941 matches
-
conforme cu criteriile menționate anterior trebuie respinse. Totuși, dacă titrul serului de control pozitiv este mai mare de 1/480 și eșantioanele testate sunt totuși negative, eșantioanele considerate negative pot fi acceptate. Godeurile cu ser de control negativ dedublate și godeurile de control cu blanc dedublate ar trebui să prezinte valori PI cuprinse între + 25% și -25%, respectiv între +95% și +105%. Nerespectarea acestor limite nu are ca efect invalidarea rezultatelor plăcii, însă sugerează că este în curs formarea unei culori
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
testate este de 50% (PI 50%). Eșantioanele care prezintă valori PI mai mari de 50% sunt considerate pozitive. Eșantioanele care prezintă valori PI mai mici de 50% sunt considerate negative. Eșantioanele care prezintă valori PI superioare sau inferioare pragului pentru godeurile dedublate sunt considerate inexacte. Aceste eșantioane pot fi testate din nou printr-un test punctual sau prin titrare. Eșantioanele pozitive pot fi și ele titrate pentru a furniza o indicație cu privire la gradul de pozitivitate. Analiză punctuală 1 2 3 4
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
spălare). Se scutură ușor plăcile pe un material absorbant pentru a îndepărta orice urmă de clătire. 2.1.1.3. Se saturează plăcile cu o SSTF +5% (m/v) de lapte praf degresat (lapte NestléTM), câte 200 µl în fiecare godeu timp de o oră la 37°C. 2.1.1.4. Se înlătură soluția de saturare și se scutură ușor plăcile pe un material absorbant. 2.1.2. Eșantioane 2.1.2.1. Serurile de testat și serurile pozitive și
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
2.1. Serurile de testat și serurile pozitive și negative de control se diluează la 1/25 într-o SSTF +5% (m/v) de lapte praf degresat + 0,05% (v/v) Tween -20; se aplică apoi 100 µl în fiecare godeu. Se incubează timp de 1 oră la 37°C. Pentru titrare, se realizează serii de diluție din 2 în 2 începând de la 1/25 (100 µl/godeu), prin utilizarea unei coloane a plăcii pentru fiecare ser; se procedează la fel
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
0,05% (v/v) Tween -20; se aplică apoi 100 µl în fiecare godeu. Se incubează timp de 1 oră la 37°C. Pentru titrare, se realizează serii de diluție din 2 în 2 începând de la 1/25 (100 µl/godeu), prin utilizarea unei coloane a plăcii pentru fiecare ser; se procedează la fel pentru controalele pozitiv și negativ. Se incubează timp de 1 oră la 37°C. 2.1.2.2. Se clătesc plăcile conform descrierii din etapa 2.1
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
controalele pozitiv și negativ. Se incubează timp de 1 oră la 37°C. 2.1.2.2. Se clătesc plăcile conform descrierii din etapa 2.1.1.2. 2.1.3. Conjugat 2.1.3.1. Se depun 100 µl/ godeu de anticorpi antical conjugați cu peroxidază de hrean; anticorpii se diluează într-o SSTF + 5% lapte degresat + 0,05% Tween-20 cu pH 7,2. Se incubează timp de 1 oră la 37°C. 2.1.3.2. Se clătesc plăcile
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
pH 7,2. Se incubează timp de 1 oră la 37°C. 2.1.3.2. Se clătesc plăcile conform descrierii din etapa 2.1.1.2. 2.1.4. Cromogen/substrat 2.1.4.1. Se adaugă 200 µl/godeu de soluție de cromogen/substrat [10 ml de 80,6 mM de DMAB (dimetilaminobenzaldehidă) + 10 ml de 1,56 mM de MBTH (3-metil-2-benzotiazolină de hidroclorură de hidrazon) + 5 µl de H2O2]. Se blochează după aproximativ 5-10 minute (înainte să înceapă
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
1.2. Eșantioane și controale 3.1.2.1. Cernere: se diluează serurile de testat și serurile de control în proporție de 1 la 10 direct pe placă în SSTF pentru obținerea unui volum final de 100 µl în fiecare godeu. Se incubează timp de o oră la 37șC. 3.1.2.2. Titrare: se pregătește o serie de diluții din 2 în 2 de seruri de testat și de control pozitive (100 µl în fiecare godeu) de la 1/10 la
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
100 µl în fiecare godeu. Se incubează timp de o oră la 37șC. 3.1.2.2. Titrare: se pregătește o serie de diluții din 2 în 2 de seruri de testat și de control pozitive (100 µl în fiecare godeu) de la 1/10 la 1/1280 care se depun în opt godeuri. Controlul negativ este testat la o diluție de 1/10. 3.1.3. Conjugat Se adaugă 50 µl de anticorp monoclonal diluat în prealabil (anticorp monoclonal conjugat cu
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
37șC. 3.1.2.2. Titrare: se pregătește o serie de diluții din 2 în 2 de seruri de testat și de control pozitive (100 µl în fiecare godeu) de la 1/10 la 1/1280 care se depun în opt godeuri. Controlul negativ este testat la o diluție de 1/10. 3.1.3. Conjugat Se adaugă 50 µl de anticorp monoclonal diluat în prealabil (anticorp monoclonal conjugat cu peroxidază de hrean) în fiecare godeu și se amestecă ușor pentru a
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
1280 care se depun în opt godeuri. Controlul negativ este testat la o diluție de 1/10. 3.1.3. Conjugat Se adaugă 50 µl de anticorp monoclonal diluat în prealabil (anticorp monoclonal conjugat cu peroxidază de hrean) în fiecare godeu și se amestecă ușor pentru a garanta omogeneitatea. Se incubează timp de 30 de minute la 37șC. 3.1.4. Se spală plăcile de 5 ori cu SSTF și se usucă pe sugativă conform descrierii anterioare. 3.1.5. Cromogen
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
a garanta omogeneitatea. Se incubează timp de 30 de minute la 37șC. 3.1.4. Se spală plăcile de 5 ori cu SSTF și se usucă pe sugativă conform descrierii anterioare. 3.1.5. Cromogen/substrat Se adaugă în fiecare godeu 100 µl din soluția următoare de cromogen/substrat: 1 ml de ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic) cu 5 mg/ml + 9 ml de tampon de substrat (0,1 M de tampon de fosfat-citrat cu pH 4 cu conținut de
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
de tampon de substrat (0,1 M de tampon de fosfat-citrat cu pH 4 cu conținut de 0,03% de H2O2), apoi se incubează timp de 10 minute la temperatura mediului ambiant. Evoluția culorii se oprește prin adăugarea în fiecare godeu a 100 µl de DSS (dodecilsulfat de sodiu) la 2% (m/v). 3.1.6. Citire Se citește la 450 nm într-un cititor ELISA: 3.2. Interpretarea rezultatelor 3.2.1. Valabilitatea testului Testul este valabil atunci când densitatea optică
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
OF THE TABLE FROM THE ORIGINAL]*** Controale Seruri de testare Apendicele 2: Schemă de titrare a serului (10 seruri/placă) ***[PLEASE INSERT THE REST OF THE TABLE FROM THE ORIGINAL]*** Controale Seruri de testare Protocolul de testare: Control conjugat (Cc): Godeurile 1A și 1B corespund controlului de blank ce cuprinde antigenul BTV și un conjugat. Se poate utiliza pentru a etalona cititorul ELISA. Control AcM (Cm): Coloanele 1 și 2, rândurile G și H corespund controlului anticorpului monoclonal ce cuprinde antigenul
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
blank ce cuprinde antigenul BTV și un conjugat. Se poate utiliza pentru a etalona cititorul ELISA. Control AcM (Cm): Coloanele 1 și 2, rândurile G și H corespund controlului anticorpului monoclonal ce cuprinde antigenul BTV, anticorpul monoclonal și conjugatul. Aceste godeuri reprezintă culoarea cea mai pronunțată. Media valorilor densității optice ale acestui control reprezintă valoarea de inhibiție 0 %. Control pozitiv (C++, C+): Coloanele 1 și 2, rândurile C, D, E și F. Aceste godeuri cuprind antigenul BTV, antiserul puternic pozitiv și
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
antigenul BTV, anticorpul monoclonal și conjugatul. Aceste godeuri reprezintă culoarea cea mai pronunțată. Media valorilor densității optice ale acestui control reprezintă valoarea de inhibiție 0 %. Control pozitiv (C++, C+): Coloanele 1 și 2, rândurile C, D, E și F. Aceste godeuri cuprind antigenul BTV, antiserul puternic pozitiv și, respectiv, slab pozitiv, AcM și conjugatul. Control negativ (C-) Godeurile 2A și 2B corespund controalelor negative, care cuprind antigenul BTV, antiserul BTV negativ, AcM și conjugatul. Ser de testare: Pentru studii serologice la
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
ale acestui control reprezintă valoarea de inhibiție 0 %. Control pozitiv (C++, C+): Coloanele 1 și 2, rândurile C, D, E și F. Aceste godeuri cuprind antigenul BTV, antiserul puternic pozitiv și, respectiv, slab pozitiv, AcM și conjugatul. Control negativ (C-) Godeurile 2A și 2B corespund controalelor negative, care cuprind antigenul BTV, antiserul BTV negativ, AcM și conjugatul. Ser de testare: Pentru studii serologice la scară mare și teste de control rapide, serurile se pot testa într-o diluție unică 1:5
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
diluează antigenul BTV la concentrația pretitrată în PBS, se agită energic cu ajutorul unui aparat cu ultrasunete pentru a dispersa agregatele de virus (în absența unui aparat cu ultrasunete, se agită puternic cu pipeta) și se adaugă 50 µl în toate godeurile plăcii ELISA. Se loveste usor placa de masa pentru a dispersa antigenul. 2. Se incubează pentru 60 de minute la 37 °C într-un incubator-agitator. Se spală plăcile de trei ori prin umplearea și se golirea godeurilor cu PBS nesteril
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
µl în toate godeurile plăcii ELISA. Se loveste usor placa de masa pentru a dispersa antigenul. 2. Se incubează pentru 60 de minute la 37 °C într-un incubator-agitator. Se spală plăcile de trei ori prin umplearea și se golirea godeurilor cu PBS nesteril și se usucă cu hârtie sugativă. 3. Godeurile de control: Se adaugă 100 µl tampon de blocare în godeurile Cc. Se adaugă 50 µl de ser de control pozitiv și negativ, într-o diluție de 1:5
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
masa pentru a dispersa antigenul. 2. Se incubează pentru 60 de minute la 37 °C într-un incubator-agitator. Se spală plăcile de trei ori prin umplearea și se golirea godeurilor cu PBS nesteril și se usucă cu hârtie sugativă. 3. Godeurile de control: Se adaugă 100 µl tampon de blocare în godeurile Cc. Se adaugă 50 µl de ser de control pozitiv și negativ, într-o diluție de 1:5 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), în
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
minute la 37 °C într-un incubator-agitator. Se spală plăcile de trei ori prin umplearea și se golirea godeurilor cu PBS nesteril și se usucă cu hârtie sugativă. 3. Godeurile de control: Se adaugă 100 µl tampon de blocare în godeurile Cc. Se adaugă 50 µl de ser de control pozitiv și negativ, într-o diluție de 1:5 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), în godeurile C-, C + și, respectiv, C++. Se adaugă 50 µl de
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
de control: Se adaugă 100 µl tampon de blocare în godeurile Cc. Se adaugă 50 µl de ser de control pozitiv și negativ, într-o diluție de 1:5 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), în godeurile C-, C + și, respectiv, C++. Se adaugă 50 µl de tampon de blocare în godeurile de control AcM. Metoda de titrare unică: Se adaugă fiecare ser de testare in dilutie de 1:5 cu tampon de blocare, in duplicat, in
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
µl de ser de control pozitiv și negativ, într-o diluție de 1:5 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), în godeurile C-, C + și, respectiv, C++. Se adaugă 50 µl de tampon de blocare în godeurile de control AcM. Metoda de titrare unică: Se adaugă fiecare ser de testare in dilutie de 1:5 cu tampon de blocare, in duplicat, in godeurile coloanelor de la 3 la 12 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
C-, C + și, respectiv, C++. Se adaugă 50 µl de tampon de blocare în godeurile de control AcM. Metoda de titrare unică: Se adaugă fiecare ser de testare in dilutie de 1:5 cu tampon de blocare, in duplicat, in godeurile coloanelor de la 3 la 12 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), conform schemei anterioare. sau Metoda de titrare a serului: Se prepară o serie de diluții în progresie geometrică ale fiecărui eșantion de testare (de la 1
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
tampon de blocare), conform schemei anterioare. sau Metoda de titrare a serului: Se prepară o serie de diluții în progresie geometrică ale fiecărui eșantion de testare (de la 1:5 la 1:640) într-un tampon de blocare in cele opt godeuri ale fiecărei coloane de la 3 la 12. 4. Imediat după adăugarea serului de testare, se diluează AcM la 1:100 într-un tampon de blocare și se adaugă 50 µl în toate godeurile plăcii, cu excepția blank-ului. 5. Se incubează pentru
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]