8,012 matches
-
Tampoane pentru testele de imunofluorescență 2.1. Tampon IF (tampon cu fosfat la 10 mM, pH 7,2) Tamponul menționat este utilizat pentru diluția anticorpilor. Na2HPO4.12H2O 2,7 g NaH2PO4.2H2O 0,4 g NaCl 8,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează cu autoclavă timp de 15 minute la 121 °C. 2.2. Tampon IF-Tween Tamponul menționat este utilizat pentru spălarea lamelor. Se adaugă 0,1 % Tween 20 la
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
IF. 2.3. Glicerol tamponat cu fosfat, pH 7,6 Tamponul menționat este utilizat ca lichid de suport pe ferestrele lamelor IF pentru a întări fluorescența. Na2HPO4.12H2O 3,2 g NaH2PO4.2H2O 0,15 g Glicerol 50 ml Apă distilată 100 ml Soluții suport antidecolorare sunt disponibile în comerț: de exemplu, Vectashield(r) (Vector Laboratories) sau Citifluor(r) (Leica). Apendicele 4 Determinarea gradului de contaminare în momentul testelor IF și FISH 1. Se numără numărul mediu de celule fluorescente caracteristice
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
și F = factorul de diluție al extractului concentrat repus în suspensie Apendicele 5 Medii de izolare și de cultură ale C. m. ssp. sepedonicus (a) Medii de cultură de tip general Agar nutritiv Agar nutritiv (Difco) 23,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele și se sterilizează cu autoclavă timp de 15 minute la 121 °C. Agar nutritiv cu dextroză Agar nutritiv Difco Bacto care conține 1 % D-glucoză (monohidrat). Se sterilizează cu autoclavă la 115 °C timp
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
autoclavă la 115 °C timp de 20 de minute. Agar cu drojdie, peptonă și glucoză (YPGA) Extract de drojdie (Difco) 5,0 g Bacto-peptonă (Difco) 5,0 g D-glucoză (monohidrat) 10,0 g Bacto-Agar (Difco) 15,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele și se sterilizează cu autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Mediu de cultură cu extract de drojdie și săruri minerale (YGM) Extract de drojdie bacto (Difco) 2,0 g D-glucoză (monohidrat
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
0 g D-glucoză (monohidrat) 2,5 g K2HPO4 0,25 g KH2PO4 0,25 g MgSO4.7H2O 0,1 g MnSO4.H2O 0,015 g NaCl 0,05 g FeSO4.7H2O 0,005 g Bacto-Agar (Difco) 18 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele și se sterilizează cu o jumătate de litru de autoclavă timp de 20 de minute la 115 °C. (b) Medii de creștere selective validate Mediu MTNA Cu excepția unor mențiuni contrare, toate ingredientele provin de la
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
g Manitol 2,5 g K2HPO4 0,25 g KH2PO4 0,25 g NaCl 0,05 g MgSO4.7H2O 0,1 g MnSO4.H2O 0,015 g FeSO4.7H2O 0,005 g Agar (oxoid nr. 1) 16,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele și se ajustează pH-ul la 7,2. După o trecere prin autoclavă (15 minute la 121 °C) și o răcire la 50 °C, se adaugă antibioticele: trimetoprim 0,06 g, acid nalidixic 0
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
După adăugarea antibioticelor, mediul se conservă o lună în atmosferă refrigerată. Mediu NCP-88 Agar nutritiv (Difco) 23 g Extract de drojdie (Difco) 2 g D-manitol 5 g K2HPO4 2 g KH2PO4 0,5 g MgSO4.7H2O 0,25 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele și se ajustează pH-ul la 7,2. După o trecere prin autoclavă și răcire la 50 °C, se adaugă următoarele antibiotice: sulfat de polimixină B (Sigma) 0,003 g, acid nalidixic (Sigma) 0
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Sigma) 0,003 g, acid nalidixic (Sigma) 0,008 g, cicloheximidă (Sigma) 0,2 g. Antibioticele se dizolvă în soluții mamă: acidul nalidixic în NaOH la 0,01 M; cicloheximida în etanol la 50 %, sulfatul de polimixină B în apă distilată. Soluțiile depozitate sunt sterilizate prin filtrare. Nota bene: Mediul bazal se conservă timp de trei luni. După adăugarea antibioticelor, mediul se conservă o lună în atmosferă refrigerată. Apendicele 6 Protocol și reactivi PCR validați Nota bene: Testele preliminare trebuie să
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Fragmentele de restricție obținute pe baza fragmentului specific de C. m. ssp. sepedonicus au o lungime de 282 bp și 220 bp. 2. Prepararea tamponului de încărcare 2.1. Bromofenol albastru (soluție concentrată la 10 %) Bromofenol albastru 5 g Apă distilată (bidest) 50 ml 2.2. Tampon de încărcare Glicerol (86 %) 3,5 ml Bromofenol albastru (5,1) 300 μl Apă distilată (bidest) 6,2 ml 3. 10X tampon de EDTA (TAE) triacetat, pH 8,0 Tampon tri 48,4 g
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
bp. 2. Prepararea tamponului de încărcare 2.1. Bromofenol albastru (soluție concentrată la 10 %) Bromofenol albastru 5 g Apă distilată (bidest) 50 ml 2.2. Tampon de încărcare Glicerol (86 %) 3,5 ml Bromofenol albastru (5,1) 300 μl Apă distilată (bidest) 6,2 ml 3. 10X tampon de EDTA (TAE) triacetat, pH 8,0 Tampon tri 48,4 g Acid acetic glacial 11,42 ml EDTA (sare disodică) 3,72 g Apă distilată 1,00 l Înainte de utilizare se diluează
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Bromofenol albastru (5,1) 300 μl Apă distilată (bidest) 6,2 ml 3. 10X tampon de EDTA (TAE) triacetat, pH 8,0 Tampon tri 48,4 g Acid acetic glacial 11,42 ml EDTA (sare disodică) 3,72 g Apă distilată 1,00 l Înainte de utilizare se diluează până la 1x. Disponibil și în comerț (de exemplu, Invitrogen sau echivalent). Apendicele 7 Reactivi validați pentru testul FISH 1. Oligosonde Sonda CMS-CY3-01 specifică pentru Cms 5'-ttg cgg ggc gca cat ctc tgc
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
întuneric și la o temperatură de -20 °C. În timpul utilizării se protejează de lumina directă a soarelui sau de lumina electrică directă. 5. Tampon M fosfatat 0,1, pH 7,0 Na2HPO4 8,52 g KH2PO4 5,44 g Apă distilată 1,00 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează cu autoclavă timp de 15 minute la 121 °C. Apendicele 8 Culturi de pătlăgele vinete Se seamănă semințe de pătlăgele vinete (Solanum melongena) într-un pământ de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
reacția Gram (modificarea lui Hucker) (Doetsch, 1981)32 Soluție de violet cristalizat Se dizolvă 2 g de violet cristalizat în 20 ml de etanol la 95 %. Se dizolvă 0,8 g de oxalat de amoniu în 80 ml de apă distilată. Se amestecă cele două soluții. Soluția iodo-iodurată a lui Lugol Iod 1 g Iodură de potasiu 2 g Apă distilată 300 ml Substanțele solide se zdrobesc împreună cu ajutorul unui pistil și al unui mojar. Se adaugă apa și se amestecă
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
20 ml de etanol la 95 %. Se dizolvă 0,8 g de oxalat de amoniu în 80 ml de apă distilată. Se amestecă cele două soluții. Soluția iodo-iodurată a lui Lugol Iod 1 g Iodură de potasiu 2 g Apă distilată 300 ml Substanțele solide se zdrobesc împreună cu ajutorul unui pistil și al unui mojar. Se adaugă apa și se amestecă într-un recipient închis pentru a se dizolva. Soluție colorantă de safranină Soluție mamă: Safranină O 2,5 g Etanol
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
exsudatul sau secțiunile de țesut decolorat din inelul vascular al tuberculului de cartof sau din căile vasculare ale tulpinii plantei de cartof, de tomată sau de alte plante gazdă ofilite. Se pune în suspensie, într-un volum mic de apă distilată sterilă sau într-un tampon fosfat de 50 mM (apendicele 4). Se lasă cinci-zece minute pe masă. (b) Se prepară o serie de diluții zecimale ale suspensiei. (c) Se transferă 50-100 μl de suspensie și de diluții într-un mediu
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
apariția simptomelor de ofilire și/sau epinastie, cloroză și de pipernicire. (5) Se izolează plantele simptomatice îndepărtând o secțiune de țesut din tulpină la 2 cm deasupra punctului inoculării. Se mărunțește și se suspendă într-un volum mic de apă distilată sterilă sau cu un tampon fosfat de 50 mM (apendicele 4). Se izolează suspensia prin diluare într-un mediu adecvat, de preferință mediu selectiv (apendicele 2), se incubează timp de 48-72 ore la 28 °C și se observă formarea coloniilor
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de contact: a se vedea http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main. Apendicele 2 Medii pentru izolarea și cultura R. solanacearum (a) Medii de creștere în general Geloză nutritivă (GN) Geloză nutritivă (Difco) 23,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Geloză cu drojdie - peptonă - glucoză (YPGA) Extract de levură (Difco) 5,0 g Bacto-peptonă (Difco) 5,0 g D(+) glucoză (monohidrat) 10
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Geloză cu drojdie - peptonă - glucoză (YPGA) Extract de levură (Difco) 5,0 g Bacto-peptonă (Difco) 5,0 g D(+) glucoză (monohidrat) 10,0 g Bacto-agar (Difco) 15,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Geloză cu zaharoză - peptonă (SPA) Zaharoză 20,0 g Bacto-peptonă (Difco) 5,0 g K2HPO4 0,5 g MgSO4·7H2O 0,25
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Geloză cu zaharoză - peptonă (SPA) Zaharoză 20,0 g Bacto-peptonă (Difco) 5,0 g K2HPO4 0,5 g MgSO4·7H2O 0,25 g Bacto-geloză (Difco) 15,0 g Apă distilată pH 7,2-7,4 1,0 l Se dizolvă ingredientele și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Mediul de tetrazoliu Kelman Acizi casaminici (Difco) 1,0 g Bacto-peptonă (Difco) 10,0 g Dextroză 5,0
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Se dizolvă ingredientele și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Mediul de tetrazoliu Kelman Acizi casaminici (Difco) 1,0 g Bacto-peptonă (Difco) 10,0 g Dextroză 5,0 g Bacto-agar (Difco) 15,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Se răcește la 50 °C și se adaugă o soluție apoasă sterilizată prin filtrare de clorură de 2,3,5-trifeniltetrazoliu (Sigma) pentru
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
validate Mediu SMSA (Englebrecht, 1994, modificat de Elphinstone et al., 1996) Mediu de bază Acizi casaminici (Difco) 1,0 g Bacto-peptonă (Difco) 10,0 g Glicerol 5,0 ml Bacto-agar (Difco) (a se vedea nota 2) 15,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Se răcește la 50 °C și se adaugă soluții apoase concentrate, sterilizate prin filtrare, conținând următoarele ingrediente pentru obținerea concentrațiilor finale prevăzute
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
pentru mediul selectiv SMSA, dar se elimină Bacto-Agar și clorura de 2-3-5-tetrazoliu. Mediu nutritiv modificat Wilbrink (Caruso et al., 2002) Zaharoză 10 g Proteoză peptonă 5 g K2HPO4 0,5 g MgSO4 0,25 g NaNO3 0,25 g Apă distilată 1 l Se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute și se răcește la 50 °C. Se adaugă soluții concentrate de antibiotice ca și pentru mediul nutritiv SMSA. Apendicele 3 A. Material de control standardizat disponibil în
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Tampoane pentru procedura de extracție 1.1. Tampon de extracție (50 mM tampon fosfat, pH 7,0) Acest tampon este utilizat pentru extracția bacteriei din țesuturile plantei prin omogenizare sau agitare. Na2HPO4 4,26 g KH2PO4 2,72 g Apă distilată 1, 00 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. Utilizarea următorilor compuși suplimentari poate fi utilă: Utilizare Cantitate (la l) Fulgi de Lubrol Peptizant (*) 0,5 g
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
tampon fosfat, pH 7,2) Acest tampon este utilizat pentru resuspendarea și diluția extractelor de taloane de tuberculi de cartof ca urmare a concentrării în extract concentrat prin centrifugare. Na2HPO4·12H2O 2,7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. 2. Tampoane pentru testul de imunofluorescență 2.1. Tampon IF: 10 mM PBS, pH 7,2 Acest tampon
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
15 minute. 2. Tampoane pentru testul de imunofluorescență 2.1. Tampon IF: 10 mM PBS, pH 7,2 Acest tampon este utilizat pentru diluarea anticorpilor. Na2HPO4·12H2O 2,7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g NaCl 8,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. 2.2. Tampon IF-Tween Acest tampon este utilizat pentru spălarea lamelor. Se adaugă 0,1 % Tween 20 la
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]