11,250 matches
-
extractele din godeuri. Se spală godeurile de trei ori cu PBS-Tween (apendicele 4), lăsând ultima soluție de spălare cel puțin cinci minute în godeuri. (5) Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului anti-R. solanacearum în tampon de saturație (apendicele 4). Pentru anticorpii comerciali validați, se folosesc diluțiile recomandate (de obicei, de două ori mai concentrate decât titrul). (6) Se aplică 100 μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37 °C. (7) Se scoate soluția de anticorpi din godeuri și
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
apendicele 4). Pentru anticorpii comerciali validați, se folosesc diluțiile recomandate (de obicei, de două ori mai concentrate decât titrul). (6) Se aplică 100 μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37 °C. (7) Se scoate soluția de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior (punctul 4). (8) Se prepară diluția corespunzătoare de conjugați secundari de anticorpi și de fosfatază alcalină în tampon de saturație. Se adaugă 100 μl în fiecare godeu și se incubează o
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
aplică 100 μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37 °C. (7) Se scoate soluția de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior (punctul 4). (8) Se prepară diluția corespunzătoare de conjugați secundari de anticorpi și de fosfatază alcalină în tampon de saturație. Se adaugă 100 μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37 °C. (9) Se scoate conjugatul de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior (punctul 4
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
punctul 4). (8) Se prepară diluția corespunzătoare de conjugați secundari de anticorpi și de fosfatază alcalină în tampon de saturație. Se adaugă 100 μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37 °C. (9) Se scoate conjugatul de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior (punctul 4). (10) Se adaugă 100 μl de soluție de substrat de fosfatază alcalină (apendicele 4) în fiecare godeu. Se incubează în întuneric la temperatura ambiantă și se măsoară absorbanța la
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
adaugă eșantioane de control pozitiv și negativ în două godeuri pe fiecare placă. Se incubează timp de șaisprezece ore la 4 °C. (3) Se spală godeurile de trei ori cu PBS-Tween (apendicele 4). (4) Se prepară o diluție corespunzătoare de anticorpi monoclonali specifici R. solanacearum în PBS (apendicele 4) conținând, de asemenea, 0,5 % seralbumină bovină (BSA) și se adaugă 190 μl în fiecare godeu. Se incubează două ore la 37 °C. (5) Se spală godeurile de trei ori cu PBS-Tween
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
negativă ELISA în godeurile eșantioanelor de control pozitiv indică faptul că testul nu a fost efectuat corect sau că a fost inhibat. O lectură ELISA pozitivă în godeurile eșantioanelor de control negativ indică o contaminare încrucișată sau o legătură de anticorpi nespecifică. 9. Testul biologic Notă: Testele preliminare efectuate în conformitate cu această metodă trebuie să permită o detectare reproductibilă a 103-104 celule formând colonii de R. solanacearum per ml adăugate la extractele de eșantioane care au dat anterior rezultate negative (preparare: a
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
efectuează numai două teste de identificare, nu se efectuează alte teste serologice pe lângă această metodă. 3.1. Se prepară o suspensie de circa 108 celule/ml în PBS 1X (apendicele 4). 3.2. Se aplică procedura ELISA corespunzătoare cu un anticorp monoclonal specific de R. solanacearum. 3.3. Un test ELISA este pozitiv atunci când valoarea ELISA a culturii este egală cel puțin cu jumătatea celei obținute pentru controlul pozitiv. 4. Testul PCR 4.1. Se prepară o suspensie de circa 106
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. 2. Tampoane pentru testul de imunofluorescență 2.1. Tampon IF: 10 mM PBS, pH 7,2 Acest tampon este utilizat pentru diluarea anticorpilor. Na2HPO4·12H2O 2,7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g NaCl 8,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. 2.2
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
g KH2PO4 2,0 g Na2HPO4·12H2O 29,0 g KCl 2,0 g Apă distilată 1,0 l 3.3. PBS-Tween 10 × PBS 100 ml 10 % Tween 20 5 ml Apă distilată 895 ml 3.4. Tampon de blocare (anticorpi) (trebuie preparat proaspăt) 10 × PBS 10,0 ml Polivinilpirolidonă-44000 (PVP-44) 2,0 g 10 % Tween 20 0,5 ml Lapte praf 0,5 g Apă distilată până la 100 ml 3.5. Soluție de substrat de fosfatază alcalină, pH 9,8
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
fie [(b) dispune de un program de vaccinare sistematic împotriva febrei aftoase, iar carnea provine din efective în care eficacitatea acestui program de vaccinare este controlată de autoritățile sanitar-veterinare competențe printr-o supraveghere serologica regulată care indică nivelurile adecvate de anticorpi și dovedește absența răspândirii virusului febrei aftoase;] (5) (18) sau [(b) este îndemn de febră aftoasa de douăsprezece luni, iar în cursul acestei perioade nu a fost efectuată nici o vaccinare împotriva acestei boli și este controlat de autoritățile sanitar-veterinare competențe
32006D0259-ro () [Corola-website/Law/294765_a_296094]
-
nu a primit alți porci în afară de scrofițe, care au fost supuse la teste de laborator realizate pe probe prelevate în cele zece zile care au precedat data expedierii și care au avut rezultate negative în ceea ce privește: - un test de detectare a anticorpilor și - două teste consecutive efectuate la un interval de șapte zile, de detectare (prin RT-PCR) a genomului virusului pestei porcine clasice, realizate în laboratorul național de referință. (3) Prin derogare de la alineatul (1) litera (a), autoritatea competentă poate autoriza transportul
32006D0411-ro () [Corola-website/Law/294821_a_296150]
-
genetic specific, în eșantioane de țesuturi, de organe, de sânge sau de materii fecale de la păsările de curte sau de la alte păsări; (b) detectarea, la păsări, a semnelor clinice și a leziunilor post mortem ale bolii; (c) demonstrarea formării de anticorpi specifici în eșantioane de sânge de la păsările respective. 5. Confirmarea infectării mamiferelor cu un virus influența A de origine aviară înalt patogen sau, în cazul în care este slab patogen, care aparține subtipurilor H5 și H7, trebuie să se bazeze
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
sau mai multe criterii dintre cele menționate la literele (a) și (b); (a) detectarea virusului infecțios al IA, a antigenului sau a materialului genetic specific în eșantioane de țesuturi, organe, sânge sau materii fecale de la mamifere; (b) demonstrarea formării de anticorpi specifici în eșantioane de sânge de la mamiferele respective; 6. Procedurile, metodele de prelevare a eșantioanelor și criteriile de evaluare a rezultatelor testelor de laborator trebuie să fie: (a) cele descrise în prezentul manual de diagnostic sau (b) cele autorizate de
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
la infecții, iar semnele prezente și mortalitatea erau asemănătoare cu felul în care se manifesta boala la pui sau la curcani. Cu toate acestea, studiile experimentale au stabilit că prepelițele sunt rezistente la anumite sușe HPAI. Pentru toate păsările, prezența anticorpilor dirijați împotriva aceluiași subtip H, indiferent dacă este consecința unei vaccinări sau a unei infectări naturale, poate însemna că infecția cu virusul HPAI nu determină semne clinice evidente. 3. Leziuni post mortem la păsările infectate cu virusul HPAI Păsările care
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
nouă - unsprezece zile. În principiu, ouăle respective trebuie să provină de la un efectiv lipsit de agenți patogeni specifici, dar, în cazul în care acest lucru este imposibil, este permisă folosirea ouălor provenite de la un efectiv recunoscut ca fiind lipsit de anticorpi anti-IA (seronegativ). Ouăle inoculate sunt păstrate la 37 °C și zilnic se efectuează mirajul. Treptat, ouăle care conțin embrioni morți sau muribunzi și toate ouăle care rămân după șase zile de inoculare trebuie refrigerate la 4 °C, iar lichidul lor
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
antigenilor nucleoproteinici sau matriciali comuni tuturor virusurilor gripale de tip A. În acest scop, se poate utiliza dubla imunodifuzie, care implică fie preparate de virus concentrat, fie extracte de membrane corioalantoidiene infectate. Metodele de predilecție în ceea ce privește testele serologice pentru evidențierea anticorpilor virusului IA sunt hemaglutinarea (HA) și inhibarea hemaglutinării (IH). Capitolul 2.7.12 din manualul testelor de diagnostic și al vaccinurilor pentru animalele terestre al Oficiului Internațional de Epizootii (OIE) conțin informații detaliate referitoare la tehnicile de laborator și la
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
și detectarea unei infectări naturale la păsările vaccinate. Metoda care s-a dovedit utilizabilă constă în folosirea unui vaccin care conține un virus de același subtip hemaglutinant (H) ca și virusul sălbatic observat, dar purtător al unei neuraminidaze (N) diferite. Anticorpii dezvoltați împotriva neuraminidazei virusului sălbatic acționează ca markeri naturali ai infecției. Sistemul menționat a fost folosit în Italia în urma reapariției unui virus LPAI H7N1 în 2000. Pentru a completa măsurile de combatere directă, s-a pus în aplicare o strategie
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
pus în aplicare o strategie DIVA care utilizează un vaccin alcătuit din H7N3 pentru a combate o infecție sălbatică de tipul H7N1. Păsările vaccinate au fost diferențiate de păsările expuse în mod natural printr-un test serologic care permite decelarea anticorpilor specifici anti-N1. Aceeași tehnică a fost folosită în Italia în 2002-2003 pentru a controla un virus LPAI provocat de H7N3, prin intermediul unui vaccin H7N1 și al unui test serologic care detecta anticorpii anti-N3. În ambele cazuri, vaccinarea însoțită de o
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
natural printr-un test serologic care permite decelarea anticorpilor specifici anti-N1. Aceeași tehnică a fost folosită în Italia în 2002-2003 pentru a controla un virus LPAI provocat de H7N3, prin intermediul unui vaccin H7N1 și al unui test serologic care detecta anticorpii anti-N3. În ambele cazuri, vaccinarea însoțită de o abatorizare sanitară pe baza strategiei DIVA a permis eradicarea virusului sălbatic. Tehnica menționată este pusă în dificultate în cazul în care apare un virus sălbatic cu același antigen N ca virusul sălbatic
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
în care subtipuri care prezintă aceiași antigeni N circulă deja pe teren. Rațele, în special, sunt cunoscute ca purtătoare ale mai multor subtipuri. De asemenea, era necesar să se pună la punct un test adaptat pentru depistarea sistematică a prezenței anticorpilor antineuraminidază în cadrul efectivelor. Italia a dezvoltat și a aplicat un test serologic ad-hoc bazat pe un test de imunofluorescență indirectă care folosea, ca antigen N, proteine exprimate de baculovirusuri recombinante. Testele respective vor beneficia poate de o aplicare mai extinsă
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
vaccinurile cu vector recombinant, permite utilizarea testelor AGID clasice sau a testelor ELISA bazate pe o nucleoproteină, o proteină nestructurală sau proteine matriciale, pentru a detecta contaminarea păsărilor vaccinate. Pentru vaccinurile inactivate, s-a descris un test care permite detectarea anticorpilor împotriva proteinei nestructurale a virusurilor, produși numai în momentul infectării naturale. O astfel de tehnică trebuie încă validată pe teren, dar este limitată de faptul că o infectare naturală a unui efectiv cu un virus gripal, indiferent de subtip, antrenează
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
nestructurale a virusurilor, produși numai în momentul infectării naturale. O astfel de tehnică trebuie încă validată pe teren, dar este limitată de faptul că o infectare naturală a unui efectiv cu un virus gripal, indiferent de subtip, antrenează producția de anticorpi dirijați împotriva proteinei nestructurale. Elaborarea metodelor rapide și sensibile de detectare a virusurilor, în special a celor care pot fi automatizate, precum RT-PCR în timp real, dovedește că ar fi posibil ca metodele respective să se folosească pentru a efectua
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
clinice datorate contaminării porcilor cu alți viruși gripali de origine aviară. Diagnosticul unei infecții provocate de virusul IA la porci este, în ansamblu, similar cu diagnosticul pentru speciile aviare: se bazează pe izolarea virusului, pe tehnicile moleculare și pe detectarea anticorpilor specifici cu ajutorul testelor de inhibare a hemaglutinării. Cu toate acestea, există anumite diferențe și nici unul dintre teste nu este total validat pentru a permite confirmarea contaminării porcilor cu un virus IA. 2. Eșantioane folosite pentru izolarea virusului Infecțiile porcilor cu
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
temperatura recomandată, în general, pentru incubarea ouălor în vederea izolării virusului influenței de tip A al mamiferelor este de 35 °C, dar, din nou, pentru virusurile puțin adaptate la porci, o temperatură de 37 °C nu ar împiedica izolarea. 4. Detectarea anticorpilor specifici cu ocazia testelor IH Izolarea virusului sau detectarea moleculară constituie probabil metodele cele mai sensibile de determinare a prezenței unei infecții provocate de virusul IA la porc. Cu toate acestea, s-au decelat răspunsuri serologice la porci fără să
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
zile și au fost supuse la următoarele teste sanitare, ale căror rezultate au fost negative: - o probă de seroaglutinare pentru bruceloză, efectuată în conformitate cu procedura stabilită la anexa C la Directiva 64/432/CEE; - o probă de depistare a antigenelor cu anticorpi prin imunofluorescență sau o cultură pentru infecția campylobacter fetus pe o probă de material prepuțial sau de spălătură vaginală artificială; dacă este vorba de femele, trebuie realizată o probă de aglutinare a mucoasei vaginale; - un examen microscopic și o cultură
32004D0101-ro () [Corola-website/Law/292263_a_293592]