80 matches
-
30 de minute la 37șC. 3.1.4. Se spală plăcile de 5 ori cu SSTF și se usucă pe sugativă conform descrierii anterioare. 3.1.5. Cromogen/substrat Se adaugă în fiecare godeu 100 µl din soluția următoare de cromogen/substrat: 1 ml de ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic) cu 5 mg/ml + 9 ml de tampon de substrat (0,1 M de tampon de fosfat-citrat cu pH 4 cu conținut de 0,03% de H2O2), apoi se incubează
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
de grup (3-17-A3) prin adăugarea de ser de testare. Anticorpii de BTV prezenți în serul de testare blochează reactivitatea anticorpului monoclonal (AcM) și cauzează o reducere a dezvoltării scontate a culorii după adăugarea unui anticorp antișoarece marcat enzimatic și a cromogenului/substratului. Serurile pot fi testate într-o singură diluție de 1:5 (testul spot - apendicele 1) sau pot fi titrate (titrarea serului - apendicele 2) pentru a defini punctele limită de diluție. Valorile de inhibiție mai mari decât 50 % pot fi
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
specifice, păstrat la -20 °C sau liofilizat și diluat la 1/100 cu tampon de blocare înainte de utilizare. 5. Conjugat: globulină de iepure antișoarece (adsorbită și eluată) conjugată cu peroxidază din hrean și păstrat la întuneric la 4 °C. 6. Cromogen și substrat: Ortofenilen diamină (cromogen OFD) a cărei concentrație finală este de 0,4 mg/ml în apă distilată sterilă. Peroxid de hidrogen (substrat 30 % w/v), 0,05 % v/v adăugat imediat înainte de utilizare (5µl H2O2 per 10 ml
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
sau liofilizat și diluat la 1/100 cu tampon de blocare înainte de utilizare. 5. Conjugat: globulină de iepure antișoarece (adsorbită și eluată) conjugată cu peroxidază din hrean și păstrat la întuneric la 4 °C. 6. Cromogen și substrat: Ortofenilen diamină (cromogen OFD) a cărei concentrație finală este de 0,4 mg/ml în apă distilată sterilă. Peroxid de hidrogen (substrat 30 % w/v), 0,05 % v/v adăugat imediat înainte de utilizare (5µl H2O2 per 10 ml OFD). (A se manevra OFD
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
Se adaugă 50 µl de globulină de iepure antișoarece conjugată cu peroxidază din hrean, diluată la o concentrație pretitrată optimă, în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 8. Se incubează o oră la 37 °C. 9. Se adaugă substrat și cromogen după indicațiile anterioare. Se întrerupe reacția după 10 minute prin adăugarea acidului sulfuric 1 M (50 µl/godeu). În testul de concurență, anticorpul monoclonal trebuie să fie în exces, astfel, se alege o diluție a antigenului ce se găsește pe
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]