1,957 matches
-
corespunzătoare de anticorpi secundari, în conformitate cu recomandările producătorului. La efectuarea testului, diluția de lucru a anticorpilor trebuie să fie aproximativ egală sau egală cu cea a titrului formulei comerciale. Se stabilește titrul anticorpilor într-o suspensie de 105-106 celule/ml din sușa omologă de R. solanacearum. Se include un extract de eșantion care a dat anterior rezultate negative pentru R. solanacearum și o suspensie a unei bacterii care nu provoacă reacții încrucișate într-un tampon fosfat (PBS) ca eșantioane de control negativ
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
tampon fosfat (PBS) ca eșantioane de control negativ. Drept eșantion de control pozitiv, se folosesc alicote de extracte de eșantion care au dat anterior rezultate negative, amestecate cu 103-104 de celule/ml de biovar 2 de R. solanacearum (de exemplu, sușa NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; a se vedea apendicele 2 A și B). Pentru a compara rezultatele din fiecare placă, se folosește o suspensie standard de 105-106 de celule/ml în PBS de R. solanacearum. Eșantioanele de control pozitiv
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
și o adâncime egală aproximativ cu două treimi din grosimea tulpinii. Se închide incizia aplicând vaselină sterilă cu ajutorul unei seringi. 9.3. Prin aceeași tehnică, se inoculează cinci plantule cu o suspensie apoasă de 105-106 celule pe ml dintr-o sușă virulentă de patruzeci și opt de ore din biovar 2 de R. solanacearum drept control pozitiv și cu tampon de concentrare (apendicele 4) drept control negativ. Se separă plantele de control pozitiv și negativ de celelalte plante pentru a evita
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Testul biologic este pozitiv atunci când plantele test sunt infectate cu R. solanacearum. B. TESTE DE IDENTIFICARE Culturile pure prezumtive de R. solanacearum se identifică prin cel puțin unul dintre următoarele teste bazate pe principii biologice diferite. Se includ, după caz, sușe de referință cunoscute pentru fiecare test efectuat (a se vedea apendicele 3). 1. Teste de identificare enzimatice și de nutriție Se stabilesc următoarele caracteristici fenotipice prezente sau absente sistematic la R. solanacearum în conformitate cu metodele Lelliott și Stead (1987), Klement et
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
al. (1999), Opina et al. (1997), Weller et al. (1999)]. 4.4. O identificare pozitivă a R. solanacearum se obține atunci când fragmentele amplificate PCR au aceeași dimensiune și aceleași polimorfisme ale dimensiunii fragmentelor de restricție ca în cazul celor ale sușei de control pozitiv. 5. Testul FISH 5.1. Se prepară o suspensie de circa 106 celule/ml în apă ultrapură. 5.2. Se aplică procedura FISH (secțiunea VI.A.7) cu cel puțin două oligosonde specifice de R. solanacearum (apendicele
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
trebuie să fie identic cu cel al controlului pozitiv. Prezența acizilor grași caracteristici 14:0 3OH, 16:0 2OH, 16:1 2OH și 18:1 2OH și absența 16:0 3OH indică prezența Ralstonia sp. 7. Metode de caracterizare a sușei Se recomandă o caracterizare a sușei prin una dintre următoarele metode pentru fiecare caz nou de izolare a R. solanacearum. Se includ, după caz, sușe de referință cunoscute pentru fiecare test efectuat (a se vedea apendicele 3). 7.1. Determinarea
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
al controlului pozitiv. Prezența acizilor grași caracteristici 14:0 3OH, 16:0 2OH, 16:1 2OH și 18:1 2OH și absența 16:0 3OH indică prezența Ralstonia sp. 7. Metode de caracterizare a sușei Se recomandă o caracterizare a sușei prin una dintre următoarele metode pentru fiecare caz nou de izolare a R. solanacearum. Se includ, după caz, sușe de referință cunoscute pentru fiecare test efectuat (a se vedea apendicele 3). 7.1. Determinarea biovarului Există diferiți biovari de R.
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
2OH și absența 16:0 3OH indică prezența Ralstonia sp. 7. Metode de caracterizare a sușei Se recomandă o caracterizare a sușei prin una dintre următoarele metode pentru fiecare caz nou de izolare a R. solanacearum. Se includ, după caz, sușe de referință cunoscute pentru fiecare test efectuat (a se vedea apendicele 3). 7.1. Determinarea biovarului Există diferiți biovari de R. solanacearum în funcție de capacitatea lor de a utiliza și/sau oxida trei zaharuri și trei hexoze alcoolice (Hayward, 1964 și
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
în lume) (găsit în Chile și în Columbia) (găsit în zona tropicală) Utilizarea trehalozei - + + Utilizarea mezo-inozitei + - + Utilizarea D-ribozei - - + Activitate pectolitică 1 scăzută scăzută ridicată 1 A se vedea Lelliott & Stead (1987) 7.2. Amprentă genomică Diferențierea moleculară a sușelor din complexul R. solanacearum se poate face prin: 7.2.1. Analiza polimorfismului dimensiunii fragmentelor de restricție RFLP (Cook et al., 1989). 7.2.2. PCR pe secvențe repetitive folosind primeri [REP, BOX și ERIC (Louws et al, 1995; Smith
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
al, 1995)]. 7.2.3. Analiza polimorfismului dimensiunii fragmentelor de restricție amplificate (Van der Wolf et al., 1998). 7.3. Metodele PCR Se pot folosi primeri specifici PCR (Pastrik et al., 2002; a se vedea apendicele 6) pentru a diferenția sușele aparținând diviziunii 1 (biovari 3, 4 și 5) și diviziunii 2 (biovari 1, 2A și 2T) ale R. solanacearum, astfel cum au fost definite inițial de analiza RFLP (Cook et al., 1989) și secvența 16S a ADNr (Taghavi et al
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
efectuat pentru confirmarea finală a diagnosticului de R. solanacearum și pentru evaluarea virulenței culturilor identificate ca fiind R. solanacearum. (1) Se prepară un inoculum de circa 106 celule/ml dintr-o cultură de 24-48 ore de izolat și dintr-o sușă corespunzătoare de control pozitiv de R. solanacearum (de exemplu, NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; a se vedea apendicele 3). (2) Se inoculează 5-10 plantule de tomată sau vânătă sensibile, la nivelul celei de a treia frunze adevărate (a se
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de control standardizat disponibil în comerț (a) Izolate de bacterii Următoarele izolate de bacterii se recomandă spre utilizare în calitate de material standard de referință sau control pozitiv (tabelul 1) sau pe parcursul optimizării testelor pentru a evita reacții încrucișate (tabelul 2). Toate sușele sunt disponibile în comerț la următoarele adrese: 1. National Collection of Plant Pathogenic Bacteria (NCPPB), Central Science Laboratory, York, UK. 2. Culture Collection of the Plant Protection Service (PD), Wageningen, Țările de Jos. 3. Collection française de bactéries phytopathogènes (CFBP
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
2, 3 AND 5]*** Cod NCPPB SMT # Alte coduri Țara de origine Biovar Egipt Turcia Anglia Cipru Suedia Belgia Țările de Jos Franța Portugalia Spania Germania Statele Unite Costa Rica Columbia Peru Brazilia Peru Australia Sri Lanka Filipine China (*)A se utiliza ca sușă de referință standard biovarul 2 soiul 3 de R. solanacearum. Notă: Autenticitatea sușelor menționate anterior poate fi garantată numai în cazul în care acestea sunt obținute dintr-o colecție de culturi autentice. Tabelul 2. Gama de referință SMT de bacterii
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Egipt Turcia Anglia Cipru Suedia Belgia Țările de Jos Franța Portugalia Spania Germania Statele Unite Costa Rica Columbia Peru Brazilia Peru Australia Sri Lanka Filipine China (*)A se utiliza ca sușă de referință standard biovarul 2 soiul 3 de R. solanacearum. Notă: Autenticitatea sușelor menționate anterior poate fi garantată numai în cazul în care acestea sunt obținute dintr-o colecție de culturi autentice. Tabelul 2. Gama de referință SMT de bacterii corelate serologic sau genetic în vederea utilizării pentru optimizarea testelor de detectare ***[PLEASE INSERT
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
colecție de culturi autentice. Tabelul 2. Gama de referință SMT de bacterii corelate serologic sau genetic în vederea utilizării pentru optimizarea testelor de detectare ***[PLEASE INSERT TEXT AND NUMBERS FROM ORIGINAL IN ALL COLUMNS]*** Cod NCPPB SMT # Alt cod Identificare (1) Sușă care poate să provoace în testele serologice (IF și/sau ELISA) o reacție încrucișată cu antiserurile policlonale. (2) Sușă din care poate fi amplificat produsul PCR în anumite laboratoare având dimensiuni asemănătoare celor preconizate la utilizarea primerilor specifici OLI-1 și
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
optimizarea testelor de detectare ***[PLEASE INSERT TEXT AND NUMBERS FROM ORIGINAL IN ALL COLUMNS]*** Cod NCPPB SMT # Alt cod Identificare (1) Sușă care poate să provoace în testele serologice (IF și/sau ELISA) o reacție încrucișată cu antiserurile policlonale. (2) Sușă din care poate fi amplificat produsul PCR în anumite laboratoare având dimensiuni asemănătoare celor preconizate la utilizarea primerilor specifici OLI-1 și Y-2 (a se vedea apendicele 6). (3) Susceptibil să provoace o reacție încrucișată în majoritatea testelor, dar cunoscut ca
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
NCPPB: Granule liofilizate de extract din 200 tuberculi de cartof sănătoși în calitate de control negativ pentru ansamblul testelor. Granule liofilizate de extract din 200 tuberculi de cartofi sănătoși conținând 103-104 și 104-106 celule de biovar 2 de R. solanacearum (de exemplu, sușa NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) în calitate de control pozitiv pentru testele serologice și PCR. Întrucât liofilizarea afectează viabilitatea celulelor, acestea nu pot fi folosite drept control standard pentru testele de izolare sau testele biologice. Suspensii fixate cu formalină de biovar
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
CFBP 3857) în calitate de control pozitiv pentru testele serologice și PCR. Întrucât liofilizarea afectează viabilitatea celulelor, acestea nu pot fi folosite drept control standard pentru testele de izolare sau testele biologice. Suspensii fixate cu formalină de biovar 2 de R. solanacearum (sușa NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) la 106 celule/ml în calitate de control pozitiv pentru testele serologice. B. Pregătirea controalelor pozitive și negative Se crește timp de 48 ore o sușă virulentă de biovar 2 rasa 3 de R. solanacearum (de
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Suspensii fixate cu formalină de biovar 2 de R. solanacearum (sușa NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) la 106 celule/ml în calitate de control pozitiv pentru testele serologice. B. Pregătirea controalelor pozitive și negative Se crește timp de 48 ore o sușă virulentă de biovar 2 rasa 3 de R. solanacearum (de exemplu, sușa NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) într-un mediu general SMSA și se face o suspensie într-un tampon fosfat 10 mM pentru a obține o densitate celulară
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
4156 = PD 2762 = CFBP 3857) la 106 celule/ml în calitate de control pozitiv pentru testele serologice. B. Pregătirea controalelor pozitive și negative Se crește timp de 48 ore o sușă virulentă de biovar 2 rasa 3 de R. solanacearum (de exemplu, sușa NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) într-un mediu general SMSA și se face o suspensie într-un tampon fosfat 10 mM pentru a obține o densitate celulară de circa 2 x 108 ufc/ml. În general, aceasta se obține
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Protocoale PCR și reactivi validați Notă: Testele preliminare trebuie să permită detectarea reproductibilă a 103-104 celule de R. solanacearum pe ml de extract de eșantion. De asemenea, testele preliminare nu trebuie să indice rezultate pozitive false cu o gamă de sușe bacteriene selecționate (a se vedea apendicele 3). 1. Protocolul PCR Seal et al. (1993) 1.1. Secvența de primer de oligonucleotide Primer sens OLI-1 5΄-GGG GGT AGC TTG CTA CCT GCC-3΄ Primer antisens Y-2 5΄-CCC ACT GCT GCC
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
pe cele două alele cu codon 136, arginina pe cele două alele cu codon 154 și arginina pe cele două alele cu codon 171) se semnalează imediat Comisiei. Dacă este posibil, aceste cazuri trebuie să facă obiectul unei identificări a sușei. Dacă această identificare nu este posibilă, turma de origine, precum și toate celelalte turme care au intrat în contact cu animalul sunt supuse unei supravegheri sporite, în scopul depistării altor cazuri de EST pentru identificarea sușei. 7.2. Pe lângă animalele supuse
jrc6113as2003 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91285_a_92072]
-
facă obiectul unei identificări a sușei. Dacă această identificare nu este posibilă, turma de origine, precum și toate celelalte turme care au intrat în contact cu animalul sunt supuse unei supravegheri sporite, în scopul depistării altor cazuri de EST pentru identificarea sușei. 7.2. Pe lângă animalele supuse unei analize genotipice, în conformitate cu dispozițiile de la punctul 7.1, trebuie de asemenea să fie stabilit genotipul proteinei prionului la un subeșantion de ovine ales la întâmplare și supuse testului de depistare în conformitate cu dispozițiile de la capitolul
jrc6113as2003 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91285_a_92072]
-
iulie 1998 privind combaterea Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al. - Decizia 98/83/ CE a Comisiei din 8 ianuarie 1998 de recunoaștere a anumitor țări terțe și a anumitor zone din țările terțe ca fiind indemne de Xanthomonas campestris (toate sușele patogene pentru Citrus), Cercospora angolensis Carv. et Mendes și Guignardia citricarpa Kiely (toate sușele patogene pentru Citrus), astfel cum a fost modificată ultima dată prin Decizia 2003/129/CE din 25 februarie 2003 - Decizia 98/109/ CE a Comisiei din
32004D0278-ro () [Corola-website/Law/292335_a_293664]
-
a Comisiei din 8 ianuarie 1998 de recunoaștere a anumitor țări terțe și a anumitor zone din țările terțe ca fiind indemne de Xanthomonas campestris (toate sușele patogene pentru Citrus), Cercospora angolensis Carv. et Mendes și Guignardia citricarpa Kiely (toate sușele patogene pentru Citrus), astfel cum a fost modificată ultima dată prin Decizia 2003/129/CE din 25 februarie 2003 - Decizia 98/109/ CE a Comisiei din 2 februarie 1998 de autorizare temporară a statelor membre de a adopta măsuri urgente
32004D0278-ro () [Corola-website/Law/292335_a_293664]