83,221 matches
-
aerul expirat și rezidual; ― compararea răspunsului biologic (ex. studii de toxicitate acută) între loturile de experiment, martor și/sau de referință; ― compararea cantității totale de substanță excretată pe cale renală și/sau a metaboliților la loturile de experiment și de referință; ― determinarea ariei de sub curbă formată de concentrația plasmă/timp a substanței și/sau metaboliților, comparativ cu lotul de referință. Distribuția În prezent, sunt disponibile două metodologii pentru analizarea modelelor de distribuție: ― obținerea de informații calitative utile folosind tehnici autoradiografice asupra întregului
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cu lotul de referință. Distribuția În prezent, sunt disponibile două metodologii pentru analizarea modelelor de distribuție: ― obținerea de informații calitative utile folosind tehnici autoradiografice asupra întregului corp; ― obținerea de informații cantitative prin sacrificarea animalelor la momente diferite după expunere și determinarea concentrației și cantității totale de substanță și/sau metaboliți în țesuturi și organe. Excreția În studiile de excreție se colectează: urină, fecale, aer expirat și, în anumite circumstanțe, bilă. Cantitatea de substanță testată și/sau metaboliții în acești produși de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
metaboliților și sugerate căi metabolice adecvate. De asemenea, ar putea fi utilă efectuarea de studii in vitro în vederea obținerii de informații cu privire la căile metabolice. Informații suplimentare despre relația dintre metabolism și toxicitate pot fi obținute prin studii biochimice referitoare la determinarea efectelor asupra sistemelor enzimatice metabolizante, depleția compușilor sulfhidrilici endogeni non-proteici și stabilirea legăturii chimice dintre substanță și macromolecule. 2. DATE În funcție de tipul studiului realizat, rezultatele se prezintă în tabele însoțite de grafice. Pentru fiecare lot tratat se vor specifica media
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
să cuprindă următoarele informații: ― rasa, linia, sursa, condițiile ambiante, regimul alimentar, ― caracterizarea materialelor folosite pentru marcare, dacă este cazul, ― dozele și intervalele de administrare folosite, ― calea (căile) de administrare și excipientul folosit, ― efecte toxice sau de alt tip, ― metode pentru determinarea substanței și/sau metaboliți din probe biologice, inclusiv din aerul expirat, ― prezentarea sub formă de tabele a măsurătorilor în funcție de sex, doză, regim, moment, țesuturi și organe, ― prezentarea gradului de absorbție și excreție în timp, ― metode pentru caracterizarea și identificarea metaboliților
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
alte specii, țesuturi, fracțiuni postmitocondriale sau alte metode. Condițiile de desfășurare a testului Sușe celulare testate Sușele utilizate cel mai frecvent folosite sunt cele diploide D4, D5, D7 și JD1. Pot fi utilizate și alte sușe. Medii de cultură Pentru determinarea numărului de colonii supraviețuitoare și frecvența recombinărilor mitotice trebuie folosite medii de cultură adecvate. Folosirea martorilor negativi și pozitivi Martorii pozitivi, cei netratați și cei tratați cu solvent, trebuie preparați simultan. Pentru fiecare mecanism de recombinare specific se folosesc substanțe
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
În cazul perioador lungi de tratament, culturile trebuie studiate microscopic în vederea decelării formării sporilor, prezența acestora invalidând testul. Condiții de incubație Cutiile se incubează între 4 și 7 zile la o temperatură de 28 - 30șC, la întuneric. Cutiile utilizate pentru determinarea sectoarelor homozigote roșu și roz produse prin încrucișare mitotică se păstrează în frigider la aproximativ 4˚C, timp de una-două zile înaintea numărării, pentru a permite dezvoltarea de colonii pigmentate corespunzătoare. Frecvențele recombinării mitotice spontane Se utilizează subculturi celulare cu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
DE MUTAȚIE GENICĂ PE CELULE DE MAMIFERE 1. METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nu sunt specificate. 1.4. Principiul metodei de testare Pentru determinarea mutațiilor cauzate de substanțele chimice se pot folosi sisteme de culturi celulare de mamifere. Printre cele mai utilizate linii celulare se numără celulele limfomatoase L5178Y de șoarece și liniile celulare CHO și V-79 de hamster chinezesc. În aceste linii
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
o activitate metabolică intrinsecă suficientă trebuie expuse la substanța de testare atât în prezența, cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. La sfârșitul perioadei de expunere, celulele sunt spălate în vederea îndepărtării substanței de testare și cultivate pentru determinarea viabilității și pentru a permite expresia fenotipului mutant. La sfârșitul perioadei de expresie, care trebuie să fie suficientă pentru a permite expresia fenotipică optimă a mutantelor induse, celulele vor crește în mediu de cultură cu și fără agenți selectivi, pentru
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
viabilității și pentru a permite expresia fenotipului mutant. La sfârșitul perioadei de expresie, care trebuie să fie suficientă pentru a permite expresia fenotipică optimă a mutantelor induse, celulele vor crește în mediu de cultură cu și fără agenți selectivi, pentru determinarea numărului de mutante și a viabilității. Toate rezultatele se verifică într-un experiment independent. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Se indică numărul de celule pe fiecare cutie pentru substanța de testare și martori, atât în termeni de inducere
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
în prezența cât și în absența unui sistem adecvat de activare metabolică. Condiții experimentale Numărul culturilor Pentru fiecare metodă experimentală sunt necesare cel puțin două culturi celulare pentru autoradiografiere și șase culturi (sau mai puține, dacă există argumente științifice) pentru determinările prin LSC a UDS. Folosirea martorilor negativi și pozitivi În fiecare experiment trebuie incluși martori pozitivi și negativi (netratați și/sau excipient) suplimentari, cu și fără activare metabolică. În testele care folosesc hepatocite de șobolan, exemple de martori pozitivi sunt
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
bine caracterizate și limfocitele Tehnica de autoradiografiere: Culturile celulare se tratează cu substanța de testare o perioadă de timp corespunzătoare, apoi se tratează cu 3H-TdR. Perioadele se stabilesc în funcție de natura substanței, de activitatea sistemelor metabolizante și de tipul celulelor. Pentru determinarea maximului de USD, 3H-TdR trebuie adăugată fie simultan cu substanța de testare, fie la câteva minute după expunerea la substanța de testare. Alegerea uneia dintre aceste metode se va face în funcție de interacțiunile posibile între substanța de testare și 3H-TdR. Pentru
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
din celule și se determină conținutul total de ADN și proporția de 3H-TdR încorporată. Trebuie menționat faptul că dacă în tehnicile descrise mai sus se utilizează limfocite umane, nu este necesară suprimarea replicării semiconservative a ADN pe culturile nestimulate. Analiză Determinările autoradiografice Pentru determinarea USD în celulele din cultură, nucleele de fază S nu se numără. Trebuie numărate minimum 50 celule per concentrație. Lamele trebuie etichetate înainte de numărare. De pe fiecare lamă se numără mai multe câmpuri distribuite aleator, alese la distanță
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
se determină conținutul total de ADN și proporția de 3H-TdR încorporată. Trebuie menționat faptul că dacă în tehnicile descrise mai sus se utilizează limfocite umane, nu este necesară suprimarea replicării semiconservative a ADN pe culturile nestimulate. Analiză Determinările autoradiografice Pentru determinarea USD în celulele din cultură, nucleele de fază S nu se numără. Trebuie numărate minimum 50 celule per concentrație. Lamele trebuie etichetate înainte de numărare. De pe fiecare lamă se numără mai multe câmpuri distribuite aleator, alese la distanță unul de celălalt
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
etichetate înainte de numărare. De pe fiecare lamă se numără mai multe câmpuri distribuite aleator, alese la distanță unul de celălalt. Cantitatea de 3H-TdR încorporată în citoplasmă se determină prin numărarea a trei arii de mărimea nucleului, din citoplasma fiecărei celule numărate. Determinările LSC Pentru determinarea prin LSC a USD, se utilizează un număr adecvat de culturi pentru fiecare concentrație a substanței de testare și pentur martori. Toate rezultatele trebuie confirmate într-un experiment independent. 2. DATE Datele sunt prezentate sub formă de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
De pe fiecare lamă se numără mai multe câmpuri distribuite aleator, alese la distanță unul de celălalt. Cantitatea de 3H-TdR încorporată în citoplasmă se determină prin numărarea a trei arii de mărimea nucleului, din citoplasma fiecărei celule numărate. Determinările LSC Pentru determinarea prin LSC a USD, se utilizează un număr adecvat de culturi pentru fiecare concentrație a substanței de testare și pentur martori. Toate rezultatele trebuie confirmate într-un experiment independent. 2. DATE Datele sunt prezentate sub formă de tabele. 2.1
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
prin LSC a USD, se utilizează un număr adecvat de culturi pentru fiecare concentrație a substanței de testare și pentur martori. Toate rezultatele trebuie confirmate într-un experiment independent. 2. DATE Datele sunt prezentate sub formă de tabele. 2.1. Determinările autoradiografice Cantitatea de 3H-TdR încorporată în citoplasmă și numărul de granulații găsite în nucleii celulari trebuie să fie înregistrate separat. Pentru descrierea distribuției cantității de 3H-TdR încorporată în citoplasmă și numărul de granulații per nucleu se vor folosi media, mediana
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
motivația alegerii acestor concentrații folosite în experiment, - informații despre sistemul de activare metabolică, - schema de tratament, - martorii pozitivi și negativi, - tehnica de autoradiografie folosită, - metodele folosite pentru a bloca intrarea celulelor în faza S, - metodele folosite pentru extragerea ADN și determinarea conținutului total în ADN prin tehnica LSC, - dacă este posibil, relația doză-efect, - evaluarea statistică, - discutarea rezultatelor, - interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală: partea B. 4. REFERINȚE Vezi introducerea generală: partea B. TEST IN VITRO DE SCHIMBARE
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
fenotipic la masculi purtători ai genei mutante. Dacă mutația este letală în condiții de hemizigotism, prezența sa se deduce din absența unei generații de descendenți de sex masculin, din cele două care sunt normal produse de o femelă heterozigotă. Aceste determinări se fac prin intermediul unor cromozomi special marcați și dispuși. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1. 6. Descrierea metodei de testare Pregătire Tulpini Pot fi folosiți masculi din tulpini sălbatice bine caracterizate și femele din tulpina Muller-5. De asemenea, se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
TEST IN VITRO DE TRANSFORMARE A CELULELOR DE MAMIFERE 1. METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Pentru determinarea modificărilor fenotipice in vitro induse de substanțele chimice asociate cu transformări maligne in vivo, se folosesc sisteme de cultură de celule de mamifere. Cele mai des utilizate celule sunt C3H10T1/2, 3T3, SHE și celule de la șobolani Fisher. Testele urmăresc
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
purtătorilor; ― analiza citogenetică a tuturor descendenților masculi F1 înaintea selecției prin testarea fertilității. (a) Testarea fertilității Reducerea fertilității fiecărui mascul F1 poate fi stabilită prin observații asupra numărului puilor și/sau prin analizarea conținutului uterin la femelele gestante. Criteriile de determinare a fertilități normale sau reduse trebuie stabilite pentru rasa de șoareci folosită. Observații asupra numărului de pui dintr-o serie: Masculii F1 testați sunt puși în cuști individuale cu femele fie din același experiment, fie din colonie. Cuștile se verifică
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
uterin, după caz, ― metode citogenetice și detalii asupra analizelor microscopice, preferabil cu imagini, ― evaluarea statistică, ― discutarea rezultatelor, ― interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală: partea B. 4. REFERINȚE Vezi introducerea generală: partea B. PARTEA C: METODE PENTRU DETERMINAREA ECOTOXICITĂȚII INTRODUCERE GENERALĂ: PARTEA C Metodele de testare descrise mai jos se aplică pentru determinarea unor proprietăți ecotoxicologice enumerate în anexa VII și anexa VIII la Directiva 78/831/CEE. Declaranții trebuie să aibă în vedere că metodele pentru determinarea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
discutarea rezultatelor, ― interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală: partea B. 4. REFERINȚE Vezi introducerea generală: partea B. PARTEA C: METODE PENTRU DETERMINAREA ECOTOXICITĂȚII INTRODUCERE GENERALĂ: PARTEA C Metodele de testare descrise mai jos se aplică pentru determinarea unor proprietăți ecotoxicologice enumerate în anexa VII și anexa VIII la Directiva 78/831/CEE. Declaranții trebuie să aibă în vedere că metodele pentru determinarea următoarelor proprietăți, prevăzute în nivelul 1 al anexei VIII, nu sunt incluse în text: * studiu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
DETERMINAREA ECOTOXICITĂȚII INTRODUCERE GENERALĂ: PARTEA C Metodele de testare descrise mai jos se aplică pentru determinarea unor proprietăți ecotoxicologice enumerate în anexa VII și anexa VIII la Directiva 78/831/CEE. Declaranții trebuie să aibă în vedere că metodele pentru determinarea următoarelor proprietăți, prevăzute în nivelul 1 al anexei VIII, nu sunt incluse în text: * studiu de toxicitate de lungă durată la Daphnia magna, * test pe plante superioare, * studiu de toxicitate de lungă durată la pești, * test de acumulare la o
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
sunt incluse în text: * studiu de toxicitate de lungă durată la Daphnia magna, * test pe plante superioare, * studiu de toxicitate de lungă durată la pești, * test de acumulare la o specie. Atunci când vor fi definitivate metode de testare adecvate pentru determinarea acestor proprietăți, vor fi publicate sub forma unei noi adaptări la progresul tehnic. Între timp, declaranții trebuie să utilizeze metode corespunzătoare, recunoscute internațional, pe care le notifică autorității competente. TEST DE INHIBARE A ALGELOR 1. METODĂ 1.1. Introducere Scopul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
descrierea metodei. Această metodă este cel mai ușor de aplicat în cazul substanțelor solubile în apă, care, în condițiile de testare, prezintă o probabilitate mare de a rămâne în apă. Pentru substanțele cu o solubilitate limitată în mediul de testare, determinarea cantitativă CE50 ar putea fi imposibilă (a se vedea definițiile de mai jos). Metoda poate fi folosită pentru substanțele care nu interferează direct cu măsurătorile de creștere a algelor. Următoarele informații pot fi utile la efectuarea acestui test: * solubilitatea în
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]