pot inserționa un ADN donor ale cărui capete libere constau din secvențe semnal potrivite (heptamer - 12/23 - nonamer) într-un ADN țintă neînrudit, în cadrul unei reacții de transpoziție in vitro. De aici, s-a dedus
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
De fapt, proteinele RAG pot inserționa un ADN donor ale cărui capete libere constau din secvențe semnal potrivite (heptamer - 12/23 - nonamer) într-un ADN țintă neînrudit, în cadrul unei reacții de transpoziție in vitro. De aici, s-a dedus că recombinarea somatică a segmentelor genice imunoglobulinice a derivat dintr-un mecanism ancestral de transpoziție în care a fost implicat transpozonul. Totodată, se poate deduce că proteinele RAG sunt responsabile de translocațiile cromozomale în care locii Ig sau TCR sunt conectați la
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
este aceeași cu reacția care este folosită în repararea rupturilor dublu-catenare din alte celule. Stadiile inițiale ale reacției au fost identificate prin izolarea intermediarilor din limfocitele de șoareci care prezintă mutația SCID, mutație care condiționează o activitate imunoglobulinică și de recombinare TCR mult mai redusă. Șoarecii SCID acumulează molecule fragmentate cu rupturi dublu-catenare la nivelul capetelor codificatoare, fiind astfel deficiente în realizarea anumitor aspecte ale reacției de joncțiune. Mutați SCID inactivează o proteinkinază dependentă de ADN (DNA-PKcs). Kinaza este adusă la
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
clivarea la nivelul fiecărei secvențe consens eliberează joncțiunea dintre acești loci genici sub forma unui fragment linear. Dacă vor fi reunite capetele semnalizatoare, rezultă o structură circulară. Eliberarea unei structuri circulare se realizează prin deleție care, reprezintă modul predominant de recombinare în cadrul locilor genici pentru imunoglobuline și TCR. Există și situații în care segmentul genic D este inversat ca orientare în cromozom în raport cu locii genici J-C. În acest caz, ruperea și reunirea inversează materialul interpus în loc de a-l deleta. Rezultatul deleției
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
inversat ca orientare în cromozom în raport cu locii genici J-C. În acest caz, ruperea și reunirea inversează materialul interpus în loc de a-l deleta. Rezultatul deleției raportat la cel al inversiei este același, când sunt implicate repetiții directe sau inversate, în cadrul unei recombinări între structuri omoloage. Dar, în cazul rearanjamentelor segmentelor genice imunoglobulinice, recombinarea cu un segment genic V inversat, impune cu necesitate joncțiunea capetelor semnalizatoare, deoarece, în caz contrar, apare o ruptură la nivelul locusului genic codificator. Inversia apare frecvent în cadrul recombinării
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
caz, ruperea și reunirea inversează materialul interpus în loc de a-l deleta. Rezultatul deleției raportat la cel al inversiei este același, când sunt implicate repetiții directe sau inversate, în cadrul unei recombinări între structuri omoloage. Dar, în cazul rearanjamentelor segmentelor genice imunoglobulinice, recombinarea cu un segment genic V inversat, impune cu necesitate joncțiunea capetelor semnalizatoare, deoarece, în caz contrar, apare o ruptură la nivelul locusului genic codificator. Inversia apare frecvent în cadrul recombinării din asamblarea genelor pentru TCR și, uneori, chiar și la nivelul
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
recombinări între structuri omoloage. Dar, în cazul rearanjamentelor segmentelor genice imunoglobulinice, recombinarea cu un segment genic V inversat, impune cu necesitate joncțiunea capetelor semnalizatoare, deoarece, în caz contrar, apare o ruptură la nivelul locusului genic codificator. Inversia apare frecvent în cadrul recombinării din asamblarea genelor pentru TCR și, uneori, chiar și la nivelul locusului pentru catena ușoară LK. Segmentele genice V nesupuse rearanjamentului genic nu sunt transcrise în ARN. Dacă însă un segment genic V este reunit în mod productiv cu un
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
și TCR sunt silențiate, pe când, în celulele B și T, ele sunt reactivate prin mecanisme de rearanjare de segmente genice individuale pentru imunoglobuline, respectiv, pentru TCR. La vertebrate se cunosc patru mecanisme majore de rearanjare de segmente genice pentru imunoglobuline: recombinarea VDJ, hipermutația somatică, conversia genică și mecanismul de comutare (macaz) a clasei. Recombinarea VDJ și comutarea clasei sunt mecanisme larg răspândite la vertebratele superioare. Hipermutația somatică reprezintă un mecanism major și la șoarece, pe când conversia genică reprezintă un mecanism major
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
prin mecanisme de rearanjare de segmente genice individuale pentru imunoglobuline, respectiv, pentru TCR. La vertebrate se cunosc patru mecanisme majore de rearanjare de segmente genice pentru imunoglobuline: recombinarea VDJ, hipermutația somatică, conversia genică și mecanismul de comutare (macaz) a clasei. Recombinarea VDJ și comutarea clasei sunt mecanisme larg răspândite la vertebratele superioare. Hipermutația somatică reprezintă un mecanism major și la șoarece, pe când conversia genică reprezintă un mecanism major la iepure și la găină. Există și date potrivit cărora hipermutația somatică, conversia
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
la erori. Diversitatea și secvența de nucleotide poate fi generată și prin mecanismul de conversie genică în cadrul căruia sectoare ale secvenței de nucleotide a unui exon (VJ sau VDJ) sunt împrumutate de la segmentele genice ale pseudogenelor ( ΨV) din amonte. În cadrul recombinării de comutare a clasei (macaz), regiunea constantă a Ig este specificată de unități de transcripție alcătuite din mai mulți exoni. În cazul catenelor grele Ig, mai multe unități de transcripție specifică diferitele clase de catenă grea: Cµ (IgM), Cδ (IgD
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
unități de transcripție alcătuite din mai mulți exoni. În cazul catenelor grele Ig, mai multe unități de transcripție specifică diferitele clase de catenă grea: Cµ (IgM), Cδ (IgD), Cγ (IgG) etc. În timpul maturării celulelor B are loc un proces de recombinare intracromatidică prin care tipuri distincte de unități de transcripție specifice pentru catena grea sunt aduse în proximitatea imediată a exonului VDJ, construindu-se astfel gena funcțională VJC, pentru catena ușoară, respectiv, VDJC, pentru catena grea a tipului de Ig pe
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
B trebuie să îl sintetizeze în momentul oportun pentru a contracara tipul de antigen prezent în celulă. Asamblarea genelor pentru catenele imunoglobulinelor (Ig) și a genelor pentru receptorii celulelor T (TCR = RCT) în cursul dezvoltării celulelor limfoide, poartă numele de recombinare, remaniere sau rearanjare. În fiecare locus genic Ig sau TRC, ADN al liniei germinale se află segmente genice disparate, cunoscute sub numele de segmente genice V, J, D și C. Deoarece acești loci au segmente multiple din fiecare tip, sunt
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
în dezvoltarea limfocitelor și se caracterizează printr-o combinare unică de segmente genice pe baza unei recunoașteri de secvențe ADN cu specificitate de situs și reunire imprecisă. Fiecare regiune V, D și J este flancată de o secvență semnal de recombinare care definește situsul de rearanjare. Secvența semnal este reprezentată de un heptamer și un nonamer conservat, separate de un spacer neconservat de 12 și, respectiv, un spacer de 23 perechi de nucleotide. Rearanjarea are loc la granița dintre heptamer și
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
rearanjării segmentelor genice purtătoare de informație ereditară pentru răspunsul imun există o preferință evidentă pentru reunirea segmentelor din aceeași moleculă de ADN. Deși sunt bine cunoscute translocațiile intercromozomale cu valoare oncogenică, care utilizează secvențe semnal, ele sunt rare în cazul recombinării V(D)J și atunci când apar, ele conduc la o rearanjare nelegitimă și în consecință neproductivă. Între doi loci genici codificatori ai TCR, aflați în același cromozom, incluzând chiar și centromerul, poate avea loc procesul de recombinare, așa cum are loc
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
rare în cazul recombinării V(D)J și atunci când apar, ele conduc la o rearanjare nelegitimă și în consecință neproductivă. Între doi loci genici codificatori ai TCR, aflați în același cromozom, incluzând chiar și centromerul, poate avea loc procesul de recombinare, așa cum are loc frecvent între locii genici umani TCRβ și γ, aflați în cromozomul 7. Cercetările lui Grawunder și colab. (1999) au arătat că diversitatea Ig și TCR este generată în precursorii limfocitelor printr-un proces de rearanjare somatică V
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
a pierdut nici un nucleotid. Aceasta înseamnă că inserția s-a produs în procesul rearanjării de timpuriu, înainte ca exonucleaza să acționeze și să fasoneze capetele catenei polinucleotidice asamblate. Sudarea joncțiunilor codificatoare se face în toate celulele în care are loc recombinarea V(D)J, inclusiv în fibroblastele care au fost induse să realizeze această recombinare, prin exprimarea genelor de rearanjare RAG1 și RAG2, funcționale în asamblarea genelor mature pentru imunoglobuline. Deși se presupune că pentru o asemenea rearanjare este necesară o
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de timpuriu, înainte ca exonucleaza să acționeze și să fasoneze capetele catenei polinucleotidice asamblate. Sudarea joncțiunilor codificatoare se face în toate celulele în care are loc recombinarea V(D)J, inclusiv în fibroblastele care au fost induse să realizeze această recombinare, prin exprimarea genelor de rearanjare RAG1 și RAG2, funcționale în asamblarea genelor mature pentru imunoglobuline. Deși se presupune că pentru o asemenea rearanjare este necesară o exonuclează, trebuie să fie realizată mai întâi o incizie endonucleazică, la o oarecare distanță
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
presupune că pentru o asemenea rearanjare este necesară o exonuclează, trebuie să fie realizată mai întâi o incizie endonucleazică, la o oarecare distanță, în interiorul capătului segmentului codificator. Unilateralitatea informației secvențiale, operantă în rearanjarea V(D)J diferențiază acest tip de recombinare de alte tipuri de rearanjare cu specificitate de situs, care presupun participarea a două secvențe omoloage. EXCLUDEREA ALELICĂ, funcțională în elaborarea răspunsului imun, respectă totuși regula generală a mecanismelor ereditare bazate pe complementaritate. În procesul transcrierii genice, funcționează ca matriță
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
efectele nedorite ale unei asemenea rearanjări, care ar afecta mecanismele engramării asociate proceselor de memorie. La păsări, în bursa lui Fabricius, este exprimată doar RAG2, dar locii genici IgH și IgL conțin doar o singură regiune V funcțională, astfel că recombinarea V(D)J generează un singur produs. Diversificarea are totuși, loc, dar ulterior, atunci când celulele B care conțin genele IgH și IgL rearanjate, migrează în bursă și suferă conversie genică extensivă prin utilizare de elemente dintr-un set mare de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
A fost clonată o genă pentru o proteină de legare a heptamerului, denumită T160, și o genă pentru RBP-JK. RBP-JK a trezit în mod deosebit atenția, deoarece secvența sa de aminoacizi prezintă oarecare omologie cu familia integrazei, o enzimă de recombinare bacteriană. Dar expresia RBP-JK nu este specifică doar celulelor limfoide. Genele cu secvențe strâns înrudite se găsesc la organisme foarte îndepărtate filogenetic precum insecta Drosophila și drojdia Saccharomyces, cea de la Drosophila fiind identică cu un factor de dezvoltare care interacționează
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]