102,424 matches
-
două canale etalonat de la 0 la 600oC sau la o tensiune corespunzătoare. 1.6.2. Condiții experimentale Substanțele se supun testului în forma în care se primesc. 1.6.3. Desfășurarea testului Cubul se umple cu substanță, se tasează ușor, adăugând substanță până la umplerea cubului. Cubul se suspendă apoi în centrul unei etuve la temperatura camerei. Un termocuplu se instalează în centrul cubului și celălalt între cub și peretele etuvei pentru înregistrarea temperaturii din etuvă. Temperatura etuvei și cea a probei
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
decât dacă acest lucru este indicat de tipul de aparat de expunere folosit. Substanțele solide testate trebuie să fie reduse la dimensiuni micronice, în scopul obținerii unor particule de dimensiuni corespunzătoare. Dacă este necesar, la substanța de testare se poate adăuga un excipient care să ajute la generarea unei concentrații adecvate a substanței de testare în atmosferă și în acest caz se folosește un lot martor pentru excipient. Dacă pentru facilitarea administrării se folosește un excipient sau alt aditiv, trebuie să
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
6.2.2. Număr și sex Se folosesc cel puțin zece animale (5 femele și 5 masculi) pentru fiecare doză. Femelele trebuie să fie nulipare și negestante. Dacă se prevede sacrificarea unui număr de animale pe parcursul experimentului, acest număr se adaugă la total. În plus, se poate trata un lot satelit de 10 animale (5 din fiecare sex) la doza maximă timp de 28 de zile, care poate fi supus observației vizând reversibilitatea, persistența sau apariția tardivă a efectelor toxice pe parcursul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
Se țin animalele în condițiile de găzduire și de alimentare specifice experimentului cel puțin în cele 5 zile care îl preced. Înainte de începerea testului, animalele tinere sănătoase se repartizează la întâmplare în numărul de loturi necesare. La nevoie, se poate adăuga la substanța de testare un excipient adecvat în vederea obținerii unei concentrații corespunzătoare în atmosferă. Dacă, pentru a ușura administrarea, se folosește un excipient sau alt tip de aditiv, acesta trebuie să fie netoxic. Pot fi folosite date istorice, dacă este
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
Număr și sex Se folosesc cel puțin 10 de animale (5 femele și 5 masculi) pentru fiecare nivel de concentrație. Femelele trebuie să fie nulipare și negestante. Dacă se prevede sacrificarea unui număr de animale pe parcursul experimentului, acest număr se adaugă la total. În plus, se poate trata un lot satelit de 10 de animale (5 din fiecare sex) la doza maximă timp de 28 de zile, care poate fi supus observației vizând reversibilitatea, persistența sau apariția tardivă a efectelor toxice
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
Se folosesc, pentru fiecare doză, cel puțin 10 de animale (5 femele și 5 masculi) a căror piele este sănătoasă. Femelele trebuie să fie nulipare și negestante. Dacă se prevede sacrificarea unui număr de animale pe parcursul experimentului, acest număr se adaugă la total. În plus, se poate trata un lot satelit de 10 de animale (5 din fiecare sex) la doza maximă timp de 28 de zile, care poate fi supus observației vizând reversibilitatea, persistența sau apariția tardivă a efectelor toxice
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
3.1. Prepararea culturilor Linii celulare stabilite: celulele se obțin pornind de la culturile mamă (de exemplu prin tripsinizare sau detașare selectivă prin agitare viguroasă), însămânțate în recipiente de cultură cu densitate adecvată și se incubează la 37oC. Limfocite umane: se adaugă sânge heparinizat la mediul de cultură, conținând fitohemaglutinină, ser fetal bovin și antibiotice se adaugă sânge integral heparinizat, incubat la 37°C. 1.6.3.2. Tratarea culturilor cu compusul de testare (i) Tratamentul fără amestec hepatic enzimatic activator Toate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
exemplu prin tripsinizare sau detașare selectivă prin agitare viguroasă), însămânțate în recipiente de cultură cu densitate adecvată și se incubează la 37oC. Limfocite umane: se adaugă sânge heparinizat la mediul de cultură, conținând fitohemaglutinină, ser fetal bovin și antibiotice se adaugă sânge integral heparinizat, incubat la 37°C. 1.6.3.2. Tratarea culturilor cu compusul de testare (i) Tratamentul fără amestec hepatic enzimatic activator Toate tratamentele trebuie să acopere timpul unui ciclu celular complet și schemele de fixare trebuie să
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
de evoluție. Dacă tratamentul nu coincide cu lungimea unui ciclu celular complet, se aleg timpi de fixare multipli, în vederea prelevării eșantioanelor de celule care se găseau în timpul tratamentului la stadii diferite ale ciclului celular, adică G1, S și G2. Se adaugă substanța de testare la culturile de linii celulare stabilite când acestea se găsesc în faza lor de creștere exponențială. Se tratează culturile de limfocite umane când sunt încă în stare semisincronă. (ii) Tratamentul cu amestec enzimatic hepatic activator Amestecul de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
a putea considera testul negativ. 1.6.2.5. Condiții de incubație Cutiile se incubează la 37șC timp de 48 - 72 de ore. 1.6.3. Mod de operare În metoda de încorporare directă pe cutie fără activare enzimatică, se adaugă substanța de testare și 0,1 ml de cultură bacteriană proaspătă la 2 ml de agar-agar de acoperire. Pentru testele cu activare metabolică, se adaugă la agar-agar 0,5 ml de amestec de activare de enzime hepatice conținând o cantitate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
3. Mod de operare În metoda de încorporare directă pe cutie fără activare enzimatică, se adaugă substanța de testare și 0,1 ml de cultură bacteriană proaspătă la 2 ml de agar-agar de acoperire. Pentru testele cu activare metabolică, se adaugă la agar-agar 0,5 ml de amestec de activare de enzime hepatice conținând o cantitate adecvată de fracțiune postmitocondrială, după adăugarea substanței de testare și a bacteriilor. Conținutul fiecărui tub se amestecă și se varsă la suprafața unei cutii de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
pe mililitru. 1.6.1.2. Activare metabolică Bacteriile se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem de activare metabolică adecvat. Sistemul cel mai frecvent folosit este o fracțiune postmitocondrială la care se adaugă un cofactor preparat din ficat de rozătoare tratate cu inductori enzimatici. 1.6.2. Condiții experimentale 1.6.2.1. Linii de experiență Se folosesc cel puțin patru linii, TA 1535, TA 1537 sau TA 97, TA 98 și TA
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
a putea considera testul negativ. 1.6.2.5. Condiții de incubație Plăcile se incubează la 37șC între 48 și 72 de ore. 1.6.3. Mod de operare În metoda de încorporare directă pe cutie fără activare enzimatică, se adaugă substanța de testare și 0,1 ml de cultură bacteriană proaspătă la 2 ml de agar-agar de acoperire. Pentru testele cu activare metabolică, se adaugă la agar-agar 0,5 ml de amestec de activare de enzime hepatice conținând o cantitate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
3. Mod de operare În metoda de încorporare directă pe cutie fără activare enzimatică, se adaugă substanța de testare și 0,1 ml de cultură bacteriană proaspătă la 2 ml de agar-agar de acoperire. Pentru testele cu activare metabolică, se adaugă la agar-agar 0,5 ml de amestec de activare de enzime hepatice conținând o cantitate adecvată de fracțiune postmitocondrială, după adăugarea substanței de testare și a bacteriilor. Conținutul fiecărui tub se amestecă și se varsă la suprafața unei cutii de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
de sodiu): 2,59 g Dizolvat și completat până la 1 litru cu apă KCl (clorură de potasiu): 0,23 g Dizolvată și completată până la 1 litru cu apă Cantitate necesară pentru 1 litru de soluție Apă de diluție reconstituită Se adaugă câte 25 ml din cele patru soluții mamă și se completează până la 1 litru cu apă. Se aerează până când concentrația oxigenului dizolvat este egală cu valoarea de saturație în aer. pH-ul este 7,8 ± 0,2. Dacă este necesar
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
diferite, figurează în apendicele 2. 1.4. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Se poate efectua un test de limită la 100 mg/l pentru a demonstra că CE50 este mai mare decât această concentrație. Daphnia se tratează cu substanța de testare adăugată în apă într-o gamă de concentrații, timp de 48 de ore. Dacă se folosește un test mai scurt, acest lucru trebuie justificat în protocol. În condiții de testare identice din toate celelalte puncte de vedere și un interval adecvat
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
1 litru cu apă NaHCO3 (carbonat acid de sodiu): 2,59 g Dizolvat și completat până la 1 litru cu apă KCl (clorură de potasiu): 0,23 g Dizolvată și completat până la 1 litru cu apă Apă de diluție reconstituită Se adaugă câte 25 ml din cele 4 soluții mamă și se completează până la 1 litru cu apă. Se aerează până când concentrația oxigenului dizolvat este egală cu valoarea de saturație în aer. pH-ul este 7,8 ± 0,2. Dacă este necesar
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
justifică, planul testului poate fi modificat astfel încât să se mărească numărul de concentrații și să se reducă numărul de replici pe concentrație. Desfășurarea testului Culturile care conțin concentrațiile dorite ale substanței de testare și cantitatea dorită de inocul sunt preparate adăugând cantități alicote din soluțiile mamă ale substanței la cantități adecvate de preculturi de alge (vezi apendicele 1). Se agită flacoanele de cultură și se introduc în aparatul de cultivare. Algele monocelulare sunt menținute în suspensie prin agitare, amestecare sau barbotare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
pentru a evita contaminarea cu bacterii sau alte alge. Culturile contaminate trebuie îndepărtate. Mod de operare pentru obținerea culturilor de alge Prepararea soluțiilor de nutrient (medii): Mediul se poate prepara prin diluarea soluțiilor mamă de nutrienți. Pentru mediul solid se adaugă 0,8% agar-agar. Mediul trebuie să fie steril. Sterilizarea termică poate duce la o pierdere de NH3. Cultura mamă Culturile mamă sunt culturi mici de alge care se transferă cu regularitate într-un mediu proaspăt pentru a acționa ca material
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
adecvat în paralel cu testele propriu-zise. Substanțele chimice adecvate sunt anilina (proaspăt distilată), acetatul de sodiu și benzoatul de sodiu. Toate aceste substanțe chimice de referință se degradează în condițiile de lucru din prezentele metode, chiar și când nu se adaugă deliberat inocul. S-a sugerat faptul că trebuie găsită o substanță chimică de referință ușor degradabilă, dar care să necesite adăugarea unui inocul. S-a propus ftalatul acid de potasiu, însă este nevoie de obținerea mai multor dovezi în cazul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
dizolvă în apă și se completează până la 1 litru. (d) clorură ferică (III) hexahidrat FeCl3∙6H2O 0,25 g Se dizolvă în apă și se completează până la 1 litru. Notă: Pentru a evita prepararea acestei soluții imediat înainte de folosire, se adaugă o picătură de HCl concentrat sau 0,4 g sare disodică a acidului etilendiamin-tetraacetic (EDTA) pe litru. 1.6.3. Soluții mamă ale substanțelor chimice De exemplu, 1-10 g de substanță de testare sau de referință se dizolvă în apă
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
De exemplu, 1-10 g de substanță de testare sau de referință se dizolvă în apă deionizată și se completează până la 1 litru, când solubilitatea depășește 1 g /l. În caz contrar, soluțiile mamă se prepară în mediu mineral sau se adaugă substanța de testare direct în mediul mineral. Pentru manevrarea substanțelor chimice mai puțin solubile, vezi anexa III, dar în testul MITI (Metoda C.4 -F), nu se folosesc nici solvenți și nici agenți de emulsionare. 1.6.4. Inocul Inoculul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
la un timp t, în mod normal 28 zile Sa = cantitatea reziduală de substanță de testare în mediu inoculat, la sfârșitul testării (mg) Sb = cantitatea reziduală de substanță de testare în blanc, cu apă/mediu mineral, la care s-a adăugat numai substanța de testare (mg) 1.7.3. Degradarea abiotică Dacă se folosește un martor steril, abiotic, degradarea abiotică se calculează în procente folosind formula: % degradare abiotică unde: Cs(0) = concentrația COD în martorul steril la ziua 0 Cs(t
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
de filtrare cu membrane adecvate; (d) Analizor COD; (e) Oxigenometru; (f) Centrifugă. II.2.2. Prepararea mediului mineral Pentru prepararea soluțiilor mamă, vezi 1.6.2. Se amestecă 10 ml de soluție (a) cu 800 ml apă de diluție, se adaugă câte 1 ml din soluțiile (b) - (d) și se completează până la 1 litru cu apă de diluție. II.2.3.Prepararea și adaptarea inoculului Inoculul poate proveni dintr-o varietate de surse: efluenți uzați, ape de suprafață, soluri sau dintr-
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
Vezi punctele 1.6.4., 1.6.4.1., 1.6.4.2. și 1.6.5. II.2.4. Pregătirea vaselor De exemplu, se introduc câte 800 ml de mediu mineral în vase conice de 2 litri și se adaugă volume suficiente de soluții mamă ale substanțelor de testare și de referință în fiecare vas pentru a obține o concentrație a substanței chimice echivalentă cu 10 - 40 mg COD /l. Se verifică valorile pH și se ajustează, după caz, la
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]