KorAP: Find »[drukola/base=godeu & drukola/pos=noun]« with Poliqarp

<1 ...34 35 36 ...38 >

941 matches

Corola-website/Law/87589_a_88376

Elisa indirect. Diluții duble de antigen se titrează față de o diluție constantă (1/50) cu anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: PROCEDURA 1. Diluați antigen VBLA în PBS pe placa de microtitrare într-o serie de diluție dublă (50 μl/godeu) utilizând o pipetă multi-canal. 2. Incubați o oră la 37ș C pe un agitator orbital. 3. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 4. Adăugați 50 μl anticorp monoclonal 3-17-A3 (diluat 1/50) în fiecare godeu al plăcii de microtitrare

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
diluție dublă (50 μl/godeu) utilizând o pipetă multi-canal. 2. Incubați o oră la 37ș C pe un agitator orbital. 3. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 4. Adăugați 50 μl anticorp monoclonal 3-17-A3 (diluat 1/50) în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 5. Incubați o oră la 37șC utilizând un agitator orbital. 6. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 7. Adăugați 50 μl globulină de iepure anti-șoarece la peroxidaza de hrean, diluată la o concentrație pre-titrată optimală

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
de microtitrare. 5. Incubați o oră la 37șC utilizând un agitator orbital. 6. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 7. Adăugați 50 μl globulină de iepure anti-șoarece la peroxidaza de hrean, diluată la o concentrație pre-titrată optimală, în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 8. Incubați o oră la 37șC pe un agitator orbital. 9. Adăugați substrat și cromogen după descrierea anterioară. Opriți reacția după zece minute prin adăugarea a 1 M acid sulfuric (50 μl/godeu). La testul competitiv

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
optimală, în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 8. Incubați o oră la 37șC pe un agitator orbital. 9. Adăugați substrat și cromogen după descrierea anterioară. Opriți reacția după zece minute prin adăugarea a 1 M acid sulfuric (50 μl/godeu). La testul competitiv, anticorpul monoclonal trebuie să fie în exces, pentru aceasta fiind aleasă o diluție a antigenului care se încadrează în curba de titrare (nu în regiunea platoului) care dă aproximativ 0,8 OD după zece minute. Protocol pentru

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
de testare. PROCEDURA 1. 1% agaroză preparată în soluție tampon borat sau barbitol de sodiu, pH 8,5-9,0, se toarnă într-un vas petri la o adâncime minimă de 3,0 mm. 2. O structură de testare din șapte godeuri fără umiditate, fiecare cu diametrul de 5,0 mm, se decupează în agar. Structura are un godeu central și șase godeuri aranjate în jurul său în formă de cerc cu raza de 3 mm. 1 6 2 X 5 3 4

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
5-9,0, se toarnă într-un vas petri la o adâncime minimă de 3,0 mm. 2. O structură de testare din șapte godeuri fără umiditate, fiecare cu diametrul de 5,0 mm, se decupează în agar. Structura are un godeu central și șase godeuri aranjate în jurul său în formă de cerc cu raza de 3 mm. 1 6 2 X 5 3 4 3. Godeul central se umple cu antigen standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 se umplu cu

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
într-un vas petri la o adâncime minimă de 3,0 mm. 2. O structură de testare din șapte godeuri fără umiditate, fiecare cu diametrul de 5,0 mm, se decupează în agar. Structura are un godeu central și șase godeuri aranjate în jurul său în formă de cerc cu raza de 3 mm. 1 6 2 X 5 3 4 3. Godeul central se umple cu antigen standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 se umplu cu serul pozitiv cunoscut, straturile

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
umiditate, fiecare cu diametrul de 5,0 mm, se decupează în agar. Structura are un godeu central și șase godeuri aranjate în jurul său în formă de cerc cu raza de 3 mm. 1 6 2 X 5 3 4 3. Godeul central se umple cu antigen standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 se umplu cu serul pozitiv cunoscut, straturile 1, 3 și 5 se umplu cu seruri de testare. 4. Sistemul se incubează timp de 72 de ore la temperatura

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
mm, se decupează în agar. Structura are un godeu central și șase godeuri aranjate în jurul său în formă de cerc cu raza de 3 mm. 1 6 2 X 5 3 4 3. Godeul central se umple cu antigen standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 se umplu cu serul pozitiv cunoscut, straturile 1, 3 și 5 se umplu cu seruri de testare. 4. Sistemul se incubează timp de 72 de ore la temperatura camerei într-o cameră umedă închisă. INTERPRETAREA

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
Corola-website/Law/90665_a_91452

extras din culturi de celule infectate, diluat într-un tampon carbonat-bicarbonat cu pH 9,6. Se incubează plăcile ELISA timp de o noapte la 4șC. 1.1.1.2. Se spală plăcile de trei ori prin clătire și se golesc godeurile cu o soluție salină tamponată cu fosfat (SSTF) cu pH 7,2-7,4, apoi se usucă pe sugativă. 1.1.2. Godeuri de control 1.1.2.1. Se titrează serurile de control pozitive într-o serie de diluții din

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
noapte la 4șC. 1.1.1.2. Se spală plăcile de trei ori prin clătire și se golesc godeurile cu o soluție salină tamponată cu fosfat (SSTF) cu pH 7,2-7,4, apoi se usucă pe sugativă. 1.1.2. Godeuri de control 1.1.2.1. Se titrează serurile de control pozitive într-o serie de diluții din 2 în 2, de la 1/5 la 1/640, în coloana 1, într-un tampon de blocare SSTF cu conținut de 0

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
blocare SSTF cu conținut de 0,05% (v/v) de Tween-20, 5,0% (m/v) de lapte praf degresat (Cadbury's MarvelTM) și 1% (v/v) de ser bovin adult, pentru obținerea unui volum final de 50 µl pentru fiecare godeu. 1.1.2.2. Se adaugă 50 µl de ser de control negativ într-o diluție de 1/5 (10 µl ser + 40 µl tampon de blocare) în godeurile A și B din coloana 2. 1.1.2.3. Se

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
adult, pentru obținerea unui volum final de 50 µl pentru fiecare godeu. 1.1.2.2. Se adaugă 50 µl de ser de control negativ într-o diluție de 1/5 (10 µl ser + 40 µl tampon de blocare) în godeurile A și B din coloana 2. 1.1.2.3. Se adaugă 100 µl de tampon de blocare în godeurile C și D din coloana 2 (CONTROL CU BLANC). 1.1.2.4. Se adaugă 50 µl tampon de blocare

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
de ser de control negativ într-o diluție de 1/5 (10 µl ser + 40 µl tampon de blocare) în godeurile A și B din coloana 2. 1.1.2.3. Se adaugă 100 µl de tampon de blocare în godeurile C și D din coloana 2 (CONTROL CU BLANC). 1.1.2.4. Se adaugă 50 µl tampon de blocare în godeurile E; F, G și H din coloana 2 (control cu ser de cobai). 1.1.3. Metoda testului

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
și B din coloana 2. 1.1.2.3. Se adaugă 100 µl de tampon de blocare în godeurile C și D din coloana 2 (CONTROL CU BLANC). 1.1.2.4. Se adaugă 50 µl tampon de blocare în godeurile E; F, G și H din coloana 2 (control cu ser de cobai). 1.1.3. Metoda testului punctual 1.1.3.1. Se adaugă la tamponul de blocare o diluție de 1/5 din fiecare ser de testat pentru

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
F, G și H din coloana 2 (control cu ser de cobai). 1.1.3. Metoda testului punctual 1.1.3.1. Se adaugă la tamponul de blocare o diluție de 1/5 din fiecare ser de testat pentru dublarea godeurilor din coloanele de la 3 la 12 (seruri de 10 µl + 40 µl tampon de blocare). sau 1.1.4. Metoda de titrare a serului 1.1.4.1. Se prepară o serie de diluții din 2 în 2 din fiecare

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
1.1.4. Metoda de titrare a serului 1.1.4.1. Se prepară o serie de diluții din 2 în 2 din fiecare eșantion de testat (de la 1/5 la 1/640) într-un tampon de blocare în opt godeuri în fiecare dintre coloanele de la 3 la 12. apoi 1.1.5. Se adaugă 50 µl antiser de cobai, diluat în prealabil într-un tampon de blocare, în toate godeurile, cu excepția godeurilor de CONTROL CU BLANC din placa ELISA (toate

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
la 1/640) într-un tampon de blocare în opt godeuri în fiecare dintre coloanele de la 3 la 12. apoi 1.1.5. Se adaugă 50 µl antiser de cobai, diluat în prealabil într-un tampon de blocare, în toate godeurile, cu excepția godeurilor de CONTROL CU BLANC din placa ELISA (toate godeurile conțin în prezent un volum final de 100 µl). 1.1.5.1. Se incubează timp de 1 oră la 37ș într-un agitator rotativ. 1.1.5.2

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
640) într-un tampon de blocare în opt godeuri în fiecare dintre coloanele de la 3 la 12. apoi 1.1.5. Se adaugă 50 µl antiser de cobai, diluat în prealabil într-un tampon de blocare, în toate godeurile, cu excepția godeurilor de CONTROL CU BLANC din placa ELISA (toate godeurile conțin în prezent un volum final de 100 µl). 1.1.5.1. Se incubează timp de 1 oră la 37ș într-un agitator rotativ. 1.1.5.2. Se spală

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
în fiecare dintre coloanele de la 3 la 12. apoi 1.1.5. Se adaugă 50 µl antiser de cobai, diluat în prealabil într-un tampon de blocare, în toate godeurile, cu excepția godeurilor de CONTROL CU BLANC din placa ELISA (toate godeurile conțin în prezent un volum final de 100 µl). 1.1.5.1. Se incubează timp de 1 oră la 37ș într-un agitator rotativ. 1.1.5.2. Se spală plăcile de trei ori și se usucă în modul

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
1.5.1. Se incubează timp de 1 oră la 37ș într-un agitator rotativ. 1.1.5.2. Se spală plăcile de trei ori și se usucă în modul menționat anterior. 1.1.5.3. Se adaugă în fiecare godeu 50 µl ser de iepure anticobai conjugat cu peroxidază de hrean, diluat în prealabil într-un tampon de blocare. 1.1.5.4. Se incubează timp de 1 oră la 37șC într-un agitator rotativ. 1.1.5.5. Se

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
sterilă) chiar înainte de utilizare. Se adaugă un substrat (peroxid de hidrogen = H2O2), pentru obținerea unei concentrații finale de 0,05% (v/v) (1/2000 dintr-o soluție la 30% de H2O2). Se adaugă 50 µl din soluția OFD în fiecare godeu și se lasă plăcile pe suport timp de 10 minute la temperatura mediului ambiant. Se oprește reacția prin adăugarea a 50 µl de acid sulfuric 1M (H2SO4) în fiecare godeu. 1.1.7. Citire Citire prin spectrofotometrie la 492 nm

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
H2O2). Se adaugă 50 µl din soluția OFD în fiecare godeu și se lasă plăcile pe suport timp de 10 minute la temperatura mediului ambiant. Se oprește reacția prin adăugarea a 50 µl de acid sulfuric 1M (H2SO4) în fiecare godeu. 1.1.7. Citire Citire prin spectrofotometrie la 492 nm. 1.2. Exprimarea rezultatelor 1.2.1. Cu ajutorul unui program de calculator, se stabilesc valorile de densitate optică (DO) și procentajul de inhibiție (PI) în serurile de testare și serurile

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
1.2. Exprimarea rezultatelor 1.2.1. Cu ajutorul unui program de calculator, se stabilesc valorile de densitate optică (DO) și procentajul de inhibiție (PI) în serurile de testare și serurile de control, pe baza valorii medii înregistrate în cele patru godeuri care conțin serurile de cobai de control. Valorile DO și PI se utilizează pentru a stabili dacă testul a fost efectuat în limite acceptabile. Limitele superioare și inferioare ale serurilor de cobai de control se situează respectiv între valorile 1

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]
120 și 1/480). Plăcile care nu sunt conforme cu criteriile menționate anterior trebuie respinse. Totuși, dacă titrul serului de control pozitiv este mai mare de 1/480 și eșantioanele testate sunt totuși negative, eșantioanele considerate negative pot fi acceptate. Godeurile cu ser de control negativ dedublate și godeurile de control cu blanc dedublate ar trebui să prezinte valori PI cuprinse între + 25% și -25%, respectiv între +95% și +105%. Nerespectarea acestor limite nu are ca efect invalidarea rezultatelor plăcii, însă

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]