3,282 matches
-
Se lasă 5-10 minute. 3.2. Se prepară o serie de diluții zecimale ale suspensiei, de exemplu, 1/10 și 1/100 sau mai multe dacă se consideră necesar. 3.3. Se transferă un volum standard de suspensie și de diluții pe un mediu nutritiv comun (NA, YPGA și SPA, apendicele 1) și/sau pe mediu cu tetrazoliu Kelman (apendicele 1) și/sau în mediul selectiv SMSA. (apendicele 7). Se însămânțează printr-o tehnică corespunzătoare de însămânțare a diluțiilor. Dacă se
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
și de diluții pe un mediu nutritiv comun (NA, YPGA și SPA, apendicele 1) și/sau pe mediu cu tetrazoliu Kelman (apendicele 1) și/sau în mediul selectiv SMSA. (apendicele 7). Se însămânțează printr-o tehnică corespunzătoare de însămânțare a diluțiilor. Dacă se consideră necesar, se însămânțează pe fiecare mediu o suspensie de celule diluata din tulpina virulenta biovar 2/rasă 3 de Ralstonia solanacearum, drept control pozitiv. 3.4. Se incubează plăcile timp de trei zile la 28°C. Incubarea
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
gelatinei - Hidroliza amidonului - Hidroliza esculinei - Producție de levan - Mediile și metodele se găsesc în Lelliott Stead (1987) Testul IF Se prepară o suspensie de 10^6 celule/ml din cultura și din tulpina sau tulpinile-martor. Se prepară o serie de diluții duble de antiser. Se aplică procedura IF (secțiunea III pct. 2). Titrul IF al culturii trebuie să fie echivalent cu cel al controlului pozitiv. Testul ELISA Se prepară o suspensie de 10^6 celule/ml din cultura și din tulpina
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
-18°C (săptămâni) sau la -70°C (luni). 2. Testul IF Se folosește antiserul pentru Ralstonia solanacearum, preferabil rasă 3/biovar 2. Se determina titrul unei suspensii de 10^6 celule/ml din tulpina omoloaga de Ralstonia solanacearum cu o diluție corespunzătoare de antiser conjugat cu izotiocianat de fluoresceina (FITC), în conformitate cu recomandările producătorului. Antiserul brut ar trebui să aibă o valoare IF de minimum 1:2000. Se utilizează lame microscopice cu mai multe godeuri, de preferință cu 10 godeuri de minim
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
se mărește pentru godeuri mai mari) din depozitul resuspendat într-un șir de godeuri. Șirul rămas poate fi folosit ca duplicat sau pentru o a doua proba, după cum se prezintă în figură 1. (îi) pentru alte depozite concentrate: Se pregătesc diluții zecimale de 1/10, 1/100 și 1/1000 din depozitul resuspendat în tamponul de macerare. Se pipeteaza un volum standard (15 мl corespund unui godeu de 6 mm diametru - volumul se mărește pentru godeurile mai mari) din depozitul resuspendat
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
1/10, 1/100 și 1/1000 din depozitul resuspendat în tamponul de macerare. Se pipeteaza un volum standard (15 мl corespund unui godeu de 6 mm diametru - volumul se mărește pentru godeurile mai mari) din depozitul resuspendat și fiecare diluție într-un șir de godeuri. Șirul rămas poate fi folosit ca duplicat sau pentru o a doua proba, după cum se prezintă în figură 2. 2.2. Se lasă picăturile să se usuce. Celulele bacteriene se fixează pe lama prin încălzire
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
lasă picăturile să se usuce. Celulele bacteriene se fixează pe lama prin încălzire, flambare prin flacăra sau cu 95% etanol. 2.3. Procedura IF (i) În conformitate cu pregătirea lamei de testare de la pct. 2.1 (i): se prepară un set de diluții duble ale antiserului în tampon IF (apendicele 3): 1/4 din titru (Ț/4), 1/2 din titru (Ț/2), titru (Ț) și de două ori titrul (2T). (îi) În conformitate cu pregătirea lamei de testare de la pct. 2.1 (îi): se
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
ale antiserului în tampon IF (apendicele 3): 1/4 din titru (Ț/4), 1/2 din titru (Ț/2), titru (Ț) și de două ori titrul (2T). (îi) În conformitate cu pregătirea lamei de testare de la pct. 2.1 (îi): se prepară diluția de lucru (working dilution) a antiserului în tampon IF. Diluția de lucru este diluția cu antiser cu specificitate optimă și are de obicei jumătate din titru. Figură 1 Notă C.T.C.E. PIATRA-NEAMȚ -------------------------- Figură se găsește în Monitorul Oficial al României, Partea
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
titru (Ț/4), 1/2 din titru (Ț/2), titru (Ț) și de două ori titrul (2T). (îi) În conformitate cu pregătirea lamei de testare de la pct. 2.1 (îi): se prepară diluția de lucru (working dilution) a antiserului în tampon IF. Diluția de lucru este diluția cu antiser cu specificitate optimă și are de obicei jumătate din titru. Figură 1 Notă C.T.C.E. PIATRA-NEAMȚ -------------------------- Figură se găsește în Monitorul Oficial al României, Partea I, Nr. 327 bis din data de 14.05.2003
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
2 din titru (Ț/2), titru (Ț) și de două ori titrul (2T). (îi) În conformitate cu pregătirea lamei de testare de la pct. 2.1 (îi): se prepară diluția de lucru (working dilution) a antiserului în tampon IF. Diluția de lucru este diluția cu antiser cu specificitate optimă și are de obicei jumătate din titru. Figură 1 Notă C.T.C.E. PIATRA-NEAMȚ -------------------------- Figură se găsește în Monitorul Oficial al României, Partea I, Nr. 327 bis din data de 14.05.2003. Pregătirea lamei de testare
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
din titru. Figură 1 Notă C.T.C.E. PIATRA-NEAMȚ -------------------------- Figură se găsește în Monitorul Oficial al României, Partea I, Nr. 327 bis din data de 14.05.2003. Pregătirea lamei de testare în conformitate cu pct. 2.1 (i) și pct. 2.3. (i) Diluție standard a depozitului resuspendat Ț = titru FITC Ț/4 Ț/2 Ț 2T = diluțiile duble ale antiserului Figură se găsește în Monitorul Oficial al României, Partea I, Nr. 327 bis din data de 14.05.2003. Pregătirea lamei de testare
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
României, Partea I, Nr. 327 bis din data de 14.05.2003. Pregătirea lamei de testare în conformitate cu pct. 2.1 (i) și pct. 2.3. (i) Diluție standard a depozitului resuspendat Ț = titru FITC Ț/4 Ț/2 Ț 2T = diluțiile duble ale antiserului Figură se găsește în Monitorul Oficial al României, Partea I, Nr. 327 bis din data de 14.05.2003. Pregătirea lamei de testare în conformitate cu pct. 2.1 (îi) și pct. 2.3 (îi) FITC Diluție standard a
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
Ț 2T = diluțiile duble ale antiserului Figură se găsește în Monitorul Oficial al României, Partea I, Nr. 327 bis din data de 14.05.2003. Pregătirea lamei de testare în conformitate cu pct. 2.1 (îi) și pct. 2.3 (îi) FITC Diluție standard a antiserului pur pur 1/10 1/100 1/1000 = Diluțiile decimale ale depozitului resuspendat 2.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie de filtru umedă Se acoperă godeurile de testare cu diluție sau diluțiile antiserului. În godeurile cu
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
al României, Partea I, Nr. 327 bis din data de 14.05.2003. Pregătirea lamei de testare în conformitate cu pct. 2.1 (îi) și pct. 2.3 (îi) FITC Diluție standard a antiserului pur pur 1/10 1/100 1/1000 = Diluțiile decimale ale depozitului resuspendat 2.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie de filtru umedă Se acoperă godeurile de testare cu diluție sau diluțiile antiserului. În godeurile cu FITC se aplică PBS. Volumul antiserului aplicat în godeuri trebuie să fie
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
și pct. 2.3 (îi) FITC Diluție standard a antiserului pur pur 1/10 1/100 1/1000 = Diluțiile decimale ale depozitului resuspendat 2.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie de filtru umedă Se acoperă godeurile de testare cu diluție sau diluțiile antiserului. În godeurile cu FITC se aplică PBS. Volumul antiserului aplicat în godeuri trebuie să fie echivalent cu volumul extractului aplicat. 2.3.2. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.3
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
2.3 (îi) FITC Diluție standard a antiserului pur pur 1/10 1/100 1/1000 = Diluțiile decimale ale depozitului resuspendat 2.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie de filtru umedă Se acoperă godeurile de testare cu diluție sau diluțiile antiserului. În godeurile cu FITC se aplică PBS. Volumul antiserului aplicat în godeuri trebuie să fie echivalent cu volumul extractului aplicat. 2.3.2. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.3. Se agită
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
soluție tampon IF - Tween și apoi 5 minute în tampon IF (apendicele 3). Excesul de umiditate se îndepărtează cu grijă. 2.3.4. Se aranjează lamele pe hârtie de filtru umedă. Se acoperă godeurile de testare și godeurile FITC cu diluția conjugatului FITC utilizat pentru determinarea titrului. Volumul conjugatului aplicat în godeuri trebuie să fie echivalent cu volumul antiserului aplicat. 2.3.5. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.6. Se agită picăturile de
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
contaminare. NOTĂ: Dacă se observă acestea, testul trebuie repetat. Se observă celule intens fluorescente cu o morfologie caracteristică bacteriei Ralstonia solanacearum în godeurile de testare. Intensitatea fluorescentei trebuie să fie echivalentă cu cea a tulpinii de control pozitiv, la aceeași diluție a antiserului. Celulele cu o colorație incompletă sau cu o fluorescenta slabă nu trebuie luate în considerare dacă nu sunt în număr mare (vezi interpretarea rezultatului testului IF). Interpretarea rezultatului testului IF: (i) Dacă nu sunt descoperite celule intens fluorescente
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
5 celule/ml) de celule incomplet sau slab fluorescente în titrul antiserului, trebuie efectuat un al doilea test: - un test bazat pe un principiu biologic diferit; sau - o repetare a testului IF, cu un al doilea antiser sau cu o diluție de zece ori a depozitului. 3. Testul ELISA În baza Robinson - Smith et al., 1995 Se folosește antiser pentru Ralstonia solanacearum, preferabil rasă 3/biovar 2. Se determina titrul suspensiei de 10^6 celule/ml din tulpina omoloaga de Ralstonia
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
sau peste noapte la 4°C. 3.4. Se îndepărtează extractele din godeuri. Se spală godeurile de trei ori cu PBS - Tween (apendicele 5), lăsându-se ultima soluție de spălare cel putin 5 minute în godeuri 3.5. Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului de Ralstonia solanacearum în tampon de blocare (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl diluție de antiser în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.6. Se îndepărtează antiserul din godeuri. Se spală conform
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
trei ori cu PBS - Tween (apendicele 5), lăsându-se ultima soluție de spălare cel putin 5 minute în godeuri 3.5. Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului de Ralstonia solanacearum în tampon de blocare (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl diluție de antiser în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.6. Se îndepărtează antiserul din godeuri. Se spală conform pct. 3.4. 3.7. Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat ce conține fosfataza alcalina în tampon
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
tampon de blocare (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl diluție de antiser în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.6. Se îndepărtează antiserul din godeuri. Se spală conform pct. 3.4. 3.7. Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat ce conține fosfataza alcalina în tampon de blocare. Se aplică 100 мl de diluție conjugata în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.8. Se îndepărtează conjugatul din godeuri. Godeurile se spală conform
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
de o oră la 37°C. 3.6. Se îndepărtează antiserul din godeuri. Se spală conform pct. 3.4. 3.7. Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat ce conține fosfataza alcalina în tampon de blocare. Se aplică 100 мl de diluție conjugata în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.8. Se îndepărtează conjugatul din godeuri. Godeurile se spală conform pct. 3.4 și 3.6. 3.9. Se prepară soluția de substrat ce conține fosfataza alcalina
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
10 мl de 0,5 M de NaOH. Se amestecă întorcându-se în mod repetat microfiola. 4.2. Se încălzește timp de 4 minute la 100°C. Se pune imediat microfiola la gheață. 4.3. Se prepară cel puțin două diluții decimale, de exemplu, 1/10 și 1/100 sau mai multe, dacă se consideră util, în apă distilata sterilă sau ultrapura (AUP) 4.4. Se prepară amestecul de reacție PCR (apendicele 6) într-o fiola sterilă, prin adăugarea următoarelor componente
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
analiza REA a fragmentului amplificat este identică cu tulpina de control pozitiv de Ralstonia solanacearum. 5. Testul de însămânțare pe medii selective În baza Elphinstone et al., 1996 5.1. Testul se efectuează printr-o tehnică corespunzătoare de însămânțare a diluțiilor, astfel: (i) Se prepară cel puțin două diluții zecimale, 1/10 мl 1/100 sau mai multe, dacă se consideră util, din depozitul resuspendat în tamponul de depozitare. Se pipeteaza un volum standard măsurat (50-100 мl) din depozitul resuspendat din
ANEXE din 19 decembrie 2002 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]