11,250 matches
-
sunt originare din colonii ținute în captivitate; (b) animalele au fost izolate în unități de carantină cel puțin șaizeci de zile; (c) animalele au fost supuse unui test, cu rezultat negativ, de seroneutralizare sau unui test ELISA autorizat pentru detectarea anticorpilor împotriva virușilor bolilor Hendra și Nipah, efectuat într-un laborator autorizat pentru aceste teste de către autoritățile competente pe probe de sânge prelevate de două ori într-un interval de 21-30 de zile, a doua probă fiind prelevată în termen de
32006D0146-ro () [Corola-website/Law/294720_a_296049]
-
au fost ținute în exploatații în care au fost confirmate cazuri de boală Nipah în ultimele 60 de zile; (c) animalele au fost supuse unui test, cu rezultat negativ, ELISA de captură IgG efectuat într-un laborator autorizat pentru detectarea anticorpilor împotriva virușilor bolii Nipah de către autoritățile sanitar-veterinare competente, pe o probă de sânge prelevată în termen de 10 zile înainte de export. (3) Interdicția prevăzută la alineatul (1) nu se aplică câinilor și pisicilor aflați în tranzit, cu condiția ca aceștia
32006D0146-ro () [Corola-website/Law/294720_a_296049]
-
din celulele de R. solanacearum care se colorează în albastru-negru. Membrana celulară se colorează în roz. 3. Teste de seroaglutinare Aglutinarea celulelor de R. solanacearum în exsudatul bacterian sau în extractele de țesuturi simptomatice se observă cel mai bine folosind anticorpi validați (a se vedea apendicele 3) etichetați cu marcatori colorați corespunzători, precum celulele de Staphylococcus aureus roșu sau particule de latex colorate. În caz de utilizare a unui material disponibil în comerț (a se vedea apendicele 3), se urmează instrucțiunile
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
sau particule de latex colorate. În caz de utilizare a unui material disponibil în comerț (a se vedea apendicele 3), se urmează instrucțiunile producătorului. În caz contrar, se urmează procedura descrisă în continuare: (a) Se amestecă picăturile unei suspensii de anticorpi și de exsudat bacterian marcate (circa 5 μl în fiecare caz) pe ferestrele lamelor de testare cu multe godeuri. (b) Se prepară frotiuri de control pozitiv și negativ din suspensii biovar 2 de R. solanacearum și dintr-o sușă heterologă
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
îmbogățite simultan. În consecință, izolarea R. solanacearum în medii nutritive de cultură îmbogățite poate fi dificilă. De asemenea, întrucât populațiile de saprofite apropiate din punct de vedere serologic se pot înmulți, în cazul utilizării testului ELISA, se recomandă utilizarea de anticorpi monoclonali specifici în locul anticorpilor policlonali. 4.2.1. Pentru îmbogățirea PCR, se transferă 100 μl de extract de eșantion în 10 ml de mediu nutritiv lichid de îmbogățire (apendicele 2) împărțit anterior în tuburi sau flacoane fără urme de ADN
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
izolarea R. solanacearum în medii nutritive de cultură îmbogățite poate fi dificilă. De asemenea, întrucât populațiile de saprofite apropiate din punct de vedere serologic se pot înmulți, în cazul utilizării testului ELISA, se recomandă utilizarea de anticorpi monoclonali specifici în locul anticorpilor policlonali. 4.2.1. Pentru îmbogățirea PCR, se transferă 100 μl de extract de eșantion în 10 ml de mediu nutritiv lichid de îmbogățire (apendicele 2) împărțit anterior în tuburi sau flacoane fără urme de ADN. Pentru îmbogățirea ELISA, se
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
un test FISH drept test secundar. În cazul în care testul de imunofluorescență este utilizat ca test secundar și rezultatul lui este pozitiv, analiza trebuie completată cu teste suplimentare după cum prevede diagrama funcțională. Notă: Se utilizează o sursă validată de anticorpi de R. solanacearum (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Se recomandă stabilirea titrului pentru fiecare lot nou de anticorpi. Titrul se definește ca fiind cea mai mare diluție la care se obține
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
teste suplimentare după cum prevede diagrama funcțională. Notă: Se utilizează o sursă validată de anticorpi de R. solanacearum (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Se recomandă stabilirea titrului pentru fiecare lot nou de anticorpi. Titrul se definește ca fiind cea mai mare diluție la care se obține o reacție optimă atunci când se testează o suspensie de 105-106 celule pe ml din sușa omologă de R. solanacearum folosind un conjugat corespunzător de izotiocianat de fluoresceină
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
din sușa omologă de R. solanacearum folosind un conjugat corespunzător de izotiocianat de fluoresceină (FITC), în conformitate cu recomandările producătorului. Toate antiserurile policlonale validate au un titru de imunofluorescență de cel puțin 1: 2 000. La efectuarea testului, diluțiile de lucru ale anticorpilor trebuie să fie aproximativ egale sau egale cu cele ale titrului. Testul trebuie efectuat cu extracte de eșantion proaspăt preparate. După caz, se pot folosi și extracte conservate în soluție de glicerol la o temperatură cuprinsă între - 68 °C și
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
se usuce la temperatura ambiantă sau prin încălzire la o temperatură de 40-45 °C. Celulele bacteriene se fixează pe lamă prin încălzire (cincisprezece minute la 60 °C), trecere prin flacără, cu 95 % etanol sau în conformitate cu instrucțiunile specifice ale furnizorilor de anticorpi. În cazul în care este necesar, lamele fixate pot fi refrigerate sau depozitate într-o cutie de uscare pe perioada necesară (cel mult trei luni) înainte de un nou test. 5.3. Procedura testului de imunofluorescență (i) În conformitate cu metoda de pregătire
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu metoda de pregătire a lamelor de test indicată la punctul 5.1 (ii): Se prepară diluția de lucru a anticorpilor în tampon pentru imunofluorescență. Diluția de lucru are efect asupra specificității. Figura 1: Pregătirea lamei de test în conformitate cu punctele 5.1. (i) și 5.3. (i) Diluții ale extractului concentrat resuspendat 1/100 1/1 1/1 1/1 1
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
1. (i) și 5.3. (i) Diluții ale extractului concentrat resuspendat 1/100 1/1 1/1 1/1 1/1 Diluții ale extractului concentrat resuspendat (T = titru) T/2 T/4 T/2 T 2T Diluții duble ale antiserului/anticorpilor ***[PLEASE INSERT FIGURE AND REPLACE TEXT WITH THE ROMANIAN CORRESPONDENT]*** Échantillon 1 = eșantion 1 Double de l'échantillon 1 ou échantillon 2 = Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 Figura 2: Pregătirea lamei de test în conformitate cu punctele 5.1. (ii
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
CORRESPONDENT]*** Échantillon 1 = eșantion 1 Double de l'échantillon 1 ou échantillon 2 = Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 Figura 2: Pregătirea lamei de test în conformitate cu punctele 5.1. (ii) și 5.3. (ii) Diluție de lucru a antiserului/anticorpilor 1/1 1/10 1/100 gol gol Diluție decimală a extractului concentrat resuspendat ***[PLEASE INSERT FIGURE AND REPLACE TEXT WITH THE ROMANIAN CORRESPONDENT]*** Échantillon 1 = eșantion 1 Double de l'échantillon 1 ou échantillon 2 = Duplicatul eșantionului 1 sau
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
1 = eșantion 1 Double de l'échantillon 1 ou échantillon 2 = Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 5.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă umedă. Se acoperă complet fiecare fereastră de test cu diluția sau diluțiile de anticorpi. Cantitatea de antiser aplicat în fiecare fereastră trebuie să fie cel puțin echivalentă cu cantitatea de extract aplicată. Următoarea procedură ar trebui aplicată în absența instrucțiunilor specifice ale furnizorilor de anticorpi: 5.3.2. Se incubează lamele pe hârtie umedă
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
fiecare fereastră de test cu diluția sau diluțiile de anticorpi. Cantitatea de antiser aplicat în fiecare fereastră trebuie să fie cel puțin echivalentă cu cantitatea de extract aplicată. Următoarea procedură ar trebui aplicată în absența instrucțiunilor specifice ale furnizorilor de anticorpi: 5.3.2. Se incubează lamele pe hârtie umedă acoperite timp de 30 de minute la temperatura ambiantă (18-25 °C). 5.3.3. Se scutură picăturile de antiser de pe fiecare lamă și se clătesc lamele cu atenție cu un tampon
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
îndepărtează cu grijă cu o sugativă. 5.3.4. Se așază lamele pe hârtie umedă. Se acoperă ferestrele de test cu diluția conjugatului FITC utilizat pentru determinarea titrării. Cantitatea conjugatului aplicată în ferestre trebuie să fie echivalentă cu cantitatea de anticorpi utilizată. 5.3.5. Se incubează lamele pe hârtie umedă, acoperite timp de treizeci de minute la temperatura ambiantă (18-25 °C). 5.3.6. Se scutură picăturile de conjugat de pe lamă. Se clătesc și se spală în conformitate cu cele indicate anterior
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
lungul perimetrului. Pentru eșantioanele fără celule sau cu un număr redus de celule se examinează cel puțin 40 câmpuri microscopice. Se verifică mai întâi lama de control pozitiv. Celulele trebuie să fie intens fluorescente și colorate complet la titrul de anticorpi sau la diluția de lucru determinată. Testul IF (secțiunea VI.A.5) trebuie repetat în cazul în care apare o colorație anormală. 5.4.2. Se caută prezența celulelor intens fluorescente cu morfologia caracteristică a R. solanacearum în ferestrele de
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
a R. solanacearum în ferestrele de test ale lamelor (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intensitatea fluorescenței trebuie să fie echivalentă cu cea a sușei de control pozitiv la aceeași diluție de anticorpi. Celulele cu colorație incompletă sau cu fluorescență slabă nu trebuie luate în considerare. În cazul în care se suspectează o contaminare, testul trebuie refăcut. Se poate întâmpla atunci când toate lamele unui lot indică celule pozitive din cauza unei contaminări a tamponului
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
morfologie asemănătoare cu R. solanacearum în extractele concentrate de taloane de cartof și în bucățile de tulpini. 5.4.4. Trebuie luate în considerare numai celulele fluorescente ale căror dimensiune și morfologie sunt caracteristice titrului sau diluției de lucru a anticorpilor menționați la punctul 5.3 5.4.5. Interpretarea testului IF: (i) În cazul în care sunt descoperite celule intens fluorescente cu morfologie caracteristică, se determină numărul mediu de celule tipice pe câmp microscopic și se calculează numărul de celule
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
pregătirea eșantioanelor de control pozitiv folosind filtrul cu rodamin. 8. Testele ELISA Principiu ELISA nu poate fi utilizat ca test facultativ pe lângă testele IF, PCR sau FISH din cauza sensibilității sale relativ slabe. În cazul aplicării metodei DAS-ELISA, îmbogățirea și utilizarea anticorpilor monoclonali este obligatorie (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Îmbogățirea eșantioanelor până la efectuarea testului ELISA poate fi utilă pentru sporirea sensibilității acestuia, dar poate să eșueze din cauza concurenței altor organisme în eșantion
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Îmbogățirea eșantioanelor până la efectuarea testului ELISA poate fi utilă pentru sporirea sensibilității acestuia, dar poate să eșueze din cauza concurenței altor organisme în eșantion. Notă: Se folosește o sursă validată de anticorpi de R. solanacearum (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Se recomandă să se stabilească titrul pentru fiecare lot nou de anticorpi. Titrul se definește ca fiind cea mai mare diluție la care
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
altor organisme în eșantion. Notă: Se folosește o sursă validată de anticorpi de R. solanacearum (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Se recomandă să se stabilească titrul pentru fiecare lot nou de anticorpi. Titrul se definește ca fiind cea mai mare diluție la care se obține o reacție optimă atunci când se testează o suspensie de 105-106 celule pe ml din sușa omologă de R. solanacearum folosind conjugate corespunzătoare de anticorpi secundari, în conformitate cu recomandările
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
lot nou de anticorpi. Titrul se definește ca fiind cea mai mare diluție la care se obține o reacție optimă atunci când se testează o suspensie de 105-106 celule pe ml din sușa omologă de R. solanacearum folosind conjugate corespunzătoare de anticorpi secundari, în conformitate cu recomandările producătorului. La efectuarea testului, diluția de lucru a anticorpilor trebuie să fie aproximativ egală sau egală cu cea a titrului formulei comerciale. Se stabilește titrul anticorpilor într-o suspensie de 105-106 celule/ml din sușa omologă de
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
diluție la care se obține o reacție optimă atunci când se testează o suspensie de 105-106 celule pe ml din sușa omologă de R. solanacearum folosind conjugate corespunzătoare de anticorpi secundari, în conformitate cu recomandările producătorului. La efectuarea testului, diluția de lucru a anticorpilor trebuie să fie aproximativ egală sau egală cu cea a titrului formulei comerciale. Se stabilește titrul anticorpilor într-o suspensie de 105-106 celule/ml din sușa omologă de R. solanacearum. Se include un extract de eșantion care a dat anterior
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
ml din sușa omologă de R. solanacearum folosind conjugate corespunzătoare de anticorpi secundari, în conformitate cu recomandările producătorului. La efectuarea testului, diluția de lucru a anticorpilor trebuie să fie aproximativ egală sau egală cu cea a titrului formulei comerciale. Se stabilește titrul anticorpilor într-o suspensie de 105-106 celule/ml din sușa omologă de R. solanacearum. Se include un extract de eșantion care a dat anterior rezultate negative pentru R. solanacearum și o suspensie a unei bacterii care nu provoacă reacții încrucișate într-
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]