1,026 matches
-
Eșantioane și controale 3.1.2.1. Cernere: se diluează serurile de testat și serurile de control în proporție de 1 la 10 direct pe placă în SSTF pentru obținerea unui volum final de 100 µl în fiecare godeu. Se incubează timp de o oră la 37șC. 3.1.2.2. Titrare: se pregătește o serie de diluții din 2 în 2 de seruri de testat și de control pozitive (100 µl în fiecare godeu) de la 1/10 la 1/1280
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
testat la o diluție de 1/10. 3.1.3. Conjugat Se adaugă 50 µl de anticorp monoclonal diluat în prealabil (anticorp monoclonal conjugat cu peroxidază de hrean) în fiecare godeu și se amestecă ușor pentru a garanta omogeneitatea. Se incubează timp de 30 de minute la 37șC. 3.1.4. Se spală plăcile de 5 ori cu SSTF și se usucă pe sugativă conform descrierii anterioare. 3.1.5. Cromogen/substrat Se adaugă în fiecare godeu 100 µl din soluția
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
cromogen/substrat: 1 ml de ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic) cu 5 mg/ml + 9 ml de tampon de substrat (0,1 M de tampon de fosfat-citrat cu pH 4 cu conținut de 0,03% de H2O2), apoi se incubează timp de 10 minute la temperatura mediului ambiant. Evoluția culorii se oprește prin adăugarea în fiecare godeu a 100 µl de DSS (dodecilsulfat de sodiu) la 2% (m/v). 3.1.6. Citire Se citește la 450 nm într-un
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
și se poate efectua un examen virusologic în decurs de patrusprezece zile. Inainte de a inocula celulele, se amestecă lichidul de suprafață în proporție egală cu un amestec de antiseruri împotriva serotipurilor indigene ale virusului NPI, diluate corespunzător, și se incubează astfel cel puțin timp de o oră la 15°C sau cel mult timp de 18 ore la 4°C. Proporția de antiser trebuie să fie de cel puțin 1/2 000 într-un test de neutralizare pe porțiuni la
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
celule, ceea ce corespunde unei cupule într-o placă celulară cu 24 de cupule. Se recomandă utilizarea plăcilor de cultură celulară, dar se admit și alte suporturi care prezintă o suprafață de creștere similară sau superioară. 3. Incubarea culturilor celulare Se incubează culturile celulare inoculate la 15°C timp de șapte până la zece zile. In cazul în care culoarea mediului de cultură celulară se modifică de la roșu la galben, indicând o acidifiere a mediului, se ajustează pH-ul cu ajutorul unei soluții sterile
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
cultura primară direct într-o cupulă cu culturi celulare proaspete (sub-culturi de cupulă la cupulă). Inocularea poate fi precedată de o preincubare a diluțiilor cu antiser împotriva virusului NPI la o diluție corespunzătoare, după descrierea din partea I II 3. Se incubează apoi culturile inoculate timp de șapte până la zece zile la 15°C, ținându-se cont de dispozițiile din partea I III 4. Dacă se produce un ECP toxic în cursul primelor trei zile după incubație, se poate realiza o sub-cultură în
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
15°C, ținându-se cont de dispozițiile din partea I III 4. Dacă se produce un ECP toxic în cursul primelor trei zile după incubație, se poate realiza o sub-cultură în acest stadiu, dar în acest caz celulele trebuie să fie incubate timp de șapte zile și supuse unei noi sub-culturi urmate de alte șapte zile de incubare. Dacă se produce un ECP toxic după trei zile, celulele pot fi lăsate o dată și incubate pentru a se ajunge la numărul total de
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
dar în acest caz celulele trebuie să fie incubate timp de șapte zile și supuse unei noi sub-culturi urmate de alte șapte zile de incubare. Dacă se produce un ECP toxic după trei zile, celulele pot fi lăsate o dată și incubate pentru a se ajunge la numărul total de patrusprezece zile de la inocularea inițială. Nu trebuie să existe semne de toxicitate în cursul ultimelor șapte zile de incubare. Dacă se produce o contaminare bacteriană în ciuda tratamentului cu antibiotice, sub-cultura trebuie să
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
cu grad scăzut de absorbție a proteinelor, apoi se diluează lichidul de suprafață la 1/100 și 1:10 000 într-un mediu de cultură celulară. Se amestecă părți alicote din cele două diluții ale lichidului de suprafață și se incubează separat timp de 60 de minute la 15°C în părți egale cu următorii reactivi: - ser conținând un grup de anticorpi specifici împotriva virusului SHV la o diluție de 1:50 (vol:vol) (1), - ser conținând un grup de anticorpi
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
1:50 (vol:vol) (1), - mediu de cultură singur (control pozitiv). Pentru fiecare din amestecurile de suprafață viral-ser, se inoculează cel puțin două culturi celulare cu 50 de μl de amestec de lichid de suprafață și de ser și se incubează la 15°C. Se controlează apariția unui ECP în conformitate cu partea I III 4. Anumite tulpini ale virusului SHV nu reacționează la testele de neutralizare. Aceste tulpini izolate trebuie identificate prin tehnicile IF sau ELISA. Se pot aplica și alte teste
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
lor ridicate la suprafețele de sticlă, dar se pot folosi și alte tulpini celulare, ca BF-2, RTG-2 sau FHM. Atunci când celulele s-au depus pe suprafața de sticlă (aproximativ la o oră după însămânțare) sau atunci când aceste culturi au fost incubate timp de 24 de ore maximum, se inoculează virusul care trebuie identificat. Se inoculează patru culturi cu un raport volum la volum de 1:10 și patru culturi cu un raport de 1:1000. Acestea se incubează apoi la 15
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
culturi au fost incubate timp de 24 de ore maximum, se inoculează virusul care trebuie identificat. Se inoculează patru culturi cu un raport volum la volum de 1:10 și patru culturi cu un raport de 1:1000. Acestea se incubează apoi la 15°C timp de 20 - 30 de ore. După incubare, se clătesc de două ori culturile în mediu Eagle's MEM fără ser, se fixează cu o soluție de acetonă înghețată de 80% și se efectuează reacția IF
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
cu antiseruri de diagnostic Suspensia de organe tratată cu antibiotice sau trecută printr-un filtru cu membrană este diluată la 1:10 și la 1:1 000 într-un mediu de cultură celulară iar părți alicote se amestecă și se incubează timp de 60 de minute la 15°C cu părți egale din reactivii enumerați în partea I IV 2. III.1. Culturi celulare și medii A se vedea partea I III 1. III.2. Inocularea culturilor celulare A se vedea
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
4.1.3. Prepararea culturilor Liniile și sușele celulare stabilite: celulele se prepară plecând de la culturile de rezervă, se însămânțează în mediul de cultură într-o anumită densitate, astfel încât culturile să nu ajungă la confluență înainte de momentul recoltării, apoi se incubează la 37oC. Limfocitele: sângele complet, tratat cu un anticoagulant (de ex. heparina), sau limfocitele separate obținute de la subiecți sănătoși se adaugă la mediul de cultură ce conține un mitogen (de ex. fitohemaglutinină) și se incubează la 37oC. 1.4.1
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
înainte de momentul recoltării, apoi se incubează la 37oC. Limfocitele: sângele complet, tratat cu un anticoagulant (de ex. heparina), sau limfocitele separate obținute de la subiecți sănătoși se adaugă la mediul de cultură ce conține un mitogen (de ex. fitohemaglutinină) și se incubează la 37oC. 1.4.1.4. Activarea metabolică Se recomandă ca expunerea celulelor la substanța de testat să se realizeze atât în prezența, cât și în absența sistemului de activare metabolică corespunzător. Sistemul cel mai frecvent utilizat este o fracție
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
sistem exogen de activare metabolică. În procedeul de încorporare prin depunere pe o placă, suspensiile menționate se amestecă cu o geloză de acoperire (agar) și se depun imediat pe un mediu minimal. În procedeul cu preincubare, amestecul de tratare se incubează și apoi se amestecă cu geloza de acoperire înaintea depunerii pe un mediu minim. Pentru ambele metode, după două sau trei zile de incubare, coloniile care produc inversarea se numără și numărul obținut se compară cu cel al coloniilor spontane
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
testul. Substanțele în stare gazoasă sau cele volatile ar trebui să fie testate în condiții corespunzătoare, de ex. în vase închise ermetic (12) (14) (15) (16). 1.5.4. Incubarea Toată plăcile dintr-un test dat ar trebui să fie incubate la 37oC timp de 48-72 de ore. După incubare, se procedează la numărătoarea coloniilor care provoacă reversia de pe fiecare placă. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Datele ar trebui să se prezinte sub forma numărului de colonii care provoacă reversia
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
a celulelor în perioada de manifestare și capacitatea celulelor, atât mutante, cât și nemutante, de a forma colonii. 1.4.1.3. Prepararea culturilor Celulele se obțin plecând de la culturile de rezervă, se însămânțează în mediul de cultură și se incubează la 37oC. Înainte de a fi utilizate în prezentul test, este necesară curățarea culturilor de celulele mutante preexistente. 1.4.1.4. Activarea metabolică Se recomandă ca expunerea celulelor la substanța de testat să se realizeze atât în prezența, cât și
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
supun în general incubării într-un mediu, ce conține 3H-TdR, pentru o perioadă de timp corespunzătoare, de ex. trei până la opt ore. La încheierea perioadei de incubare, ar trebui ca mediul să fie îndepărtat de pe celule, care pot să fie incubate apoi într-un mediu, ce conține timidină nemarcată în exces, pentru diminuarea radioactivității neîncorporate ("cold chase"). Celulele sunt apoi spălate, fixate și uscate. Pentru perioade de incubare mai lungi, s-ar putea ca procedeul "cold chase" să nu fie necesar
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
diametrul intern 5,0 cm) pline cu plăci de geloză (în conformitate cu ISO, versiunea actuală) și vase umplute cu geloză de glucoză biliară roșu-violet (geloză VRBG în conformitate cu ISO, versiunea actuală), care se presează pe fiecare zonă de eșantionare și apoi de incubează. Suprafața de contact a fiecărei plăci este de 20 cm2. După preparare, geloza are o durată de viață la depozitare de aproximativ trei luni, dacă este păstrată la temperaturi între 2 și 4 oC în flacoane închise. Imediat înainte de prepararea
jrc4974as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90142_a_90929]
-
astfel de ouă se păstrează separat de cele neimportate și de alte păsări de curte. În consecință, ratitele se păstrează în adăposturi în care nu sunt prezente alte cârduri de ratite sau de alte păsări de curte, iar ouăle trebuie incubate în incubatoare și eclozoare separate. (4) Prin derogare de la prevederile alin. (3), statele membre pot autoriza amestecarea ratitelor și ouălor importate cu alte păsări de curte sau respectiv ouă care sunt deja prezente în adăpost sau incubator/eclozoar. În această
jrc5039as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90207_a_90994]
-
obține în condiții clinice ) , azacitidina nu are efect inductor asupra izoenzimelor citocromului P450 ( CYP ) 1A2 , 2C19 sau 3A4 sau 3A5 . Într- un studiu care a evaluat inhibarea unei serii de izoenzime P450 ( CYP 1A2 , 2C9 , 2C19 , 2D6 , 2E1 și 3A4 ) incubate cu azacitidină 100 µM , valorile CI50 nu au putut fi determinate . În consecință , inhibarea enzimatică de către azacitidină nu este probabilă la concentrații plasmatice care pot fi obținute în condiții clinice . Nu s- a studiat potențialul inhibitor asupra CYP2B6 sau 2C8
Ro_1139 () [Corola-website/Science/291898_a_293227]
-
DECIZIA COMISIEI din 22 iunie 1995 de stabilire a listei țărilor terțe din care statele membre autorizează importurile de păsări vii și de ouă pentru incubat (95/233/CE) COMISIA COMUNITĂȚILOR EUROPENE, având în vedere Tratatul de instituire a Comunității Europene, având în vedere Directiva Consiliului 90/539/CEE din 15 octombrie 1990 privind condițiile de sănătate animală care reglementează comerțul intra-comunitar și importurile de
jrc2672as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87826_a_88613]
-
condițiile specifice de sănătate animală, cerințele în materie de sănătate publică, planurile de depistare a reziduurilor și certificarea, trebuie luate în considerare pentru a se obține o armonizare completă a condițiilor de import de păsări vii și de ouă pentru incubat; întrucât este justificată stabilirea unei liste separate de țări terțe pentru importurile de ratite, date fiind diferențele biologice între aceste specii și alte păsări; întrucât este bine să se impună o perioadă de carantină după importul de astfel de păsări
jrc2672as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87826_a_88613]
-
în materie de sănătate animală în vigoare la 1 ianuarie 1995; întrucât măsurile prevăzute de prezenta decizie sunt în conformitate cu avizul comitetului veterinar permanent, ADOPTĂ PREZENTA DECIZIE: Articolul 1 1. Statele membre autorizează importul de păsări vii și de ouă pentru incubat conform listei din anexa I. Lista din anexa I nu se aplică la importul de ratite sau de ouă pentru incubat ale acestei specii. 2. Statele membre autorizează importurile de ratite și de ouă pentru incubat ale acestei specii conform
jrc2672as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87826_a_88613]