1,026 matches
-
timp de 30 de minute. Se îndepărtează anticorpul monoclonal și se spală lamele de trei ori cu 0,05 % Tween 20 în PBS. Se adaugă un conjugat anti-IgG de șoarece marcat FITC, diluat în PBS în fiecare cupulă și se incubează la 37 ± 4 șC, timp de 30 de minute. De notat: diluțiile diferitelor loturi de anticorp monoclonal și conjugat FITC se optimizează în fiecare laborator. Se îndepărtează anticorpul și se spală lamele de trei ori cu 0,05 % de Tween
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
într-un tub martor care conține o substanță de control corespunzătoare (400 μl apă distilată sau un homogenat de rinichi prelevat de la pești indemni de organisme patogene). Dacă este necesar, țesuturile se separă prin pipetări repetate. Tuburile sunt lăsate la incubat, la temperatura ambiantă, timp de 5 minute. Se adaugă 160 μm de cloroform în fiecare tub și se agită energic tuburile timp de 3 minute, apoi acestea sunt supuse unei centrifugări la o viteză de 13 000 rot/min, timp
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
în microtuburi de 1,5 ml. Atunci când concentrația unui eșantion în ARN este prea mică pentru a se putea utiliza 2 μg în reacția RT, se utilizează cea mai mare cantitate posibilă de ARN. Se lasă ARN-ul diluat la incubat, la o temperatură de 55-60 șC, timp de 10 minute. b) Tuburile cu ARN se așează pe gheață și se adaugă reactivii pentru RT, în scopul obținerii unor concentrații finale tampon de 1 x, 1 mM de dNTP, 100 ng
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
concentrații finale tampon de 1 x, 1 mM de dNTP, 100 ng de hexameri aleatorii, douăzeci de unități de inhibitor a RNazei și două sute de unități de MMLV-RT la un volum total de 20 μl. c) Se lasă tuburile la incubat, la o temperatură de 37 șC, timp de o oră. d) Se stochează ADNc, la o temperatură de 0-6 șC, atât timp cât este necesar și se efectuează un PCR cât mai repede posibil. IV.1.3. PCR a) Se adaugă 5
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
într-un gel de 1 % agaroză, în paralel cu marcatori de mărime și un control pozitiv și un control negativ pentru etapele RT și PCR. b) Se supune ADN-ul unei reacții Southern-blot pe o membrană și se lasă să incubeze oligonucleotidul marcat (5'-GGGAGTTGATCAGACATGCACTGA AGGTG-3') cu membrana, după etapele prehibridării. c) Sondele nefixate și fixate nespecific se îndepărtează prin spălarea membranei și apoi se vizualizează sonda fixată. d) Sonda fixată pe un fragment de 155 pb (și de 310 pb
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
ImmEdgeTM sau un echivalent și lama este lăsată să se usuce în aer. Apoi lamele se pun într-o soluție de blocare (lapte degresat de 6 % cu PBS cu un conținut de 0,2 % Tween 20) și se lasă la incubat printr-o agitare ușoară timp de 30 de minute la temperatura ambiantă. Fiecare lamă este scursă și apoi amplasată orizontal într-o cutie cu lame, prevăzută cu hârtie de ștergere umedă pentru menținerea unei atmosfere umede. V.2.2. Fiecare
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
pentru menținerea unei atmosfere umede. V.2.2. Fiecare calcul se acoperă într-o soluție cu anticorp monoclonal 3H6F8 la virusul AIS (sau un alt anticorp cu o specificitate și o eficacitate confirmate), se închide cutia și se lasă la incubat prin agitare timp de 60 de minute, la temperatura ambiantă. De regulă, anticorpul este diluat între 1:10 și 1:100 în lapte smântânit de 1 %, dar diluția reală se determină pentru fiecare lot. Lamele sunt spălate de trei ori
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
în PBS cu un conținut de 0,1 % Tween 20. Fiecare calcul se acoperă cu o soluție care conține conjugat de capră antișoarece marcat FITC, diluat în proporție de 1:100 în lapte degresat de 1 % și se lasă la incubat într-o atmosferă umedă timp de 60 de minute, la temperatura ambiantă. Lamele sunt spălate de trei ori timp de 2 minute în PBS cu un conținut de 0,1 % Tween 20. Fiecare lamă se acoperă cu o soluție de
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
că testul de discriminare nu poate fi utilizat în mod fiabil pentru testarea probelor de ser provenit de la porci sălbatici. 2. Testul de discriminare este un imuno-test cu anticorpi marcați enzimatic cu blocare în fază lichidă. Probele de testat sunt incubate în plăci de microtitrare preacoperite cu anticorpi monoclonali anti-Erns, precum și cu o cantitate definită de antigen Erns. Anticorpii specifici pentru Erns se fixează de cantitatea definită de antigen Erns în soluție și se formează un complex antigen/anticorp care nu
jrc5970as2003 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91142_a_91929]
-
provenite din aceste ouă trebuie să fie izolate de păsările sau de ouăle care nu au fost importate. Ca urmare, păsările trebuie să fie plasate în baterii din care prezența altor efective să fie exclusă, iar ouăle trebuie puse la incubat în incubatoare sau eclozionatoare separate. Prin derogare de la primul paragraf, statele membre pot să permită ca păsările sau ouăle importate să fie amestecate cu păsările sau ouăle deja prezente în baterie sau în incubator/eclozoar. În această situație, termenii menționați
jrc2943as1996 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88098_a_88885]
-
inactivat 59; iii) sunt vaccinate împotriva acestei boli cu un vaccin viu administrat cel târziu cu șaizeci de zile înainte de data de colectare a ouălor 60; b) dintr-un incubator unde se lucrează de așa manieră încât ouăle respective sunt incubate la ore și în spații care nu au nimic de a face cu orele și spațiile prevăzute pentru incubarea ouălor care nu corespund cerințelor de la lit. (a); 2) s-au respectat următoarele cerințe suplimentare, impuse de statul membru de destinație
jrc2943as1996 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88098_a_88885]
-
în vedere Tratatul de instituire a Comunității Europene, având în vedere Directiva Consiliului. 90/539/CEE din 15 octombrie 1990 cu privire la condițiile de sănătate animală care reglementează schimburile intracomunitare și importurile provenind din țări terțe de păsări și ouă pentru incubat 1, modificat ultima dată de Tratatul privind condițiile de aderare a Regatului Norvegiei, Republicii Austria, Republicii Finlanda și Regatului Suediei și adaptările tratatelor ce stau la baza Uniunii Europene anexa 1, titlul V, litera E, partea întâi, capitolul 2, punctul
jrc2463as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87617_a_88404]
-
PROCEDURA 1. Diluați antigenul VBLA la concentrația pre-titrată în PBS, sonicați scurt pentru dispersarea virusului agregat (dacă nu aveți sonicator, pipetați cu putere) și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii Elisa. Loviți ușor marginile plăcii pentru dispersarea antigenului. 2. Incubați la 37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați plăcile de trei ori prin inundare și goliți godeurile cu PBS nesteril și uscați pe hârtie absorbantă. 3. Adăugați 50 μl tampon de blocare pentru fiecare godeu
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
pipetă multi-canal. Nu adăugați ser la martorul orb sau la martorul ACM. 4. Imediat după adăugarea serurilor de testare, diluați ACM în tamponul de blocare (la diluția pre-titrată) și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii, cu excepția martorului orb. 5. Incubați la 37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați de trei ori cu PBS și uscați. 6. Diluați concentratul de globulină de iepure anti-șoarece la 1/5 000 în tamponul de blocare și adăugați 50 μl
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
60 de minute pe un agitator orbital. Spălați de trei ori cu PBS și uscați. 6. Diluați concentratul de globulină de iepure anti-șoarece la 1/5 000 în tamponul de blocare și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii. 7. Incubați la 37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați de trei ori cu PBS și uscați. 8. Dezghețați OPD și, imediat înainte de utilizare, adăugați 12 μl peroxid de hidrogen 30% la fiecare 25 ml OPD. Adăugați
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
scăzută perceptibilă cu ochiul. PREPARAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA 1. Spălați 10 șiruri de celule confluente BHK-21 de trei ori cu mediu Eagle fără ser și infectați cu serotipul 1 al virusului bolii limbii albastre în mediul Eagle fără ser. 2. Incubați la 37ș C și examinați zilnic pentru efectul citopatic (ecp). 3. Când ecp este evident în 80- 90% din stratul celular al fiecărui șir, recoltați virusul prin scuturarea celulelor rămase lipite pe sticlă. 4. Centrifugați la 2 000- 3 000
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
se titrează față de o diluție constantă (1/50) cu anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: PROCEDURA 1. Diluați antigen VBLA în PBS pe placa de microtitrare într-o serie de diluție dublă (50 μl/godeu) utilizând o pipetă multi-canal. 2. Incubați o oră la 37ș C pe un agitator orbital. 3. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 4. Adăugați 50 μl anticorp monoclonal 3-17-A3 (diluat 1/50) în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 5. Incubați o oră la 37șC
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
o pipetă multi-canal. 2. Incubați o oră la 37ș C pe un agitator orbital. 3. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 4. Adăugați 50 μl anticorp monoclonal 3-17-A3 (diluat 1/50) în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 5. Incubați o oră la 37șC utilizând un agitator orbital. 6. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 7. Adăugați 50 μl globulină de iepure anti-șoarece la peroxidaza de hrean, diluată la o concentrație pre-titrată optimală, în fiecare godeu al plăcii de
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
la 37șC utilizând un agitator orbital. 6. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 7. Adăugați 50 μl globulină de iepure anti-șoarece la peroxidaza de hrean, diluată la o concentrație pre-titrată optimală, în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 8. Incubați o oră la 37șC pe un agitator orbital. 9. Adăugați substrat și cromogen după descrierea anterioară. Opriți reacția după zece minute prin adăugarea a 1 M acid sulfuric (50 μl/godeu). La testul competitiv, anticorpul monoclonal trebuie să fie în
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
6 2 X 5 3 4 3. Godeul central se umple cu antigen standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 se umplu cu serul pozitiv cunoscut, straturile 1, 3 și 5 se umplu cu seruri de testare. 4. Sistemul se incubează timp de 72 de ore la temperatura camerei într-o cameră umedă închisă. INTERPRETAREA Serul de testare este pozitiv dacă formează o linie specifică de precipitare cu antigenul și dacă formează o linie completă de identitate cu serul martor. Serul
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
Testele pozitive false pot să apară de asemenea din omologie de secvențe cu alte organisme. Din aceste motive, testul direct PCR nu poate fi folosit ca test unic de triere. 7 Testul de îmbogățire Eșantioanele de extract final de cartof incubat în mediu nutritiv semi-selectiv, cum este mediul nutrivitv modificat SMSA, permite multiplicarea Ralstonia solanacearum. Poate mult mai important este faptul că, de asemenea, diluează potențialii inhibitori ai testelor ELISA sau PCR. Astfel, Ralstonia solanacearum în mediu nutritiv îmbogățit poate fi
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Se lasă la uscat. Se trece rapid partea inferioară a lamelei de câteva ori prin flacără până la fixarea frotiului. Testul cu albastru de Nil 1. Frotiul fixat se scufundă într-o soluție apoasă 1% de albastru de Nil A. Se incubează 10 minute la 55° C. 2. Se usucă soluția colorantă. Se spală rapid cu apă de la robinet. Excesul de apă se îndepărtează cu hârtie de mătase. 3. Frotiul se scufundă într-o soluție apoasă 8% de acid acetic. Se incubează
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
incubează 10 minute la 55° C. 2. Se usucă soluția colorantă. Se spală rapid cu apă de la robinet. Excesul de apă se îndepărtează cu hârtie de mătase. 3. Frotiul se scufundă într-o soluție apoasă 8% de acid acetic. Se incubează un minut la temperatura camerei. 4. Se spală ușor cu apă de la robinet. Se usucă cu hârtie de mătase. 5. Se umezește cu o picătură de apă. Se aplică o lamelă de acoperire. 6. Se examinează frotiul colorat la un
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
a avea certitudinea că granulele sunt intracelulare și că morfologia celulei este tipică pentru Ralstonia solanacearum. Testul cu negru de Sudan 1. Frotiul fixat se scufundă într-o soluție de 0,3% negru de Sudan B în 70% etanol. Se incubează 10 minute la temperatura camerei. 2. Se uscă soluția colorantă. Se spală rapid cu apă de la robinet. Se îndepărtează excesul de apă. Se îndepărtează excesul de apă cu hârtie de mătase. 3. Frotiul se înmoaie puțin în xilen. Se usucă
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
de diluare galvano-plastică corespunzătoare. Dacă se consideră util se prepară plăci separate din fiecare mediu utilizat cu o cultură de celule în suspensie diluată din sușa virulentă biovar 2/rasa 3 de Ralstonia solanacearum drept control pozitiv. 3.4. Se incubează plăcile timp de trei zile la 28° C. Incubarea poate fi prelungită la șase zile dacă este o creștere lentă, dar coloniile din plăcile SMSA devin deseori atipice și mor. În mediile nutritive generale, izolările virulente de Ralstonia solanacearum dezvoltă
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]