850 matches
-
0,1 cg/ml), U2 (conținut estimat: 0,05 µg/ml) și U1 (conținut estimat: 0,025 µg/ml) prin diluare succesivă (1+1) cu metanol 50 % (4.5). 8. PROCEDURA DE ANALIZĂ 8.1. Inocularea mediului de analiză Se inoculează mediul de analiză (4.2.2) cu suspensia bacteriană (3.2) la aproximativ 50°C. Prin încercări preliminare pe plăcile cu mediu de analiză (4.2.2) se determină cantitatea de suspensie bacteriană necesară pentru a forma cele mai mari
jrc464as1978 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85602_a_86389]
-
4.2) pentru a forma un strat de aproximativ 1,5 mm grosime (45 ml pentru o placă cu diametrul de 200 mm). Se lasă să se stabilizeze și se pune peste strat o cantitate de mediu (4.2.2) inoculat ca la pct. 8.1 pentru a obține un strat de 1 mm grosime (30 ml pentru a placă cu diametru de 200 mm). Se lasă să se stabilizeze din nou, se realizează orificiile și se pun în ele volume
jrc464as1978 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85602_a_86389]
-
raportare la o curbă-etalon stabilită în prealabil prin numărare pe mediu solid, folosindu-se specia Pseudomonas fluorescens ATCC 15453. Se adaugă volumul de soluție necesar pentru a aduce concentrația de bacterii la (5 ± 3) × 107 pe milimetru. Se folosește substanța inoculată în ora care urmează. 1.6.4. Test Incubarea se efectuează în absența oricărui tip de lumină intensă, într-un incubator menținut la o temperatură de 20 până la 25 șC și fără vapori toxici. Se pregătesc soluțiile următoare: 1. Soluție
jrc904as1984 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86043_a_86830]
-
determinare este de 2mg/kg (2ppm). Prezența antibioticelor polieterice poate interfera în determinare. 2. PRINCIPIU Eșantionul este extras cu un amestec de acetonă/apă/acid clorhidric. Activitatea antibiotică a extractului se determină prin măsurarea difuziunii avoparcinei într-un mediu agar inoculat cu Bacillus subtilis. Difuziunea este arătată prin formarea unor zone de inhibare a microorganismelor. Diametrul acestor zone este considerat a fi direct proporțional cu logaritmul concentrației de antibiotic raportat la intervalul concentrațiilor de antibiotice folosite. 3. MICROORGANISM: BACILLUS SUBTILIS ATCC
jrc686as1981 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85824_a_86611]
-
unor zone de inhibare a microorganismelor. Diametrul acestor zone este considerat a fi direct proporțional cu logaritmul concentrației de antibiotic raportat la intervalul concentrațiilor de antibiotice folosite. 3. MICROORGANISM: BACILLUS SUBTILIS ATCC 6633 (NCIB 8054) 3.1 Menținerea culturii-mamă Se inoculează eprubete ce conțin lichid de mediu de cultură (4.1) cu Bacillus subtilis și se incubează peste noapte la 30°C. Se păstrează cultura într-un frigider la aproximativ 4°C. Se reinoculează lunar. 3.2 Prepararea suspensiei de spori
jrc686as1981 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85824_a_86611]
-
frigider la aproximativ 4°C. Se reinoculează lunar. 3.2 Prepararea suspensiei de spori 1 Se recoltează cultura crescută dintr-un lichid agar proaspăt preparat (3.1) cu ajutorul a 2-3 ml de apă sterilă. Această suspensie se folosește pentru a inocula 300 ml de mediu de cultură (4.1) dintr-un balon Roux care se incubează timp de trei până la cinci zile la 30°C. Se recoltează cultura crescută în 15 ml etanol (4.2) după ce s-a verificat germinarea la
jrc686as1981 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85824_a_86611]
-
20 15 20 15 20 10 Volumul final (ml): U8 25 25 50 50 100 100 Concentrația U8 estimată (μg/ml) 2 aprox. 2 2 aprox. 2 2 2 7. PROCEDURA DE ANALIZĂ 7.1 Inocularea mediului de analiză Se inoculează mediul de testare (4.1) cu suspensie de spori (3.2) la 50-60°C. Prin încercări preliminare pe plăcile cu mediu de testare (4.1) se determină cantitatea de suspensie de spori necesară pentru obținerea celor mai mari și mai
jrc686as1981 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85824_a_86611]
-
centre. Testele pot fi efectuate pe plăcile de sticlă cu un inel de aluminiu sau plastic pe ele, cu un diametru de 200 mm și o înălțime de 20 mm. Se toarnă pe plăci o cantitate de mediu (4.1) inoculat ca la pct. 7.1 pentru a obține un strat de 2 mm grosime (60 ml pentru o lamelă cu diametru de 200 mm). Se lasă să se uniformizeze, se fac orificii și în ele se pun volumele de soluție
jrc686as1981 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85824_a_86611]
-
mg/kg (10 ppm)1. 2. PRINCIPIUL Eșantionul se extrage cu 90% de metanol. Extractul este supus unor proceduri corespunzătoare în conformitate cu conținutul de monensin de sodiu din eșantion. Activitatea antibiotică este determinată prin măsurarea difuziunii sodiului monensin în mediul agar inoculat cu Bacillus subtilis. Difuziunea este indicată de formarea de zone de inhibare ale microorganismului. Diametrul acestor zone este considerat a fi direct proporțional cu logaritmul concentrației antibiotice raportat la intervalul de concentrații antibiotice folosite. Sensibilitatea sistemului de testare este redusă
jrc686as1981 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85824_a_86611]
-
considerat a fi direct proporțional cu logaritmul concentrației antibiotice raportat la intervalul de concentrații antibiotice folosite. Sensibilitatea sistemului de testare este redusă în prezența ionilor de sodiu. 3. MICROORGANISM: BACILLUS SUBTILIS ATCC 6633 (NCIB 8054) 3.1 Menținerea culturii-mamă Se inoculează eprubete ce conțin lichid de mediu de cultură (4.1) cu Bacillus subtilis și se incubează peste noapte la 30°C. Se păstrează cultura într-un frigider la temperatură de aproximativ 4°C. Se reinoculează lunar. 3.2 Prepararea suspensiei
jrc686as1981 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85824_a_86611]
-
temperatură de aproximativ 4°C. Se reinoculează lunar. 3.2 Prepararea suspensiei de spori 2 Se recoltează cultura crescută dintr-un lichid agar proaspăt preparat (3.1) cu ajutorul a 2-3 ml de apă sterilă. Această suspensie se folosește pentru a inocula 300 ml de mediu de cultură (4.1) dintr-un balon Roux care se incubează timp de trei până la cinci zile la 30°C. Se recoltează cultura crescută în 15 ml etanol 20 % (4.2) după ce s-a verificat germinarea
jrc686as1981 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85824_a_86611]
-
prepară soluțiile U4 (conținut estimat 4 μg/ml), U2 (conținut estimat 2 μg/ml) și U1 (conținut estimat 1 μg/ml) prin diluări succesive (1+1) cu metanol 50 %. 8. PROCEDURA DE ANALIZĂ 8.1 Inocularea mediului de analiză Se inoculează mediul de analiză (4.2) cu suspensie de spori (3.2) la 50-60°C. Prin teste preliminare pe plăcile cu mediu de testare (4.2) se determină cantitatea de suspensie de spori necesară pentru obținerea celor mai mari și mai
jrc686as1981 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85824_a_86611]
-
centre. Testele pot fi efectuate pe plăcile de sticlă cu un inel de aluminiu sau plastic pe ele, cu un diametru de 200 mm și o înălțime de 20 mm. Se toarnă pe plăci o cantitate de mediu (4.2) inoculat ca la pct. 8.1 pentru a obține un strat de 2 mm grosime (60 ml pentru o lamelă cu diametru de 200 mm). Se lasă să se uniformizeze, se fac orificii și în ele se pun volumele de soluție
jrc686as1981 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85824_a_86611]
-
baza studiilor menționate anterior, realizează studii suplimentare care pot include: - elaborarea de modele matematice predictive pentru produsele alimentare în cauză, utilizând factori critici de dezvoltare sau supraviețuire pentru microorganismele în cauză din produs; - teste care analizează capacitatea microorganismului în cauză, inoculat în mod adecvat, de a se dezvolta sau supraviețui în produs în diferite condiții de depozitare care pot fi prevăzute în mod rezonabil; - studii de evaluare a dezvoltării și supraviețuirii microorganismelor în cauză care pot fi prezente în produs în
32005R2073-ro () [Corola-website/Law/294453_a_295782]
-
Inoculare prin injecție Inocularea se practică în tulpini de pătlăgele vinete, chiar deasupra cotiledoanelor, cu ajutorul unei seringi dotate cu un ac hipodermic (nu mai puțin de 23 G). Eșantionul se repartizează între pătlăgelele vinete. 7.5. Ca martori pozitivi, se inoculează cinci plante prin aceeași metodă (a se vedea punctul 7.3 sau 7.4) cu o suspensie apoasă care conține între 105 și 106 celule/ml dintr-o cultură cunoscută de C. m. ssp. sepedonicus și, în cazul în care
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
105 și 106 celule/ml dintr-o cultură cunoscută de C. m. ssp. sepedonicus și, în cazul în care este posibil, cu extract din tubercul infectat în mod natural (a se vedea secțiunea 4). 7.6. Ca martori negativi, se inoculează cinci plante prin aceeași metodă (a se vedea punctul 7.3 sau 7.4) cu o soluție tampon sterilă de extract concentrat. 7.7. Se lasă plantele la incubat până la patru săptămâni la temperaturi între 18 °C și 24 °C
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
ssp. sepedonicus. 10.1. Se prepară un inoculum de aproximativ 106 celule/ml pe baza unei culturi de trei zile a izolatului care trebuie testat și a unei sușe martor pozitive corespunzătoare de C. m. ssp. sepedonicus. 10.2. Se inoculează 5-10 tulpini de plante tinere de pătlăgea vânătă în stadiul celei de-a treia frunze (a se vedea secțiunea 7.3 sau 7.4). 10.3. Se pun la incubat la temperaturi cuprinse între 18 °C și 24 °C, la
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de vânătă. Prin urmare, atunci când este posibil, se recomandă utilizarea plantulelor de tomată. 9.2. Se distribuie 100 μl de extract între plantele de test. 9.2.1. Inoculare prin injectare Cu ajutorul unei seringi cu ac hipodermic (minimum 23G) se inoculează în tulpina plantei chiar deasupra cotiledoanelor. Se repartizează eșantionul între plantele test. 9.2.2. Inoculare prin incizie Se ține planta între două degete și se pipetează pe tulpină, între cotiledoane și prima frunză, o picătură (circa 5-10 μl) de
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
extract concentrat, se face o incizie diagonală cu o lungime de 1,0 cm și o adâncime egală aproximativ cu două treimi din grosimea tulpinii. Se închide incizia aplicând vaselină sterilă cu ajutorul unei seringi. 9.3. Prin aceeași tehnică, se inoculează cinci plantule cu o suspensie apoasă de 105-106 celule pe ml dintr-o sușă virulentă de patruzeci și opt de ore din biovar 2 de R. solanacearum drept control pozitiv și cu tampon de concentrare (apendicele 4) drept control negativ
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de R. solanacearum în funcție de capacitatea lor de a utiliza și/sau oxida trei zaharuri și trei hexoze alcoolice (Hayward, 1964 și Hayward et al., 1990). Mediile de creștere pentru testul biovarului sunt descrise în apendicele 2. Testul poate fi realizat inoculând prin injectarea profundă a mediilor cu culturi pure de izolat de R. solanacearum și prin incubare la 28 °C. În cazul în care mediile sunt repartizate pe plăci de cultură cu 96 de godeuri sterile (200 μl/godeu), se poate
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
inoculum de circa 106 celule/ml dintr-o cultură de 24-48 ore de izolat și dintr-o sușă corespunzătoare de control pozitiv de R. solanacearum (de exemplu, NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; a se vedea apendicele 3). (2) Se inoculează 5-10 plantule de tomată sau vânătă sensibile, la nivelul celei de a treia frunze adevărate (a se vedea secțiunea VI.A.9). (3) Se incubează până la două săptămâni la 25-28 °C și într-o umiditate relativă crescută, asigurând o stropire
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
trebui să se păstreze și să se conserve în condiții corespunzătoare, timp de cel puțin o lună după procedura de notificare prevăzută la articolul 5 alineatul (2): - materialul prevăzut la punctul 1 și - un eșantion din tomata sau vânăta contaminată inoculată cu extractul de tubercul sau plantă, după caz, și - cultura izolată a organismului. Anexa IV Elementele din ancheta prevăzută la articolul 5 alineatul (1) litera (a) punctul (i) includ, atunci când sunt relevante: (i) locurile de producție: - care cultivă sau au
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de circa două ore la temperatura mediului înconjurător (sau un timp mai îndelungat la 4 °C), apoi se limpezesc prin centrifugare (de exemplu, 800-1 000 x g timp de zece minute). 3. Izolarea virusului în ouă de găină embrionate Se inoculează 0,1-0,2 ml de lichid limpezit de la suprafață în cavitatea alantoidiană a cel puțin patru ouă de găină embrionate, puse la incubat timp de nouă - unsprezece zile. În principiu, ouăle respective trebuie să provină de la un efectiv lipsit de
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
facă obiectul unui test care să excludă prezența bacteriilor. În cazul în care se detectează bacterii, lichidele pot fi trecute printr-un filtru cu membrană (450 nm) sau pot fi centrifugate pentru a le debarasa de bacterii și a le inocula din nou în ouă după ce s-au adăugat antibiotice. 4. Diagnostic diferențial (a) Diferențiere preliminară Deoarece este important ca măsurile de combatere care vizează limitarea răspândirii virusului IA să fie aplicate cât mai repede posibil, fiecare laborator național de referință
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
garanta că amplificarea nu este inhibată de substanțe prezente în eșantioanele prelevate de la porci. 3. Inocularea și incubarea ouălor Pentru a izola virusul influenței al mamiferelor în ouă de găină embrionate în vârstă de 9-11 zile, se obișnuiește să se inoculeze fiecare ou prin cavitatea alantoidiană și în cavitatea amniotică. Cu toate acestea, cu ocazia testelor de detectare efectuate pe porci care au fost în contact cu virusul IA, inocularea prin cavitatea alantoidiană este probabil suficientă atunci când virusul a avut puțin
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]