10,305 matches
-
se fixează pe lama prin încălzire, flambare prin flacăra sau cu 95% etanol. 2.3. Procedura IF (i) În conformitate cu pregătirea lamei de testare de la pct. 2.1 (i): se prepară un set de diluții duble ale antiserului în tampon IF (apendicele 3): 1/4 din titru (Ț/4), 1/2 din titru (Ț/2), titru (Ț) și de două ori titrul (2T). (îi) În conformitate cu pregătirea lamei de testare de la pct. 2.1 (îi): se prepară diluția de lucru (working dilution) a
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
temperatura camerei. 2.3.3. Se agită picăturile de antiser de pe lama și se clătesc lamele cu atenție, cu un tampon IF. Se spală timp de 5 minute în soluție tampon IF - Tween și apoi 5 minute în tampon IF (apendicele 3). Excesul de umiditate se îndepărtează cu grijă. 2.3.4. Se aranjează lamele pe hârtie de filtru umedă. Se acoperă godeurile de testare și godeurile FITC cu diluția conjugatului FITC utilizat pentru determinarea titrului. Volumul conjugatului aplicat în godeuri
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
2.3.6. Se agită picăturile de conjugat de pe lama. Se clătesc și se spală conform pct. 2.3.3. Se îndepărtează cu grijă excesul de umiditate. 2.3.7. Se pipeteaza 5-10 мl glicerol - tampon fosfat 0,1 M (apendicele 3) sau ceva similar în fiecare godeu și se acoperă. 2.4. Citirea testului IF Se examinează lamele de testare la un microscop cu epifluorescenta, cu filtre compatibile pentru excitarea FITC, sub imersie în ulei, la o mărire de 500-1000
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
celule intens fluorescente cu morfologie caracteristică, testul IF este negativ. (îi) Dacă sunt descoperite celule intens fluorescente cu morfologie caracteristică, se determina numărul mediu de celule pe câmp microscopic și se calculează numărul de celule (N)/ml de depozit resuspendat (apendicele 4). O populație de aproximativ 10^3 celule/ml de depozit resuspendat este considerată a fi limită de sensibilitate pentru testul IF: - pentru probele cu N 10^3 celule/ml de depozit resuspendat, testul IF este considerat pozitiv; pentru probele
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
pipeteaza 100 - 20 мl din depozitul resuspendat într-o microfiola. Se încălzește timp de 4 minute la 100°C. Se pune microfiola la gheață. 3.2. Se adaugă un volum egal de tampon de căptușire ce conține carbonat dublu concentrat (apendicele 5). Se agită. 3.3. Se aplică 100 мl în fiecare dintre cele două repetiții (minimum două repetiții) de pe plăcile de microtitrare. Se incubează o oră la 37°C sau peste noapte la 4°C. 3.4. Se îndepărtează extractele
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
dintre cele două repetiții (minimum două repetiții) de pe plăcile de microtitrare. Se incubează o oră la 37°C sau peste noapte la 4°C. 3.4. Se îndepărtează extractele din godeuri. Se spală godeurile de trei ori cu PBS - Tween (apendicele 5), lăsându-se ultima soluție de spălare cel putin 5 minute în godeuri 3.5. Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului de Ralstonia solanacearum în tampon de blocare (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl diluție de antiser în godeuri. Se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
din godeuri. Se spală godeurile de trei ori cu PBS - Tween (apendicele 5), lăsându-se ultima soluție de spălare cel putin 5 minute în godeuri 3.5. Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului de Ralstonia solanacearum în tampon de blocare (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl diluție de antiser în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.6. Se îndepărtează antiserul din godeuri. Se spală conform pct. 3.4. 3.7. Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
conjugata în godeuri. Se incubează timp de o oră la 37°C. 3.8. Se îndepărtează conjugatul din godeuri. Godeurile se spală conform pct. 3.4 și 3.6. 3.9. Se prepară soluția de substrat ce conține fosfataza alcalina (apendicele 5). Se pipeteaza 100 мl în godeuri. Se incubează timp de 30 de minute până la o oră, în întuneric, la temperatura camerei. 3.10. Se citește absorbanta la 409 nm. Interpretarea testului ELISA: Testul ELTSA este negativ dacă densitatea optică
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
la gheață. 4.3. Se prepară cel puțin două diluții decimale, de exemplu, 1/10 și 1/100 sau mai multe, dacă se consideră util, în apă distilata sterilă sau ultrapura (AUP) 4.4. Se prepară amestecul de reacție PCR (apendicele 6) într-o fiola sterilă, prin adăugarea următoarelor componente în ordinea următoare: Pentru mai multe reacții: Se calculează cantitatea fiecărui component pentru numărul de reatii necesare. Se amestecă aceste componente și se transferă 45 мl - 48 мl din amestec în
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
zecimale, 1/10 мl 1/100 sau mai multe, dacă se consideră util, din depozitul resuspendat în tamponul de depozitare. Se pipeteaza un volum standard măsurat (50-100 мl) din depozitul resuspendat din fiecare diluție pe un mediu selectiv SMSA, modificat (apendicele 7) și împrăștierea se efectuează cu o baghetă de sticlă pe toată suprafața mediului. Dacă se consideră necesar, se efectuează o însămânțare cu 10 мl din depozitul resuspendat. Ansa se trece prin flacăra între însămânțări. (îi) Se transferă un volum
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
virulente de Ralstonia solanacearum sunt de culoare alb-laptos, plate, neregulate și fluide cu o colorație roșu-sângeriu în centru și prezentând verticile sau dungi interne. 5.4. Coloniile cu morfologie caracteristică se pot purifica prin subcultura pe un mediu nutritiv comun (apendicele 1). 5.5. Se identifică culturile pure (secțiunea ÎI pct. 4.1) și confirmarea culturilor de Ralstonia solanacearum se face printr-un test de patogenitate (secțiunea ÎI pct. 4.3). Interpretarea rezultatului testului de însămânțare pe plăci selective. Testul plăcilor
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
în controalele pozitive. Testul biologic este pozitiv dacă plantele test sunt infectate cu Ralstonia solanacearum. 7. Teste de îmbogățire După Elphinstone et al., 1996 7.1. Se transferă 100 мl de depozit resuspendat în 3 ml de bulion SMSA, modificat (apendicele 7). 7.2. Se incubează timp de 48 de ore și în nici un caz mai mult de 72 de ore la temperatura de 28°C, fără a închide ermetic dopul eprubetei, pentru a permite aerisirea. 7.3. Se fixează dopul
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
dopul și se agită. Se utilizează acestea pentru testul IF prevăzut la pct. 2, testul ELISA prevăzut la pct. 3 și/sau testul PCR prevăzut la pct. 4. 8. Testul de patogenitate A se vedea secțiunea ÎI pct. 4.3. Apendice 1 Medii nutritive pentru izolarea și cultură de Ralstonia solanacearum Agar nutritiv (AN) Agar nutritiv (Difco) 23 g Apă distilata 1 l Se prepară câte 1/2 l de mediu în flacoane de 1 l. Se dizolvă ingredientele. Se sterilizează
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
prin autoclavare la 121°C, timp de 15 minute. Se răcește la 50°C. Se adaugă o soluție apoasa sterilizata prin filtrare de clorura de trifeniltetrazoliu (Sigma) pentru obținerea concentrației finale de 50 mg la litru. Se toarnă pe plăci. Apendice 2 Materiale pentru pregătirea probelor Tampon de macerare: 50 mM tampon fosfat, pH 7,0 Acest tampon este utilizat la macerarea țesuturilor. Na(2)HPO(4) - 4,26 g KH(2)PO(4) - 2,72 g Apă distilata - 1 l
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
O - 2,7 g Na(2)HPO(4) 2H(2)O - 0,4 g Apă distilata - 1 l Se dizolvă ingredientele și se verifică pH-ul. Se repartizează corespunzător. Se sterilizează prin autoclavare la 121°C, timp de 15 minute. Apendice 3 Materiale pentru testul IF Tampon IF: 10 mM tampon salin fosfat (PBS) pH 7,2 Acest tampon este utilizat pentru diluarea antiserurilor. Na(2)HPO(4) 12H(2)O - 2,7 g Na(2)HPO(4) 2H(2)O
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
tampon glicerol - fosfat pH 7,6 Acest tampon este utilizat pentru intensificarea fluorescentei. Na(2)HPO(4) 12H(2)O - 3,2 g NaH(2)PO(4) 2H(2)O - 0,15 g Glicerol - 50 ml Apă distilata - 100 ml Apendice 4 Determinarea nivelului de contaminare în testul IF Suprafață (S) godeului a unei lame cu multe godeuri: pi*D^2 S = (1) 4 în care: D este diametrul godeului Suprafață (s) câmpului obiectivului: pi*d^2 s = (2) 4 în
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
pe godeu (C). S C = c * ─── s Se calculează numărul de celule fluorescente tipice/ml de depozit resuspendat (N). 1000 N = C x ──── x F, y în care y = volumul de depozit pe godeu, F = factorul de diluție al depozitului. Apendice 5 Materiale pentru testul ELISA Tampon de căptușire, ce conține carbonat dublu concentrat, pH 9,6 Na(2)CO(3) - 6,36 g NaHCO(3) - 11,72 g Apă distilata - 1 l Se dizolvă ingredientele și se verifică pH-ul
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
ajustează la pH 9,8 cu HCl concentrat. Se adaugă apă distilata până la 1 l. Se adaugă 0,2 g MgCl(2). Se dizolvă două tablete de 5 mg de substrat, ce conțin fosfataza (Sigma) la 15 ml de soluție. Apendice 6 Materiale pentru testul PCR Secvență de primeri ce conțin oligonucleotide Primer OLI-1 -5' -GGGGGTAGCTTGCTACCTGCC-3' Primer Y-2 -5' -CCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGT-3' Pentru materiale, a se vedea Seal et al., (1993). Apendice 7 Materiale pentru testele de însămânțare pe medii selective și de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
de substrat, ce conțin fosfataza (Sigma) la 15 ml de soluție. Apendice 6 Materiale pentru testul PCR Secvență de primeri ce conțin oligonucleotide Primer OLI-1 -5' -GGGGGTAGCTTGCTACCTGCC-3' Primer Y-2 -5' -CCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGT-3' Pentru materiale, a se vedea Seal et al., (1993). Apendice 7 Materiale pentru testele de însămânțare pe medii selective și de îmbogățire Mediu selectiv SMSA (Engelbrecht, 1994 modificat de Elphinstone et al., 1996) dar se elimină geloza și sărurile de tetrazoliu. Mediu de bază Acizi casaminici (Difco) - 1 g Bacto-peptona
EUR-Lex () [Corola-website/Law/151504_a_152833]
-
pentru transportul mărfurilor sub sigiliu vamal. (4) Placa de agreare este fixată în mod permanent și într-un loc foarte vizibil, alături de orice altă placă de eliberată în scopuri oficiale. (5) Placa de agreare, conform modelului nr. 1 reprodus în apendicele 1 al prezentei părți, este o placă de metal de cel puțin 20 cm x 10 cm. Aceasta poartă următoarele inscripții, cel puțin în limba franceză sau în limba engleză, gravate sau imprimate în relief sau înscrise prin orice mijloc
jrc375as1977 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85511_a_86298]
-
tipul de construcție respectiv pentru a constata dacă tipul respectiv corespunde condițiilor tehnice prevăzute în partea I. (14) Dacă un tip de container este agreat, solicitantului i se eliberează un singur certificat de agreare conform modelului nr. II reprodus în apendicele 2 la prezenta parte și valabil pentru toate containerele construite în conformitate cu specificațiile tipului agreat. Acest certificat dă dreptul constructorului să aplice pe fiecare container din seria tipului o placă de agreare conform modelului descris la alin. (5) al prezentei părți
jrc375as1977 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85511_a_86298]
-
17) Autoritatea competentă examinează numărul de containere pe care îl consideră necesar și eliberează, după ce a constatat că acest container sau aceste containere corespund condițiilor tehnice prevăzute în partea I, un certificat de agreare conform modelului nr. III, reprodus în apendicele 3 la prezenta parte și valabil numai pentru numărul de containere agreate. Acest certificat, care poartă numărul sau numerele de fabricație stabilite de constructor pentru containerul sau containerele respective, dă dreptul solicitatorului să aplice pe fiecare container agreat placa de
jrc375as1977 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85511_a_86298]
-
numărul de containere agreate. Acest certificat, care poartă numărul sau numerele de fabricație stabilite de constructor pentru containerul sau containerele respective, dă dreptul solicitatorului să aplice pe fiecare container agreat placa de agreare prevăzută la alin. (5) al prezentei părți. APENDICELE 1 LA PARTEA II MODELUL I PLACA DE AGREARE (versiunea engleză) Placă metalică Peretele containerului (1) Numai în caz de agreare pe tip de construcție. APENDICELE 1 LA PARTEA II MODELUL I PLACA DE AGREARE (versiunea franceză) Placă metalică Peretele
jrc375as1977 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85511_a_86298]
-
pe fiecare container agreat placa de agreare prevăzută la alin. (5) al prezentei părți. APENDICELE 1 LA PARTEA II MODELUL I PLACA DE AGREARE (versiunea engleză) Placă metalică Peretele containerului (1) Numai în caz de agreare pe tip de construcție. APENDICELE 1 LA PARTEA II MODELUL I PLACA DE AGREARE (versiunea franceză) Placă metalică Peretele containerului (1) Numai în caz de agreare pe tip de construcție. APENDICELE 2 LA PARTEA II MODELUL II CONVENȚIA VAMALĂ PRIVIND TRANSPORTUL INTERNAȚIONAL DE MĂRFURI SUB
jrc375as1977 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85511_a_86298]
-
Placă metalică Peretele containerului (1) Numai în caz de agreare pe tip de construcție. APENDICELE 1 LA PARTEA II MODELUL I PLACA DE AGREARE (versiunea franceză) Placă metalică Peretele containerului (1) Numai în caz de agreare pe tip de construcție. APENDICELE 2 LA PARTEA II MODELUL II CONVENȚIA VAMALĂ PRIVIND TRANSPORTUL INTERNAȚIONAL DE MĂRFURI SUB ACOPERIREA CARNETELOR TIR (1975) CERTIFICAT DE AGREARE PE TIP DE CONSTRUCȚIE 1. Certificat nr. (2): 2. Se certifică prin prezentul că tipul de container descris mai
jrc375as1977 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85511_a_86298]