1,102 matches
-
a epoetinei alfa a fost demonstrată la diferite modele animale in vivo ( șobolani normali și cu anemie , șoareci cu policitemie ) . După administrarea epoetinei alfa , numărul eritrocitelor , valorile Hb și numărul reticulocitelor au crescut , precum și proporția de încorporare a 59Fe . După incubarea cu epoetină alfa , a fost evidențiată in vitro o încorporare crescută a 3H- timidinei în celulele splenice nucleate eritroide ( culturi celulare de splină de șoarece ) . Cu ajutorul culturilor celulare de la nivelul măduvei osoase umane , se poate demonstra că epoetina alfa stimulează
Ro_313 () [Corola-website/Science/291072_a_292401]
-
a epoetinei alfa a fost demonstrată la diferite modele animale in vivo ( șobolani normali și cu anemie , șoareci cu policitemie ) . După administrarea epoetinei alfa , numărul eritrocitelor , valorile Hb și numărul reticulocitelor au crescut , precum și proporția de încorporare a 59Fe . După incubarea cu epoetină alfa , a fost evidențiată in vitro o încorporare crescută a 3H- timidinei în celulele splenice nucleate eritroide ( culturi celulare de splină de șoarece ) . Cu ajutorul culturilor celulare de la nivelul măduvei osoase umane , se poate demonstra că epoetina alfa stimulează
Ro_313 () [Corola-website/Science/291072_a_292401]
-
a epoetinei alfa a fost demonstrată la diferite modele animale in vivo ( șobolani normali și cu anemie , șoareci cu policitemie ) . După administrarea epoetinei alfa , numărul eritrocitelor , valorile Hb și numărul reticulocitelor au crescut , precum și proporția de încorporare a 59Fe . După incubarea cu epoetină alfa , a fost evidențiată in vitro o încorporare crescută a 3H- timidinei în celulele splenice nucleate eritroide ( culturi celulare de splină de șoarece ) . Cu ajutorul culturilor celulare de la nivelul măduvei osoase umane , se poate demonstra că epoetina alfa stimulează
Ro_313 () [Corola-website/Science/291072_a_292401]
-
a epoetinei alfa a fost demonstrată la diferite modele animale in vivo ( șobolani normali și cu anemie , șoareci cu policitemie ) . După administrarea epoetinei alfa , numărul eritrocitelor , valorile Hb și numărul reticulocitelor au crescut , precum și proporția de încorporare a 59Fe . După incubarea cu epoetină alfa , a fost evidențiată in vitro o încorporare crescută a 3H- timidinei în celulele splenice nucleate eritroide ( culturi celulare de splină de șoarece ) . Cu ajutorul culturilor celulare de la nivelul măduvei osoase umane , se poate demonstra că epoetina alfa stimulează
Ro_313 () [Corola-website/Science/291072_a_292401]
-
Această spălare se repetă, după care rondelele de piele se scot și se introduc în flacoane care conțin 5 ml soluție 30% (greut./vol.) de dodecilsulfat de sodiu (SDS) în apă distilată și se incubează peste noapte la 60oC. După incubare, rondele de piele se scot din flacoane și soluția rămasă este centrifugată timp de 8 minute la 21oC (forța relativă de centrifugare ~ 175). Apoi, o probă de 1 ml de supernatant se diluează în raport de 1:5 (vol./ vol
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
lumină UVA/vizibilă necitotoxică, de 5 J/cm2 UVA (experimentul + UV), iar cealaltă placă se păstrează la întuneric (experimentul -UV). În ambele plăci, mediul de tratare este apoi înlocuit cu mediul de cultură și după alte 24 de ore de incubare se determină viabilitatea celulară prin fixarea colorantului roșu neutru (NRU) timp de 3 ore. Viabilitatea celulară relativă, exprimată în procente din probele martor negative netratate, se calculează pentru fiecare dintre cele opt concentrații de testare. Pentru estimarea potențialului fotoxic, se
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
UVA a celulelor Balb/c 3T3 să fie controlată cu regularitate în conformitate cu procedura pentru controlul calității descrisă în prezenta linie directoare. 1.7.1.2. Mediile și condițiile de cultură Se recomandă utilizarea unor medii de cultură și condiții de incubare corespunzătoare la reînsămânțarea sistematică a celulelor și în timpul procedurii de testare. Pentru celulele Balb/c 3T3, mediul de cultură este DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) îmbogățit cu 10% ser de vițel nou-născut, 4mM de glutamină, penicilină și streptomicină
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
corespunzătoare la reînsămânțarea sistematică a celulelor și în timpul procedurii de testare. Pentru celulele Balb/c 3T3, mediul de cultură este DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) îmbogățit cu 10% ser de vițel nou-născut, 4mM de glutamină, penicilină și streptomicină; incubarea în atmosferă umidificată la 37oC/7,5% CO2. Este deosebit de important ca aceste condiții de cultură celulară să asigure o durată a ciclului celular în limitele normale pentru celulele sau linia celulară utilizată. 1.7.1.3. Pregătirea culturilor Celulele
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
Pentru fiecare compus chimic testat, se pregătesc două plăci: una pentru determinarea citotoxicității (-UVA) și cealaltă pentru determinarea fotocitotoxicității (+UVA). Se incubează celulele timp de 24 de ore (7,5% CO2, 37oC) până când acestea formează un monostrat semi-confluent. Timpul de incubare menționat permite recuperarea și aderența celulelor, precum și dezvoltarea exponențială. 1.7.3.2. A doua zi După incubare, se decantează mediul de cultură de celule și se spală de două ori cu 150 μl de EBSS/PBS pentru fiecare cavitate
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
fotocitotoxicității (+UVA). Se incubează celulele timp de 24 de ore (7,5% CO2, 37oC) până când acestea formează un monostrat semi-confluent. Timpul de incubare menționat permite recuperarea și aderența celulelor, precum și dezvoltarea exponențială. 1.7.3.2. A doua zi După incubare, se decantează mediul de cultură de celule și se spală de două ori cu 150 μl de EBSS/PBS pentru fiecare cavitate. Se adaugă 100 μl de EBSS/PBS ce conțin concentrația corespunzătoare a produsului chimic de testat sau doar
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
celulele cu 150 μl de EBSS/PBS preîncălzită. Se elimină soluția de spălare prin lovire ușoară. Se adaugă 100 μl de mediu NR și se incubează la 37oC, în atmosferă umedă de 7,5% CO2, timp de 3 ore. După incubare, se înlătură mediul NR și se spală celulele cu 150 μl de EBSS/PBS. Se decantează și se absoarbe complet EBSS/PBS. (Facultativ: se centrifughează placa răsturnată.) Se adaugă exact 150 μl soluție (etanol/acid acetic proaspăt preparată) de desorbție
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
de testat reprezintă un parametru important în prezentul test. Prin urmare, s-a putea ca modificarea acestor condiții (cosolvent, măcinare fină, sonicare) să fie de cea mai mare importanță în repetarea testului. O altă posibilitate ar fi variația timpului de incubare, preiradiere. Un timp mai scurt poate să fie relevant pentru produsele chimice instabile în apă. 2.2. Prezentarea datelor Dacă este posibil, se determină concentrația unui produs chimic de testat care reflectă o inhibare cu 50% a fixării roșului neutru
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
sau PBS). Celulele: - tipul și sursa celulelor, - absența micoplasmei, - numărul de reînsămânțări ale celulelor, dacă se cunosc, - sensibilitatea la UVA a celulelor, determinată cu aparatură de iradiere, utilizate în testul de fototoxicitate 3T3 NRU in vitro. Condițiile de testare (a) - incubarea înainte și după tratament: - tipul și compoziția mediului de cultură, - condițiile de incubare (concentrația CO2, temperatura, umiditatea), - timpul de incubare (pretratare, post tratare). Condițiile de testare (b) - tratamentul cu produsul chimic: - justificarea concentrațiilor alese pentru produsul chimic de testat utilizat
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
celulelor, dacă se cunosc, - sensibilitatea la UVA a celulelor, determinată cu aparatură de iradiere, utilizate în testul de fototoxicitate 3T3 NRU in vitro. Condițiile de testare (a) - incubarea înainte și după tratament: - tipul și compoziția mediului de cultură, - condițiile de incubare (concentrația CO2, temperatura, umiditatea), - timpul de incubare (pretratare, post tratare). Condițiile de testare (b) - tratamentul cu produsul chimic: - justificarea concentrațiilor alese pentru produsul chimic de testat utilizat atât în prezența, cât și în absența iradierii cu limină UV/vizibilă, - în
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
a celulelor, determinată cu aparatură de iradiere, utilizate în testul de fototoxicitate 3T3 NRU in vitro. Condițiile de testare (a) - incubarea înainte și după tratament: - tipul și compoziția mediului de cultură, - condițiile de incubare (concentrația CO2, temperatura, umiditatea), - timpul de incubare (pretratare, post tratare). Condițiile de testare (b) - tratamentul cu produsul chimic: - justificarea concentrațiilor alese pentru produsul chimic de testat utilizat atât în prezența, cât și în absența iradierii cu limină UV/vizibilă, - în cazul unei solubilități limitate a produsului chimicde
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
lumină UV/vizibilă, - doza UVA (iradianța timp), exprimată în J/cm2, - temperatura utilizată la culturile de celule în timpul iradierii, precum și la culturile de celule păstrate în paralel la întuneric. Condițiile de testare (d) - testul NRU: - compoziția mediului NR, - durata de incubare în NR, - condițiile de incubare (concentrația CO2, temperatura, umiditatea), - condițiile de extracție a NR (agentul de extracție, timpul), - lungimea de undă utilizată pentru citirea spectrofotometrică a densității optice a NR, - a doua lungime de undă (de referință), dacă s-a
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
iradianța timp), exprimată în J/cm2, - temperatura utilizată la culturile de celule în timpul iradierii, precum și la culturile de celule păstrate în paralel la întuneric. Condițiile de testare (d) - testul NRU: - compoziția mediului NR, - durata de incubare în NR, - condițiile de incubare (concentrația CO2, temperatura, umiditatea), - condițiile de extracție a NR (agentul de extracție, timpul), - lungimea de undă utilizată pentru citirea spectrofotometrică a densității optice a NR, - a doua lungime de undă (de referință), dacă s-a utilizat, - compoziția eșantionului utilizat la
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
Dacă în curs de șapte zile de la incubație se observă un efect citotoxic, se realizează o subcultură, se lasă celulele la incubat timp de patrusprezece până la optsprezece zile, apoi se realizează o nouă subcultură, urmată de o nouă perioadă de incubare de patrusprezece până la optsprezece zile. Dacă după șapte zile apare efectul citotoxic, se realizează o singură subcultură și celulele se lasă la incubat astfel încât să se ajungă la un număr total de douăzeci și opt până la treizeci și șase de zile de
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
de patrusprezece până la optsprezece zile. Dacă după șapte zile apare efectul citotoxic, se realizează o singură subcultură și celulele se lasă la incubat astfel încât să se ajungă la un număr total de douăzeci și opt până la treizeci și șase de zile de incubare, plecând de la inocularea primară. III.5.3. În cazul contaminării bacteriene a culturii primare, se reia testul, pe un homogenat de țesuturi stocat la - 80 șC. Înainte de inoculare, homogenatul trebuie să fie centrifugat la 4 000 x g timp de
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
timp de cel mult șapte zile. Dacă se observă un ECP precoce sau dacă nu se observă nici un ECP în termen de șapte zile, etapa următoare este fixarea. În acest scop, cupulele se spală cu PBS și se fixează prin incubare cu 80 % acetonă, timp de 20 de minute, la temperatura ambiantă. Lamele sunt lăsate să se usuce în aer și apoi sunt colorate imediat sau sunt stocate la o temperatură de 0-6 șC timp de cel mult 24 de ore
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
fie deosebit de utilă pentru substanțele chimice dificil de studiat în alte sisteme experimentale (adică substanțele volatile; substanțe care nu sunt solubile în apă la o concentrație care să poată fi măsurată analitic; substanțe cu afinitate mare pentru suprafață sistemelor de incubare). Metodă se poate utiliza la amestecurile care dau benzi de eluție neseparate. În acest caz, este necesar să se stabilească limitele superioară și inferioară ale valorilor log Kco pentru compușii amestecului testat. Impuritățile pot să creeze uneori probleme în interpretarea
jrc5127as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90295_a_91082]
-
culturii starter naturale Prima cultură starter - tratarea termică a laptelui crud nerefrigerat, la o temperatură egală sau mai mare de + 63 °C timp de minim 15 minute (sau combinații timp/temperatură cu un efect minim echivalent); - răcirea la temperatura de incubare (t = între 42 și 50 °C); - incubarea până la obținerea unei acidități egală cu 14-24°SH la 100 ml; - răcirea la o temperatură mai mică de +8 °C; - păstrarea în regim de refrigerare la o temperatură egală sau mai mică de
jrc3886as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89048_a_89835]
-
termică a laptelui crud nerefrigerat, la o temperatură egală sau mai mare de + 63 °C timp de minim 15 minute (sau combinații timp/temperatură cu un efect minim echivalent); - răcirea la temperatura de incubare (t = între 42 și 50 °C); - incubarea până la obținerea unei acidități egală cu 14-24°SH la 100 ml; - răcirea la o temperatură mai mică de +8 °C; - păstrarea în regim de refrigerare la o temperatură egală sau mai mică de +4 °C. Culturi starter ulterioare - inocularea laptelui
jrc3886as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89048_a_89835]
-
temperatură egală sau mai mică de +4 °C. Culturi starter ulterioare - inocularea laptelui crud care poate fi și refrigerat, cu un minim de 4 % din cultura starter precedentă; - tratament termic ca și pentru prima cultură starter; - răcirea la temperatura de incubare (t = între 42 și 50 °C); - incubarea până la obținerea unei acidități egală cu 14-24 SH la 100 ml; - răcirea la o temperatură mai mică de +8 °C; - păstrarea în regim de refrigerare la o temperatură egală sau mai mică de
jrc3886as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89048_a_89835]
-
C. Culturi starter ulterioare - inocularea laptelui crud care poate fi și refrigerat, cu un minim de 4 % din cultura starter precedentă; - tratament termic ca și pentru prima cultură starter; - răcirea la temperatura de incubare (t = între 42 și 50 °C); - incubarea până la obținerea unei acidități egală cu 14-24 SH la 100 ml; - răcirea la o temperatură mai mică de +8 °C; - păstrarea în regim de refrigerare la o temperatură egală sau mai mică de +4 °C. Cultura starter preparată pentru utilizare
jrc3886as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89048_a_89835]