1,026 matches
-
caz, perioadele prevăzute la alineatele (1) și (2) încep la data la care a fost introdusă ultima pasăre importată și nici una din păsările prezente nu poate părăsi cotețul înainte de sfârșitul acestor perioade. (4) Ouăle destinate incubației importate sunt puse la incubat în incubatoare sau clocitoare separate. De asemenea, ouăle destinate incubației importate pot fi introduse în incubatoare sau clocitoare unde se mai află deja alte ouă destinate incubației. În acest caz, perioadele prevăzute la alineatele (1) și (2) încep la data
32006D0696-ro () [Corola-website/Law/294958_a_296287]
-
prevăzute la alineatele (1) și (2) încep de la data la care a fost introdusă ultima ratită importată și nici una din ratitele sau păsările prezente nu pot părăsi clădirea înainte de sfârșitul perioadelor respective. (4) Ouăle destinate incubației importate sunt puse la incubat în incubatoare sau clocitoare separate. De asemenea, ouăle destinate incubației importate pot fi introduse în incubatoare sau clocitoare în care se află deja alte ouă destinate incubației. În acest caz, perioadele prevăzute la alineatele (1) și (2) încep de la data
32006D0696-ro () [Corola-website/Law/294958_a_296287]
-
sau mai multe diluții de anticorpi. Cantitatea de anticorpi aplicată pe fiecare fereastră trebuie să fie cel puțin egală cu volumul de extract aplicat. În absența instrucțiunilor specifice ale furnizorilor de anticorpi, se aplică următoarea procedură: 4.3.2. se incubează lamele pe hârtie umedă și sub un capac-clopot timp de 30 de minute, la temperatura mediului ambiant (18-25 °C); 4.3.3. se elimină picăturile de pe fiecare lamă și se clătește cu grijă într-o soluție tampon pentru imunofluorescență. Se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
3.4. se așază lamele pe hârtie umedă. Se acoperă ferestrele de test cu conjugat FITC la diluția utilizată la titrare. Cantitatea de conjugat aplicată pe ferestre trebuie să fie identică cu cantitatea de anticorpi utilizată; 4.3.5. se incubează lamele pe hârtie umedă și sub capac-clopot timp de 30 de minute, la temperatura mediului ambiant (18-25 °C); 4.3.6. se elimină de pe lamă picăturile de conjugat. Se clătește și se spală în conformitate cu indicațiile anterioare (punctul 4.3.3
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
timp de 8 minute la 7 000 g. 5.1.3. Se elimină lichidul supernatant și se dizolvă extractul concentrat în 500 μl de fixativ preparat cu mai puțin de 24 de ore înainte. Se agită și se lasă la incubat toată noaptea la 4 °C. Se mai poate utiliza ca fixativ etanol la 96 %. În acest caz, extractul concentrat menționat la punctul 5.1.2 se dizolvă într-un amestec format din 50 μl de tampon fosfatat la 0,01
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
caz, extractul concentrat menționat la punctul 5.1.2 se dizolvă într-un amestec format din 50 μl de tampon fosfatat la 0,01 M și din 50 μl etanol la 96 %. Se amestecă la vortex și se lasă la incubat la 4 °C timp de 30-60 minute. 5.1.4. Se pune la centrifugat timp de 8 minute la 7 000 g, se elimină lichidul supernatant și se repune în suspensie extractul concentrat în 75 μl de tampon fosfatat la
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
demineralizată și se usucă cu hârtie de filtru. O altă posibilitate: în fiecare godeu, în locul lizozimei, se adaugă la tamponul (2mM Tri-HCl, 2mM Cacl2, pH 7,4) 50 μl de proteinază K la 40-400 μg/ml, apoi se lasă la incubat la 37 °C timp de 30 de minute. 5.2.2. Se deshidratează celulele prin băi succesive de etanol la 50 %, 80 % și 96 % de un minut fiecare. Se așază lamele pe un suport și se lasă să se usuce
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
zece minute. 3. Se așază tubul pe gheață timp de cinci minute. 4. Se adaugă 80 μl de soluție concentrată de lizozimă (50 mg de lizozimă pe mililitru în 10 mM Tri HCl, pH 8,0) și se lasă la incubat la 37 °C timp de 30 de minute. 5. Se adaugă 220 μl de Easy DNA(r) soluție A (Invitrogen), se omogenizează bine prin agitare și se lasă la incubat la 65 °C timp de 30 de minute. 6. Se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
mM Tri HCl, pH 8,0) și se lasă la incubat la 37 °C timp de 30 de minute. 5. Se adaugă 220 μl de Easy DNA(r) soluție A (Invitrogen), se omogenizează bine prin agitare și se lasă la incubat la 65 °C timp de 30 de minute. 6. Se adaugă 100 μl de Easy DNA(r) soluție B (Invitrogen), se omogenizează bine prin agitare până când precipitatul circulă liber în tub, iar proba prezintă o viscozitate uniformă. 7. Se adaugă
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
4 °C, pentru a separa fazele și a forma interfaza. 9. Se varsă faza superioară într-un alt tub Eppendorf. 10. Se adaugă 1 mililitru de etanol la 100 % (-20 °C), se omogenizează rapid prin agitare și se lasă la incubat pe gheață timp de 10 minute. 11. Se centrifughează la 15 000 g timp de 20 de minute la 4 °C și se elimină etanolul din extractul concentrat. 12. Se adaugă 500 μl de etanol la 80 % (-20 ° C) și
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
exemplu λ = 302 nm) și se notează rezultatele. 6.3.4. Pentru toate cazurile/rezultatele noi se verifică autenticitatea amplimerului, efectuând o analiză de restricție enzimatică pe o probă din ADN-ul amplificat rămas. În acest scop, se lasă la incubat la o temperatură optimă și pe o durată optimă, folosind o enzimă și un tampon corespunzătoare (a se vedea apendicele 6). Se decodează fragmentele digerate prin electroforeză pe gel de agaroză, în conformitate cu metoda indicată anterior și se vizualizează prin diafanoscopie
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
a se vedea secțiunea 4). 7.6. Ca martori negativi, se inoculează cinci plante prin aceeași metodă (a se vedea punctul 7.3 sau 7.4) cu o soluție tampon sterilă de extract concentrat. 7.7. Se lasă plantele la incubat până la patru săptămâni la temperaturi între 18 °C și 24 °C, în spații adaptate la condițiile de carantină. În timpul incubației se menține o lumină suficientă și un grad ridicat de umiditate (de la 70 % la 80 %), asigurând o udare adecvată pentru
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
veștejire din cauza lipsei apei. Celulele de C. m. ssp. sepedonicus nu rezistă la temperaturi mai mari de 30 °C; temperatura ideală de cultură este de 21 °C. Pentru a evita riscurile de contaminare, martorii pozitivi și negativi se pun la incubat în seră sau fitotron pe etajere complet separate sau, în cazul în care spațiul este limitat, se prevede o compartimentare riguroasă. În cazul în care plante din eșantioane diferite trebuie să stea la incubat aproape unele de altele, plantele respective
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
pozitivi și negativi se pun la incubat în seră sau fitotron pe etajere complet separate sau, în cazul în care spațiul este limitat, se prevede o compartimentare riguroasă. În cazul în care plante din eșantioane diferite trebuie să stea la incubat aproape unele de altele, plantele respective se vor separa cu ajutorul unor ecrane corespunzătoare. Se va acorda o mare atenție evitării contaminării încrucișate în timpul fertilizării, al udării, al inspecțiilor și în orice alt caz de manipulare. Este necesar să se evite
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
unui aplicator, întinderea în striuri pe o a doua lamă a restului rămas pe aplicator și repetarea procedurii pe o a treia lamă. Aplicatorul permite astfel ca pe lame să se obțină un efect de diluție. 8.1.3. Se incubează lamele la adăpost de lumină și la temperaturi cuprinse între 21 °C și 23 °C. 8.1.4. Prima examinare a lamelor, cu numărarea, în raport cu lamele martori, a eventualelor colonii cu aspect asemănător cu C. m. ssp. sepedonicus trebuie să
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
asemănător cu C. m. ssp. sepedonicus, pe unul dintre următoarele medii (formulele figurează în apendicele 5): agar nutritiv cu dextroză (numai pentru repicări); agar cu drojdie, peptonă și glucoză; agar cu extract de drojdie și săruri minerale. Se lasă la incubat până la 10 zile la o temperatură cuprinsă între 21 °C și 24 °C. C. m. ssp. sepedonicus se multiplică lent și produce, în general în zece zile, colonii de dimensiunea și de forma unui vârf de ac, convexe și de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Se determină caracteristicile fenotipice menționate în continuare, care sunt în mod sistematic prezente sau absente la C. m. ssp. sepedonicus, în conformitate cu metodele lui Lelliott și Stead (1987), Klement et al. (1990), Schaad (2001) și anonim (1987). Toate mediile trebuie să incubeze la 21 °C și să fie examinate după șase zile. În cazul în care nu se constată nici o multiplicare, se lasă la incubat până la 20 de zile. Fiecare test trebuie să includă o sușă cunoscută de C. m. ssp. sepedonicus
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Lelliott și Stead (1987), Klement et al. (1990), Schaad (2001) și anonim (1987). Toate mediile trebuie să incubeze la 21 °C și să fie examinate după șase zile. În cazul în care nu se constată nici o multiplicare, se lasă la incubat până la 20 de zile. Fiecare test trebuie să includă o sușă cunoscută de C. m. ssp. sepedonicus ca martor. Testele de nutriție și cele fiziologice trebuie să fie efectuate pe un inoculat provenit de la repicări pe agar nutritiv. Comparațiile morfologice
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
pozitive corespunzătoare de C. m. ssp. sepedonicus. 10.2. Se inoculează 5-10 tulpini de plante tinere de pătlăgea vânătă în stadiul celei de-a treia frunze (a se vedea secțiunea 7.3 sau 7.4). 10.3. Se pun la incubat la temperaturi cuprinse între 18 °C și 24 °C, la o umiditate relativ ridicată, asigurând o udare adecvată pentru a preveni obturarea hidrică sau stresul cauzat de secetă (a se vedea secțiunea 7.7.). În cazul culturilor pure, ar trebui
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
secțiunea 7.7.). În cazul culturilor pure, ar trebui să apară o veștejire tipică în două săptămâni; cu toate acestea, plantele care nu prezintă simptome (a se vedea secțiunea 7.8.) la sfârșitul perioadei menționate trebuie lăsate în continuare la incubat până la trei săptămâni, la temperaturi favorabile creșterii pătlăgelelor vinete, dar care să nu depășească 25 °C (a se vedea apendicele 8). În cazul în care cultura nu prezintă simptome la sfârșitul celor trei săptămâni, nu se poate confirma că este
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
linii cu o tehnică de diluare-însămânțare corespunzătoare. În cazul în care se consideră util, se prepară plăci din cutii Petri separate cu o suspensie de celule diluate din sușa virulentă biovar 2 de R. solanacearum drept control pozitiv. (d) Se incubează plăcile timp de 2-6 zile la 28 °C. - În mediul nutritiv general, izolările virulente de R. solanacearum dezvoltă colonii fluide, neregulate, plate, albicioase, deseori cu verticile caracteristice în centru. Formele avirulente de R. solanacearum formează mici colonii rotunjite, nefluide, untoase
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
două sute de tuberculi. - Extractul de cartof descris în continuare poate fi, de asemenea, utilizat pentru detectarea prezenței bacteriei responsabile de ofilirea bacteriană a cartofului, Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus. Operațiuni de pretratare care pot fi efectuate înainte de pregătirea eșantionului: (a) Se incubează eșantioanele la 25-30 °C pe parcursul unei perioade de până la două săptămâni înainte de efectuarea testelor pentru a încuraja multiplicarea eventualelor populații de R. solanacearum. (b) Se spală tuberculii, între fiecare eșantion, cu dezinfectanți (compuși clorurați în cazul în care testul PCR
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Se colorează frotiul preparat cu albastru de Nil sau negru de Sudan și se examinează la microscop după cum urmează. Testul cu albastru de Nil (a) Fiecare lamelă se scufundă într-o soluție apoasă 1 % de albastru de Nil A. Se incubează zece minute la 55 °C. (b) Se scurge soluția colorantă. Se spală rapid sub un firișor de apă curgătoare. Excesul de apă se îndepărtează cu hârtie absorbantă. (c) Frotiul se scufundă într-o soluție apoasă de acid acetic de 8
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
la 55 °C. (b) Se scurge soluția colorantă. Se spală rapid sub un firișor de apă curgătoare. Excesul de apă se îndepărtează cu hârtie absorbantă. (c) Frotiul se scufundă într-o soluție apoasă de acid acetic de 8 % și se incubează un minut la temperatura ambiantă. (d) Se spală rapid sub un firișor de apă curgătoare. Excesul de apă se îndepărtează cu hârtie absorbantă. (e) Se umezește cu o picătură de apă și se aplică o lamelă de acoperire. (f) Se
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
avea certitudinea că granulele sunt intracelulare și că morfologia celulei este tipică pentru R. solanacearum. Testul cu negru de Sudan (a) Fiecare lamelă se scufundă într-o soluție de 0,3 % negru de Sudan B în 70 % etanol și se incubează zece minute la temperatura ambiantă. (b) Se scurge soluția colorantă și se spală rapid cu apă curgătoare. Se îndepărtează excesul de apă cu hârtie absorbantă. (c) Lamelele se trec rapid prin xilen brut și se usucă cu hârtie absorbantă. Atenție
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]