1,172 matches
-
de safranin și se lasă 10 secunde la temperatura camerei. Atenție! Safraninul este un produs dăunător. Lucrați într-o cameră cu abur. 5. Se spală ușor cu apă de la robinet. Se uscă cu un șervețel de hârtie. Se aplică o lamelă de acoperire. 6. Se examinează frotiul colorat la un microscop optic utilizând lumina transmisă sub imersie în ulei la o mărire de 1 000. Granulele de PHB din celulele de Ralstonia solanacearum se colorează în albastru- negru. Membrana celulară se
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
pozitivă la controlul FITC. Se prepară lame de control pozitiv separate cu o suspensie de 106 celule pe ml dintr-o sușă corespunzătoare de rasă / biovar de Ralstonia solanacearum. Se utilizează o lamă la fiecare set de teste. 2.1. Lamele de test se prepară printr-una dintre următoarele proceduri: (i) pentru extracte concentrate cu relativ puțin amidon: Se pipetează un volum standard (15 μl este adecvat unei ferestre de 6 mm diametru - volumul se mărește pentru ferestre mai mari) din
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
utilizat pentru determinarea titrului. Volumul conjugatului aplicat în ferestre trebuie să fie echivalent cu volumul antiserului aplicat. 2.3.5. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.6. Se scutură picăturile de conjugat de pe lamelă. Se clătesc și se spală ca mai sus (2.3.3). Se îndepărtează cu grijă excesul de umezeală. 2.3.7. Se pipetează 5 - 10 μl glicerol tamponat fosfatic 0,1 M (apendicele 3) sau un suport similar în fiecare
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
modificate prin tratare chimică în vederea îmbunătățirii sau stabilizării proprietăților mucilaginoase (vâscozitate, solubilitate etc.). 3) Carragheenina care este extrasa din algele carragheen (cunoscute și sub denumirea de mușchi perlat sau mușchi de Irlanda) este în general prezentată sub formă de filamente, lamele sau praf. La această poziție se clasifică și substanțele mucilaginoase obținute prin transformarea chimică a carragheeninei (de exemplu carragheenat de sodiu). 4) Agenții de îngroșare obținuți din gume sau gume-rasini devenite hidrosolubile prin tratarea cu apă sub presiune sau prin
EUR-Lex () [Corola-website/Law/166483_a_167812]
-
cantitatea de precipitat. Se încălzește până la fierbere și se agită. 5.4. Se centrifughează fierbinte; se elimină lichidul supernatant. 5.5. Precipitatului i se adaugă câteva picături de soluție amoniacala (3.2); se amestecă și centrifughează. 5.6. Pe o lamela de sticlă la o picătură de lichid supernatant se adaugă câteva picături de soluție acid azotic 2M (3.3). 5.7. Un precipitat alb indică prezenta argintului. B. DETERMINARE 1. SCOP ȘI DOMENIU DE APLICARE Aceasta este metodă reglementată pentru
EUR-Lex () [Corola-website/Law/145750_a_147079]
-
4.3.7. în fiecare fereastră se depun cu pipeta 5-10 μl dintr-o soluție de glicerol tamponată cu fosfat la 0,1 M (a se vedea apendicele 3) sau un suport antidecolorare din comerț, apoi se acoperă cu o lamelă. 4.4. Citirea testului de imunofluorescență: 4.4.1. Se examinează lamele de test cu ajutorul unui microscop cu epifluorescență și cu ajutorul filtrelor adaptate la excitația izotiocianatului de fluorescență, în imersie în ulei sau în apă și cu o creștere de la
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
identică de anticorpi. Celulele a căror colorare este incompletă sau care prezintă o fluorescență slabă nu trebuie luate în considerare. La cea mai mică suspiciune de contaminare, testul trebuie repetat. Acest lucru se poate întâmpla în cazul în care toate lamele dintr-un lot prezintă celule pozitive din cauza contaminării tamponului sau în cazul în care celulele pozitive sunt izolate (în exteriorul ferestrelor) pe mediul de montare al lamei. 4.4.3. Există un anumit număr de probleme inerente specificității testului de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
5.2.5. Se așază lamele pe o placă încălzită la 45 °C și se varsă 10 μl de soluție de hibridizare în fiecare dintre cele patru godeuri ale fiecărei lame. 5.2.6. Se acoperă fiecare lamă cu două lamele (24 x 24 mm), avându-se grijă să nu se prindă aer, apoi se așază lamele în camera de hibridizare umedă preîncălzită și se lasă acolo o noapte, în obscuritate și la o temperatură de 55 °C, pentru a permite
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
și 1 l de hibmix 1/2x (167 ml de hibmix 3x și 833 ml de apă ultrapură). Fiecare dintre pahare se pune la preincubat în baie de aburi, la o temperatură de 55 °C. 5.2.8. Lamele și lamelele se îndepărtează și se așază pe un suport. 5.2.9. Se elimină excesul de sondă, punându-l la incubat timp de 15 minute la 55 °C în paharul de laborator care conține hibmixul 1x. 5.2.10. Se transferă
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
paharul de laborator care conține hibmixul 1x. 5.2.10. Se transferă suportul de lame într-o soluție de spălat cu hibmix 1/2 și se lasă la incubat timp de încă 15 minute. 5.2.11. Se scufundă rapid lamele într-o baie de apă ultrapură și se usucă cu hârtie de filtru. Se elimină excesul de umiditate așezând ușor hârtia de filtru peste suprafața care trebuie uscată. Se pun cu pipeta în fiecare fereastră între 5 și 10 μl
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
care trebuie uscată. Se pun cu pipeta în fiecare fereastră între 5 și 10 μl de soluție suport antidecolorare (de exemplu, Vectashield de la Vecta Laboratories, CA, USA sau o soluție echivalentă) și se acoperă întreaga suprafață a lamei cu o lamelă mare (24 x 60 mm). 5.3. Citirea testului FISH 5.3.1. Se trece de îndată la observarea lamelor cu ajutorul unui microscop cu epifluorescență care mărește între 630 și 1 000 x, sub o peliculă de ulei. Cu un
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Celulele a căror colorare este incompletă sau care prezintă o fluorescență slabă nu trebuie luate în considerare. 5.3.3. La cea mai mică suspiciune de contaminare, testul trebuie repetat. Acest lucru se poate întâmpla în cazul în care toate lamele dintr-un lot prezintă celule pozitive din cauza contaminării tamponului sau în cazul în care celulele pozitive sunt izolate (în exteriorul ferestrelor) pe mediul de montare al lamei. 5.3.4. Există un anumit număr de probleme inerente specificității testului FISH
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
ca pe lame să se obțină un efect de diluție. 8.1.3. Se incubează lamele la adăpost de lumină și la temperaturi cuprinse între 21 °C și 23 °C. 8.1.4. Prima examinare a lamelor, cu numărarea, în raport cu lamele martori, a eventualelor colonii cu aspect asemănător cu C. m. ssp. sepedonicus trebuie să se efectueze după trei zile. Numărările ulterioare se vor efectua după cinci, șapte și, în final, zece zile. 8.2. Purificarea coloniilor suspecte Nota bene: Trebuie
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
prin sudare 721407 lăcătuș construcții metalice și navale 721408 lăcătuș de mină 721409 lăcătuș revizie vagoane 721410 lăcătuș mecanic 721411 lăcătuș-montator 721412 presator metale la rece 721413 recondiționer scule și utilaje petroliere 721414 șanfrenator 721415 pregătitor, montator, reparator ițe, cocleți, lamele, spete 721416 repasator garnituri carde 721417 tubulator naval 721418 mașinist la litografiat și vernisat tablă 721419 mașinist la confecționarea ambalajelor metalice 721420 mașinist la confecționarea tuburilor de aluminiu 721421 constructor-montator de structuri metalice 721422 mașinist la fabricarea acelor și accesoriilor
EUR-Lex () [Corola-website/Law/272373_a_273702]
-
estimează că determină o creștere reproductibilă și detectabilă în raport cu zgomotul de fond, ceea ce demonstrează sensibilitatea sistemului de testare. Concentrațiile martorilor pozitivi ar trebui să fie selectate astfel încât să se obțină efecte clare, dar care să nu permită identificare imediată a lamelelor codificate. În tabelul următor se prezintă exemple de substanțe care se pot utiliza ca martori pozitivi: Starea activării metabolice Substanța Nr. CAS Nr. IESCE Absența activării metabolice exogene metansulfonat de metil 66-27-3 200-625-0 metansulfonat de etil 62-50-0 200-536-7 etil nitrozouree
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
sau colchicină, de obicei timp de 1-3 ore înainte de recoltare. Fiecare cultură celulară se recoltează și se prelucrează separat pentru prepararea cromozomilor. Prepararea cromozomilor include tratamentul hipotonic al celulelor, precum și fixarea și colorarea acestora. 1.4.3.5. Analiza Toate lamelele, inclusiv cele cu martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent înaintea analizei microscopice. Deoarece procedurile de fixare generează adesea scindarea unei proporții de celulele în metafază cu pierdere de cromozomi, toate celulele înregistrate ar trebui, prin urmare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și al substanței de testat adăugate, - temperatura de incubare, - timpul de incubare, - durata tratamentului, - densitatea celulară la însămânțare, dacă este cazul, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - martorii pozitivi și negativi, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de metafaze analizate, - metodele de măsurare a toxicității, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, de exemplu gradul de confluență, datele privind ciclul celular, numărătoarea celulelor, indexul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
aberații cromozomiale de structură in vivo la nivelurile de expunere preconizate a genera o creștere detectabilă în raport cu fondul. Dozele de martor pozitiv ar trebui să fie alese astfel încât să se obțină efecte clare, dar fără a revela imediat examinatorului identitatea lamelelor codificate. Pentru martorul pozitiv, se poate accepta administrarea pe o cale diferită față de cea utilizată în cazul substanței de testat și doar o singură prelevare a probelor. Se poate avea în vedere utilizarea unor martori pozitivi din aceeași clasă de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
minim prin ajustarea concentrației, astfel încât să se asigure un volum constant pentru toate dozele. 1.5.6. Prepararea cromozomilor Măduva osoasă se extrage imediat după sacrificare, se expune la o soluție hipotonică și se fixează. Apoi, celulele se întind pe lamele și se colorează. 1.5.7. Analiza Se procedează la determinarea indexului mitotic, care este o măsură a citotoxicității, pe cel puțin 1 000 de celule pentru fiecare animal tratat (inclusiv martorii pozitivi) și pentru fiecare animal martor negativ netratat
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de celule pentru fiecare animal tratat (inclusiv martorii pozitivi) și pentru fiecare animal martor negativ netratat. Pentru fiecare animal se analizează minimum 100 de celule. Dacă se observă un număr mai mare de aberații, numărul specificat se poate reduce. Toate lamelele, inclusiv cele cu celule de la martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent, înainte de examinarea la microscop. Deoarece metodele de preparare a lamelelor conduc adesea la scindarea unei fracții de celule în metafază cu pierdere de cromozomi, toate
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
Dacă se observă un număr mai mare de aberații, numărul specificat se poate reduce. Toate lamelele, inclusiv cele cu celule de la martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent, înainte de examinarea la microscop. Deoarece metodele de preparare a lamelelor conduc adesea la scindarea unei fracții de celule în metafază cu pierdere de cromozomi, toate celulele examinate ar trebui, prin urmare, să conțină un număr de centromeri egal cu 2n ± 2. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Se recomandă prezentarea
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
este cazul, - detalii privind calitatea hranei și a apei, - descrierea amănunțită a modalităților de tratare și de prelevare a probelor, - metodele de măsurare a toxicității, - identitatea substanței de inhibare a metafazei, concentrația acesteia și durata tratamentului, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de celule analizate per animal, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - indexul mitotic, - tipul și numărul aberațiilor, consemnate separat pentru fiecare animal, - numărul total de aberații
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
3. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Animalele sunt expuse la substanța de testat printr-o cale de expunere corespunzătoare. Dacă se utilizează măduva osoasă, animalele se sacrifică la momente potrivite după tratament, se extrage măduva osoasă, se prepară și se colorează lamelele (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7). Dacă se utilizează sângele periferic, acesta se colectează la momente potrivite după tratament, se depune pe lamele și se colorează (4) (8) (9) (10). Pentru studiile cu sânge periferic, celulele ar trebui să
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
se sacrifică la momente potrivite după tratament, se extrage măduva osoasă, se prepară și se colorează lamelele (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7). Dacă se utilizează sângele periferic, acesta se colectează la momente potrivite după tratament, se depune pe lamele și se colorează (4) (8) (9) (10). Pentru studiile cu sânge periferic, celulele ar trebui să se recolteze cât se poate de repede după ultima expunere. Lamelele preparate se examinează pentru a depista prezența micronucleelor. 1.4. DESCRIEREA METODEI DE
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
sângele periferic, acesta se colectează la momente potrivite după tratament, se depune pe lamele și se colorează (4) (8) (9) (10). Pentru studiile cu sânge periferic, celulele ar trebui să se recolteze cât se poate de repede după ultima expunere. Lamelele preparate se examinează pentru a depista prezența micronucleelor. 1.4. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.4.1. Preparatele 1.4.1.1. Selectarea speciilor de animale Dacă se utilizează măduvă osoasă, se recomandă șoareci și șobolani, deși se poate utiliza
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]