11,436 matches
-
amestecă și se incubează timp de 60 de minute la 15°C cu părți egale din reactivii enumerați în partea I IV 2. III.1. Culturi celulare și medii A se vedea partea I III 1. III.2. Inocularea culturilor celulare A se vedea partea I III 3. III.4. Microscopie Se inspectează în fiecare zi culturile celulare inoculate pentru a se distinge apariția unui ECP la o mărire de 40-150 de ori. Dacă formarea unui ECP este inhibată de unul
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
enumerați în partea I IV 2. III.1. Culturi celulare și medii A se vedea partea I III 1. III.2. Inocularea culturilor celulare A se vedea partea I III 3. III.4. Microscopie Se inspectează în fiecare zi culturile celulare inoculate pentru a se distinge apariția unui ECP la o mărire de 40-150 de ori. Dacă formarea unui ECP este inhibată de unul din serurile folosite, virusul poate fi considerat ca identificat în consecință. Dacă apariția unui ECP nu este
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
pot supune țesuturi și altor probe de diagnostic, cum ar fi tehnicile RT-PCR sau IF pe elemente congelate sau imunohistochimia pe țesuturi fixate în formol. Aceste tehnici trebuie să fie mereu însoțite de o inoculare a țesuturilor nefixate pe culturi celulare. PARTEA III Dovada absenței anterioare a SHV și/sau NHI în zonele sau exploatațiile din zone neavizate Linii directoare și criterii aplicabile unui program de inspecții sanitare oficiale 1. Un program de inspecții sanitare poate fi pus în aplicare numai
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
neavizată) destinate avizării. 6. Pentru ca programul să poată fi recunoscut oficial, nu trebuie să se producă sau să fie detectat nici un caz de SHV sau NHI (nici infecție clinică, nici izolare a virusului). PARTEA IV Titrarea destinată verificării sensibilității culturilor celulare la infecție Sunt indicate mai jos proceduri recomandate pentru titrarea menționată în partea I III 3. Trebuie să se utilizeze cel puțin doi izolați de virus SHV și un izolat de virus NHI. Acești izolați trebuie să fie reprezentativi ai
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
tulpină patogenă de păstrăv curcubeu provenind din Europa). Trebuie să se folosească izolați bine definiți provenind din statele membre. Sunt disponibili izolați de referință pe lângă laboratoarele comunitare de referință pentru bolile peștilor. Loturi de viruși cu slabă reprezentare în culturi celulare se cultivă în flacoane de culturi celulare pe celule BF-2 sau RTG-2 pentru virusul SHV șu pe celule EPC pentru virusul NHI. Trebuie să se folosească un mediu de cultură celulară adiționat cu cel puțin 10% ser. Se folosește o
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
Europa). Trebuie să se folosească izolați bine definiți provenind din statele membre. Sunt disponibili izolați de referință pe lângă laboratoarele comunitare de referință pentru bolile peștilor. Loturi de viruși cu slabă reprezentare în culturi celulare se cultivă în flacoane de culturi celulare pe celule BF-2 sau RTG-2 pentru virusul SHV șu pe celule EPC pentru virusul NHI. Trebuie să se folosească un mediu de cultură celulară adiționat cu cel puțin 10% ser. Se folosește o multiplicare slabă a infecției (MOI) pentru inoculare
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
peștilor. Loturi de viruși cu slabă reprezentare în culturi celulare se cultivă în flacoane de culturi celulare pe celule BF-2 sau RTG-2 pentru virusul SHV șu pe celule EPC pentru virusul NHI. Trebuie să se folosească un mediu de cultură celulară adiționat cu cel puțin 10% ser. Se folosește o multiplicare slabă a infecției (MOI) pentru inoculare (< 1). Atunci când ECP este total, virusul este colectat prin centrifugare din lichidul de suprafață de la culturile celulare la 2000 x g timp de cincisprezece
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
să se folosească un mediu de cultură celulară adiționat cu cel puțin 10% ser. Se folosește o multiplicare slabă a infecției (MOI) pentru inoculare (< 1). Atunci când ECP este total, virusul este colectat prin centrifugare din lichidul de suprafață de la culturile celulare la 2000 x g timp de cincisprezece minute, sterilizat prin filtrare cu o membrană de 0,45 μm și repartizat în criotuburi etichetate. Virusul este conservat la - 80°C. La o săptămână după congelare, se decongelează în apă rece trei
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
prin filtrare cu o membrană de 0,45 μm și repartizat în criotuburi etichetate. Virusul este conservat la - 80°C. La o săptămână după congelare, se decongelează în apă rece trei fiole din fiecare virus și se titrează pe liniile celulare respective. Fiecare izolat de virus se decongelează și se titrează cel puțin o dată la șase luni sau dacă se suspectează o scădere a sensibilității liniilor celulare. Procedurile de titrare trebuie să fie descrise în detaliu și trebuie să se aplice
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
decongelează în apă rece trei fiole din fiecare virus și se titrează pe liniile celulare respective. Fiecare izolat de virus se decongelează și se titrează cel puțin o dată la șase luni sau dacă se suspectează o scădere a sensibilității liniilor celulare. Procedurile de titrare trebuie să fie descrise în detaliu și trebuie să se aplice aceeași procedură de fiecare dată. Titrarea prin diluție limită trebuie să cuprindă cel puțin șase replici din fiecare serie de diluții. Proporțiile sunt comparate cu proporțiile
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
să cuprindă cel puțin șase replici din fiecare serie de diluții. Proporțiile sunt comparate cu proporțiile obținute anterior. Dacă proporția unuia dintre cei trei izolați virali scade cu un factor de 2 log sau mai mult față de proporția inițială, tulpina celulară nu mai trebuie să fie folosită în scopuri de supraveghere. Dacă se conservă în laborator tulpini celulare diferite, fiecare tulpină trebuie examinată separat. Se păstrează o evidență timp de zece ani cel puțin. PARTEA V Acronime și abrevieri BF-2 BF-2
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
anterior. Dacă proporția unuia dintre cei trei izolați virali scade cu un factor de 2 log sau mai mult față de proporția inițială, tulpina celulară nu mai trebuie să fie folosită în scopuri de supraveghere. Dacă se conservă în laborator tulpini celulare diferite, fiecare tulpină trebuie examinată separat. Se păstrează o evidență timp de zece ani cel puțin. PARTEA V Acronime și abrevieri BF-2 BF-2 Bluegill fry-2 (tulpină celulară) ECP Efect citopatogen LCR Laborator comunitar de referință pentru bolile peștilor ELISA Metodă
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
să fie folosită în scopuri de supraveghere. Dacă se conservă în laborator tulpini celulare diferite, fiecare tulpină trebuie examinată separat. Se păstrează o evidență timp de zece ani cel puțin. PARTEA V Acronime și abrevieri BF-2 BF-2 Bluegill fry-2 (tulpină celulară) ECP Efect citopatogen LCR Laborator comunitar de referință pentru bolile peștilor ELISA Metodă imuno-enzimatică EPC Epithelioma papulosum cyprinii (tulpină celulară) FHM Tête de boule = Fathead minnow (tulpină celulară) FITC Izotiocianat de fluoresceină Hepes Acid N-2-hidroxietilipiperazină-N' 2-etan sulfonic HRP Peroxidază de
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
Se păstrează o evidență timp de zece ani cel puțin. PARTEA V Acronime și abrevieri BF-2 BF-2 Bluegill fry-2 (tulpină celulară) ECP Efect citopatogen LCR Laborator comunitar de referință pentru bolile peștilor ELISA Metodă imuno-enzimatică EPC Epithelioma papulosum cyprinii (tulpină celulară) FHM Tête de boule = Fathead minnow (tulpină celulară) FITC Izotiocianat de fluoresceină Hepes Acid N-2-hidroxietilipiperazină-N' 2-etan sulfonic HRP Peroxidază de hrean IF Imunofluorescență IFAT Test de imunofluorescență indirectă NHI(V) Necroză hematopoietică infecțioasă (virus) NPI(V) Necroză pancreatică infecțioasă (virus
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
cel puțin. PARTEA V Acronime și abrevieri BF-2 BF-2 Bluegill fry-2 (tulpină celulară) ECP Efect citopatogen LCR Laborator comunitar de referință pentru bolile peștilor ELISA Metodă imuno-enzimatică EPC Epithelioma papulosum cyprinii (tulpină celulară) FHM Tête de boule = Fathead minnow (tulpină celulară) FITC Izotiocianat de fluoresceină Hepes Acid N-2-hidroxietilipiperazină-N' 2-etan sulfonic HRP Peroxidază de hrean IF Imunofluorescență IFAT Test de imunofluorescență indirectă NHI(V) Necroză hematopoietică infecțioasă (virus) NPI(V) Necroză pancreatică infecțioasă (virus) MEM Mediu esențial minimal MOI Gradul de multiplicare
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
și a fenomenelor conexe, care provoacă modificări ale oncogenelor și ale genelor supresoare de tumori din celulele somatice, în inducerea cancerului la oameni și la animalele de laborator. Testul in vitro de aberație cromozomială poate să utilizeze culturi de linii celulare stabilite, sușe celulare sau culturi celulare primare. Celulele utilizate se selectează în funcție de potențialul de dezvoltare în cultură, stabilitatea cariotipului, numărul de cromozomi, diversitatea cromozomilor și frecvența aberațiilor cromozomiale spontane. Pentru realizarea in vitro a testului este necesar să se utilizeze
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
conexe, care provoacă modificări ale oncogenelor și ale genelor supresoare de tumori din celulele somatice, în inducerea cancerului la oameni și la animalele de laborator. Testul in vitro de aberație cromozomială poate să utilizeze culturi de linii celulare stabilite, sușe celulare sau culturi celulare primare. Celulele utilizate se selectează în funcție de potențialul de dezvoltare în cultură, stabilitatea cariotipului, numărul de cromozomi, diversitatea cromozomilor și frecvența aberațiilor cromozomiale spontane. Pentru realizarea in vitro a testului este necesar să se utilizeze o sursă exogenă
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
modificări ale oncogenelor și ale genelor supresoare de tumori din celulele somatice, în inducerea cancerului la oameni și la animalele de laborator. Testul in vitro de aberație cromozomială poate să utilizeze culturi de linii celulare stabilite, sușe celulare sau culturi celulare primare. Celulele utilizate se selectează în funcție de potențialul de dezvoltare în cultură, stabilitatea cariotipului, numărul de cromozomi, diversitatea cromozomilor și frecvența aberațiilor cromozomiale spontane. Pentru realizarea in vitro a testului este necesar să se utilizeze o sursă exogenă pentru activarea metabolică
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
Colcemid(r) sau colchicină), se recoltează, se colorează și celulele în metafază sunt analizate la microscop pentru detectarea aberațiilor cromozomiale. 1.4. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.4.1. Preparatele 1.4.1.1. Celulele Se pot utiliza diferite linii celulare, sușe de celule sau culturi de celule primare, inclusiv celule umane (de ex. celule de hamster chinezesc, limfocite din sângele periferic uman sau al altor mamifere). 1.4.1.2. Mediile și condițiile de cultură Se recomandă utilizarea mediilor de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
1.4.1.2. Mediile și condițiile de cultură Se recomandă utilizarea mediilor de cultură și a condițiilor de incubare (vasele de cultură, concentrația CO2, temperatura și umiditatea) corespunzătoare pentru dezvoltarea culturilor. Se impune controlul regulat al liniilor și sușelor celulare, pentru verificarea stabilității numărului modal de cromozomi și a absenței contaminării cu micoplasmă și, dacă se constată contaminarea, celulele nu se mai folosesc. Ar trebui să se cunoască perioada ciclului celular normal pentru celulele și condițiile de cultură utilizate. 1
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
culturilor. Se impune controlul regulat al liniilor și sușelor celulare, pentru verificarea stabilității numărului modal de cromozomi și a absenței contaminării cu micoplasmă și, dacă se constată contaminarea, celulele nu se mai folosesc. Ar trebui să se cunoască perioada ciclului celular normal pentru celulele și condițiile de cultură utilizate. 1.4.1.3. Prepararea culturilor Liniile și sușele celulare stabilite: celulele se prepară plecând de la culturile de rezervă, se însămânțează în mediul de cultură într-o anumită densitate, astfel încât culturile să
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
a absenței contaminării cu micoplasmă și, dacă se constată contaminarea, celulele nu se mai folosesc. Ar trebui să se cunoască perioada ciclului celular normal pentru celulele și condițiile de cultură utilizate. 1.4.1.3. Prepararea culturilor Liniile și sușele celulare stabilite: celulele se prepară plecând de la culturile de rezervă, se însămânțează în mediul de cultură într-o anumită densitate, astfel încât culturile să nu ajungă la confluență înainte de momentul recoltării, apoi se incubează la 37oC. Limfocitele: sângele complet, tratat cu un
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
să depindă de clasa din care face parte substanța chimică de testat. În unele cazuri, s-ar putea să fie convenabilă utilizarea mai multor concentrații ale fracției postmitocondriale. O serie de realizări, inclusiv crearea prin inginerie genetică a unor linii celulare care exprimă enzime activatoare specifice, poate furniza potențialul pentru o activare endogenă. Alegerea liniilor celulare ar trebui să fie justificată din punct de vedere științific (de ex. prin importanța izoenzimei citocromului P450 pentru metabolismul substanței de testat). 1.4.1
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
s-ar putea să fie convenabilă utilizarea mai multor concentrații ale fracției postmitocondriale. O serie de realizări, inclusiv crearea prin inginerie genetică a unor linii celulare care exprimă enzime activatoare specifice, poate furniza potențialul pentru o activare endogenă. Alegerea liniilor celulare ar trebui să fie justificată din punct de vedere științific (de ex. prin importanța izoenzimei citocromului P450 pentru metabolismul substanței de testat). 1.4.1.5. Substanța de testat/prepararea Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
în vedere la determinarea dozei maxime sunt citotoxicitatea, solubilitatea în sistemul experimental și modificările de pH sau osmolalitate. Citotoxicitatea ar trebui să se determine cu și fără activare metabolică în experimentarea principală, utilizând un indicator corespunzător al integrității și dezvoltării celulare, ca gradul de confluență, numărul de celule viabile sau indexul mitotic. Ar putea fi utilă determinarea citotoxicității și solubilității într-un test preliminar. Ar trebui să se utilizeze cel puțin trei concentrații analizabile. Dacă o substanță este citototoxică, concentrațiile respective
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]