850 matches
-
UNT, LAPTE PRAF DEGRESAT, CAZEINĂ ȘI CAZEINAȚI La analiza untului pentru detectarea prezenței bacteriilor coliforme se inoculează probe de 1 g de unt în mediul de cultură. Pentru detectarea prezenței bacteriilor coliforme în lapte praf degresat sau cazeină/cazeinați, se inoculează probe de 0,1 g în mediul de cultură. Se folosește standardul FIL 73A: 1985, metoda B cu următoarele modificări: 1) Pregătirea probelor se face conform standardului FIL 122B:1992. Pentru cazeină acidă se poate folosi ca alternativă procedura de
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
Pregătirea probelor se face conform standardului FIL 122B:1992. Pentru cazeină acidă se poate folosi ca alternativă procedura de preparare a probelor descrisă în standardul FIL 73A:1985. 2) Se incubează și se evaluează numai eprubete în care s-au inoculat probe de 1g (de unt) sau de 0,1 g (de lapte praf degresat sau respectiv de cazeină/cazeinați). Nu se fac diluări zecimale. Evaluarea rezultatelor Trei rezultate negative: Cerința este îndeplinită Două sau trei rezultate pozitive: Cerința nu este
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
celulare etc.) care împiedică inocularea celulelor în cele 48 de ore de la colectarea probelor de țesuturi, se poate congela lichidul de suprafață la - 80°C și se poate efectua un examen virusologic în decurs de patrusprezece zile. Inainte de a inocula celulele, se amestecă lichidul de suprafață în proporție egală cu un amestec de antiseruri împotriva serotipurilor indigene ale virusului NPI, diluate corespunzător, și se incubează astfel cel puțin timp de o oră la 15°C sau cel mult timp de
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
de o oră la 15°C sau cel mult timp de 18 ore la 4°C. Proporția de antiser trebuie să fie de cel puțin 1/2 000 într-un test de neutralizare pe porțiuni la 50%. Tratamentul tuturor celulelor inoculate cu un ser antiviral NPI (virus care, în anumite regiuni ale Europei, este prezent în 50% din eșantioanele de pești) are ca scop împiedicarea apariției în culturile celulare inoculate a unui ECP rezultând din virusul NPI. Acest tratament permite reducerea
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
reducerea duratei examenelor virusologice ca și numărul de cazuri în care apariția unui ECP trebuie considerată ca un semn potențial al prezenței SHV sau NHI. Atunci când probele provin din unități de producție considerate ca nefiind atinse de NPI, tratamentul celulelor inoculate cu ser antiviral NPI poate fi omis. III. Examen virusologic 1. Culturi celulare și medii Celule BF-2 sau RTG-2 și EPC sau FHM sunt cultivate la temperaturi de la 20 la 30°C într-un mediu adecvat, de pildă un mediu
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
0,2. Culturile celulare care se folosesc pentru inoculare cu țesuturi trebuie să fie de preferință tinere (de patru până la 48 de ore) și aflate în faza de creștere activă (non confluentă) în momentul inoculării. 2. Inocularea culturilor celulare Se inoculează o suspensie de organe tratată cu antibiotice în culturile celulare la două diluții: diluția inițială și o diluție a acesteia la 1:10, ajungându-se respectiv la diluții finale ale materialului tisular într-un mediu de culturi celulare la 1
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
unei cupule într-o placă celulară cu 24 de cupule. Se recomandă utilizarea plăcilor de cultură celulară, dar se admit și alte suporturi care prezintă o suprafață de creștere similară sau superioară. 3. Incubarea culturilor celulare Se incubează culturile celulare inoculate la 15°C timp de șapte până la zece zile. In cazul în care culoarea mediului de cultură celulară se modifică de la roșu la galben, indicând o acidifiere a mediului, se ajustează pH-ul cu ajutorul unei soluții sterile de bicarbonat sau
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
celulară similară cu cea a culturii primare. Părți alicote din mediu (lichid de suprafață) provenind de la toate culturile/cupulele care constituie cultura primară se reunesc, în funcție de cultura de celule, la șapte sau zece zile de la inoculare. Amestecurile respective sunt apoi inoculate în culturile celulare omoloage, nediluate și diluate la 1:10 (dând diluții finale ale lichidului de suprafață de respectiv 1:10 și 1:100), după descrierea din partea I III 2. Se pot de asemenea inocula părți alicote de 10% din
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
inoculare. Amestecurile respective sunt apoi inoculate în culturile celulare omoloage, nediluate și diluate la 1:10 (dând diluții finale ale lichidului de suprafață de respectiv 1:10 și 1:100), după descrierea din partea I III 2. Se pot de asemenea inocula părți alicote de 10% din mediul care constituie cultura primară direct într-o cupulă cu culturi celulare proaspete (sub-culturi de cupulă la cupulă). Inocularea poate fi precedată de o preincubare a diluțiilor cu antiser împotriva virusului NPI la o diluție
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
o diluție de 1:50 (vol:vol) (1), - grup de antiseruri împotriva serotipurilor indigene ale virusului NPI la o diluție de 1:50 (vol:vol) (1), - mediu de cultură singur (control pozitiv). Pentru fiecare din amestecurile de suprafață viral-ser, se inoculează cel puțin două culturi celulare cu 50 de μl de amestec de lichid de suprafață și de ser și se incubează la 15°C. Se controlează apariția unui ECP în conformitate cu partea I III 4. Anumite tulpini ale virusului SHV nu
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
pot folosi și alte tulpini celulare, ca BF-2, RTG-2 sau FHM. Atunci când celulele s-au depus pe suprafața de sticlă (aproximativ la o oră după însămânțare) sau atunci când aceste culturi au fost incubate timp de 24 de ore maximum, se inoculează virusul care trebuie identificat. Se inoculează patru culturi cu un raport volum la volum de 1:10 și patru culturi cu un raport de 1:1000. Acestea se incubează apoi la 15°C timp de 20 - 30 de ore. După
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
ca BF-2, RTG-2 sau FHM. Atunci când celulele s-au depus pe suprafața de sticlă (aproximativ la o oră după însămânțare) sau atunci când aceste culturi au fost incubate timp de 24 de ore maximum, se inoculează virusul care trebuie identificat. Se inoculează patru culturi cu un raport volum la volum de 1:10 și patru culturi cu un raport de 1:1000. Acestea se incubează apoi la 15°C timp de 20 - 30 de ore. După incubare, se clătesc de două ori
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
strat de reactiv se compune din anticorpi poli- sau monoclonali de referință de calitate. Al doilea reactiv este un antiser combinat cu fluorcrom preparat împotriva imunoglobulinelor din primul ser. Pentru fiecare dintre antiserurile testate, se folosesc cel puțin o cultură inoculată în doză ridicată și o cultură inoculată în doză slabă. Se includ în test martori negativi și pozitivi corespunzători. Se recomandă tipuri de fluorcrom precum FITC sau TRITC. Se montează lamele de cultură folosindu-se o soluție salină glicerolată. Se
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
poli- sau monoclonali de referință de calitate. Al doilea reactiv este un antiser combinat cu fluorcrom preparat împotriva imunoglobulinelor din primul ser. Pentru fiecare dintre antiserurile testate, se folosesc cel puțin o cultură inoculată în doză ridicată și o cultură inoculată în doză slabă. Se includ în test martori negativi și pozitivi corespunzători. Se recomandă tipuri de fluorcrom precum FITC sau TRITC. Se montează lamele de cultură folosindu-se o soluție salină glicerolată. Se examinează la ultraviolete incidente. Se folosesc oculare
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
în partea I IV 2. III.1. Culturi celulare și medii A se vedea partea I III 1. III.2. Inocularea culturilor celulare A se vedea partea I III 3. III.4. Microscopie Se inspectează în fiecare zi culturile celulare inoculate pentru a se distinge apariția unui ECP la o mărire de 40-150 de ori. Dacă formarea unui ECP este inhibată de unul din serurile folosite, virusul poate fi considerat ca identificat în consecință. Dacă apariția unui ECP nu este inhibată
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
unul din seruri, trebuie să se pună în aplicare procedurile de identificare a virusului în conformitate cu partea I IV. III.5. Sub-cultură Dacă nu se produce nici un ECP după șapte până la zece zile, trebuie pusă în aplicare o sub-cultură din culturile inoculate cu lichidul de suprafață și mediul (partea II B II 3) în conformitate cu partea I III 5. C. Alte tehnici de diagnostic Lichidul de suprafață preparat după indicațiile din partea I II 2 poate fi supus tehnicilor IFAT sau ELISA, respectiv în conformitate cu
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
săptămâni animalele sunt sacrificate și se verifică dacă nu există leziuni tuberculare; se fac în special incizii histologice în splină, ficat și plămâni. Această procedură se aplică pentru orice animal care moare înainte de termenul prevăzut. (b) Absența proprietăților iritante: se inoculează cutanat 2 500 unități internaționale (UI) de tuberculină într-un volum de 0,1 ml în pielea depilată de pe flancurile a doi cobai. După patruzeci de ore nu trebuie să existe reacții. 13. Tuberculinele trebuie analizate chimic pentru a determina
jrc29as1966 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85161_a_85948]
-
pentru comparație sunt supuse cromatografiei ascendente pe hârtie. Antibioticele sunt detectate și identificate prin comparația valorilor Rf cu acelea ale substanțelor standard, fie prin fluorescență în lumină UV (conținut ridicat de antibiotice) sau prin bioautografie într-un mediu de geloză inoculat cu B cereus. 3. Reactivi și mediul de cultură 3.1 Soluție tampon, pH 3,5 Acid citric monohidrat A.R. 10,256 g Difosfat de sodiu Na2HPO4 ·2H2O A.R. 7,45 g Acetonă A.R. 300 ml Apă
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
de 1 μg per cm2, după ce cromatograma a fost tratată cu vapori de amoniac (3.7) sunt observate iradiații fluorescente galbene auriu sub lumină UV (4.4). 7.3 Detectarea prin bioautografie Se toarnă mediul de cultură (3.10), anterior inoculat cu B cereus (3.9), într-un taler de sticlă (4.5) și hârtia se plasează în mediul de cultură. După 5 minute de contact, se detașează hârtia și se plasează pe un alt loc din mediul de cultură, unde
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
geloză însămânțat cu B cereus. Difuzia este evidențiată prin formarea zonele de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului. 3. Microorganismele: B cereus, ATTC nr. 11.778 3.1 Menținerea sușei părinte Se inoculează cu B cereus un tub de geloză luat dintr-un mediu de cultură (4.1) fără metilen albastru și acid boric .Se incubează peste noapte la aproximativ 30ș C. Se păstrează cultura într-un frigider și se re-inoculează tubul de
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
inoculum care, pentru diferitele concentrații de antibiotice folosite, dă cele mai întinse zone de inhibiție posibile care încă mai sunt clare. Această cantitate este de obicei între 0,2 și 0,3 per 1 000 ml. Mediul de cultură este inoculat între 50 și 60ș C. 4. Mediul de cultură și reactivii 4.1 Mediul de bază pentru determinare 1 Glucoză 1 g Peptonă triptică 10 g Extract din carne 1,5 g Extract din drojdie 3 g Geloză, conform cantității
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
tampon de fosfat (4.3). 6.2.2 Oxitetraciclină și tetraciclină Se procedează cum este indicat la pct. 6.2.1, folosind amestecul (4.10) în loc de amestecul (4.9). 7. Metoda de determinare 7.1 Inocularea mediului de cultură Se inoculează la 50 - 60ș C mediul de bază pentru determinarea (4.1) cu suspensia de spori (3.2). 7.2 Prepararea tăvilor Difuzia în geloză se realizează în tăvi folosind 4 concentrații ale soluției standard (S3, S4, S2 și S1) și
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
transmisiei luminii a unui mediu de cultură care a fost însămânțat cu Staphylococus aureus și la care s-a adăugat antibioticul. Transmisia luminii depinde de concentrația de antibiotic. 3. Microorganisme: Staphylococus aureus K 1411 3.1 Menținerea sușei parentale Se inoculează cu S. aureus într-un tub de geloză luat din mediul de cultură (4.1), la care s-a adăugat 1,5 - 3 % de geloză (în funcție de calitate). Se incubează peste noapte la 37ș C. Se păstrează cultura într-un frigider
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
cele 2 tuburi, și 0,5 ml (= 0,24 μg) în fiecare din celelalte 2 tuburi. Se completează volumul din ultimele două tuburi până la 1 ml cu soluția tampon de fosfat (4.2). 7.2 Inocularea mediului de cultură Se inoculează mediul de bază pentru determinare (4.1) cu inoculumul (3.2) pentru a obține cu fotometrul la 590 nm transmisia luminii 85 % în celule de 5 cm sau transmisia 92 % în celule de 2 cm, aparatul fiind fixat la transmisia
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
cereus. Difuzia este făcută vizibilă de formarea unor zone de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului. 3. Microorganisme: B. cereus K 230 TR1 ( rezistent la tetraciclină) 3.1 Menținerea sușei parentale Se inoculează cu B. cereus un tub de geloză luat dintr-un mediu de cultură (4.1) la care se adaugă 100 μg pe 5 ml de Oxitetraciclină. Se incubează peste noapte la aproximativ 30ș C. Se păstrează cultura în frigider și
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]