2,214 matches
-
inspecție și, dacă este cazul, proceduri de prelevare de probe și de testare, dat fiind faptul că în anumite condiții de mediu maladia poate rămâne în stare latentă și neobservată, atât în culturile în creștere de cartofi, cât și în tuberculii de cartofi depozitați; întrucât răspândirea agentului patogen într-o cultură în creștere nu este factorul cel mai important, ci faptul că agentul patogen se poate răspândi prin apa de suprafață și anumite plante sălbatice solanacee și, în consecință, irigarea culturilor
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
este cazul, - metoda de analiză. ANEXA II PROTOCOL DE TESTARE PENTRU DIAGNOSTICAREA, DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA RALSTONIA SOLANACEARUM (SMITH) YABUUCHI ET AL. DOMENIUL DE APLICARE AL PROTOCOLULUI DE TESTARE Protocolul prezentat descrie diversele proceduri implicate în: (i) diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomate; (ii) detectarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof; (iii) identificarea Ralstonia solanacearum. În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
AL. DOMENIUL DE APLICARE AL PROTOCOLULUI DE TESTARE Protocolul prezentat descrie diversele proceduri implicate în: (i) diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomate; (ii) detectarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof; (iii) identificarea Ralstonia solanacearum. În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare..............................................................9 1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
în eșantioanele de tuberculi de cartof; (iii) identificarea Ralstonia solanacearum. În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare..............................................................9 1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare..............................................................9 1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată.................................13 1. Simptome..................................................................................13 2. Test(e) de triere rapidă..............................................................13 3. Procedură de izolare..................................................................14 4. Test
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
testare..............................................................9 1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată.................................13 1. Simptome..................................................................................13 2. Test(e) de triere rapidă..............................................................13 3. Procedură de izolare..................................................................14 4. Test(e) de confirmare................................................................14 SECȚIUNEA III: Detectarea și identificarea Ralstonia
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată.................................13 1. Simptome..................................................................................13 2. Test(e) de triere rapidă..............................................................13 3. Procedură de izolare..................................................................14 4. Test(e) de confirmare................................................................14 SECȚIUNEA III: Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof.........................................................................17 1. Pregătirea eșantionului pentru testare...................................................17 2. Test de imunofluorescență (IF)............................................................18 3. Test de imunoadsorbție cu anticorpi marcați enzimatic (ELISA)........20 4. Testul de reacție de polimerizare în lanț (PCR(tm))..........................20 5. Testul de placare
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
27 Apendicele 5 Materiale pentru testul ELISA..........................................................................28 Apendicele 6 Materiale pentru testul PCR..............................................................................29 Apendicele 7 Materiale pentru test(ele) de placare selectivă și de îmbogățire.....................29 Bibliografie..............................................................................................................................30 SECȚIUNEA I APLICAREA PROTOCOLULUI DE TESTARE Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată Protocolul de testare este destinat tuberculilor de cartof cu simptome tipice sau suspecți de putregai brun și în cazul plantelor de cartof și tomate cu simptome tipice sau
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
cel puțin unul dintre testele enumerate în secțiunea II.4.1, în combinație cu un test de patogenicitate (secțiunea II.4.3). Caracterizarea sușei este opțională, dar recomandată pentru fiecare caz nou. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum din eșantioanele de tuberculi de cartof Protocolul este destinat detectării infecțiilor latente în tuberculii de cartof printr-unul sau, de preferință, mai multe teste de triere care, dacă sunt pozitive, sunt suplimentate prin izolarea agentului patogen; urmat de identificarea unei culturi pure ca fiind
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
1, în combinație cu un test de patogenicitate (secțiunea II.4.3). Caracterizarea sușei este opțională, dar recomandată pentru fiecare caz nou. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum din eșantioanele de tuberculi de cartof Protocolul este destinat detectării infecțiilor latente în tuberculii de cartof printr-unul sau, de preferință, mai multe teste de triere care, dacă sunt pozitive, sunt suplimentate prin izolarea agentului patogen; urmat de identificarea unei culturi pure ca fiind Ralstonia solanacearum , în cazul izolării unor colonii tipice. Referințe la
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
teste de triere care, dacă sunt pozitive, sunt suplimentate prin izolarea agentului patogen; urmat de identificarea unei culturi pure ca fiind Ralstonia solanacearum , în cazul izolării unor colonii tipice. Referințe la diagramă 1 Mărimea eșantionului Mărimea standard este de 200 tuberculi. Cu toate acestea, protocolul poate fi aplicat în mod convenabil eșantioanelor cu mai puțin de 200 de tuberculi. 2 Test(e) de triere Un singur test poate să fie insuficient de sensibil sau de sigur pentru detectarea Ralstonia solanacearum dintr-
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
pure ca fiind Ralstonia solanacearum , în cazul izolării unor colonii tipice. Referințe la diagramă 1 Mărimea eșantionului Mărimea standard este de 200 tuberculi. Cu toate acestea, protocolul poate fi aplicat în mod convenabil eșantioanelor cu mai puțin de 200 de tuberculi. 2 Test(e) de triere Un singur test poate să fie insuficient de sensibil sau de sigur pentru detectarea Ralstonia solanacearum dintr-un eșantion. Din acest motiv se recomandă mai mult de un test, iar aceste teste ar fi de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
obține prin cel puțin unul dintre testele enumerate în secțiunea II.4.1., în combinație cu un test al patogenicității (secțiunea II.4.3.). Caracterizarea sușelor este opțională, dar recomandată pentru fiecare caz nou. SECȚIUNEA II Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată 1. Simptome 1.1 Simptome la cartof Planta de cartof. Stadiul incipient al infecției este reprezentat de ofilirea frunzelor înspre vârful plantei în timpul temperaturilor diurne ridicate și de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
un volum mic de apă distilată sterilă sau cu un tampon fosfat de 50 mM. Se pune pe placă, se incubează și se verifică existența coloniilor tipice de Ralstonia solanacearum. SECȚIUNEA III DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA RALSTONIA SOLANACEARUM ÎN EȘANTIOANELE DE TUBERCULI DE CARTOF Notă: Mărimea standard a eșantionului este de 200 de tuberculi. Cu toate acestea procedura se poate aplica în mod convenabil eșantioanelor cu mai puțin de 200 de tuberculi. 1. Pregătirea eșantionului pentru testare Notă: Extractul final de cartof
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
de 50 mM. Se pune pe placă, se incubează și se verifică existența coloniilor tipice de Ralstonia solanacearum. SECȚIUNEA III DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA RALSTONIA SOLANACEARUM ÎN EȘANTIOANELE DE TUBERCULI DE CARTOF Notă: Mărimea standard a eșantionului este de 200 de tuberculi. Cu toate acestea procedura se poate aplica în mod convenabil eșantioanelor cu mai puțin de 200 de tuberculi. 1. Pregătirea eșantionului pentru testare Notă: Extractul final de cartof obținut în această procedură poate fi utilizate de asemenea pentru detectarea Clavibacter
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
SECȚIUNEA III DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA RALSTONIA SOLANACEARUM ÎN EȘANTIOANELE DE TUBERCULI DE CARTOF Notă: Mărimea standard a eșantionului este de 200 de tuberculi. Cu toate acestea procedura se poate aplica în mod convenabil eșantioanelor cu mai puțin de 200 de tuberculi. 1. Pregătirea eșantionului pentru testare Notă: Extractul final de cartof obținut în această procedură poate fi utilizate de asemenea pentru detectarea Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus. Opțiuni de pre-testare dacă sunt considerate utile: (i) se incubează eșantionul la 25 - 30°C
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
fi utilizate de asemenea pentru detectarea Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus. Opțiuni de pre-testare dacă sunt considerate utile: (i) se incubează eșantionul la 25 - 30°C până la două săptămâni pentru a încuraja multiplicarea populațiilor mici de Ralstonia solanacearum (ii) se spală tuberculii sub jet de apă cu dezinfectanți și detergenți corespunzători. Tuberculii se usucă la aer. 1.1. Cu un scalpel sau un cuțit pentru plante curat și dezinfectat se îndepărtează coaja de la talonul tuberculului, astfel încât să fie vizibile țesuturile vasculare. Se
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Opțiuni de pre-testare dacă sunt considerate utile: (i) se incubează eșantionul la 25 - 30°C până la două săptămâni pentru a încuraja multiplicarea populațiilor mici de Ralstonia solanacearum (ii) se spală tuberculii sub jet de apă cu dezinfectanți și detergenți corespunzători. Tuberculii se usucă la aer. 1.1. Cu un scalpel sau un cuțit pentru plante curat și dezinfectat se îndepărtează coaja de la talonul tuberculului, astfel încât să fie vizibile țesuturile vasculare. Se taie cu atenție un miez conic mic (3 - 5 mm
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
îndepărtează coaja de la talonul tuberculului, astfel încât să fie vizibile țesuturile vasculare. Se taie cu atenție un miez conic mic (3 - 5 mm diametru) de țesut vascular de la talon. Cantitatea de țesut nevascular trebuie redusă la minim. Se prelucrează fiecare dintre tuberculii din eșantion. Notă: În această etapă se poate efectua examinarea vizuală a tuberculilor (secțiunea II.1). Se separă orice tubercul cu simptome sau putrefacție severă și se testează separat (secțiunea II) 1.2. Se colectează taloanele într-un container închis
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
5 mm diametru) de țesut vascular de la talon. Cantitatea de țesut nevascular trebuie redusă la minim. Se prelucrează fiecare dintre tuberculii din eșantion. Notă: În această etapă se poate efectua examinarea vizuală a tuberculilor (secțiunea II.1). Se separă orice tubercul cu simptome sau putrefacție severă și se testează separat (secțiunea II) 1.2. Se colectează taloanele într-un container închis. Este preferabil ca acestea să fie prelucrate imediat. Dacă nu este posibil, se depozitează pentru cel mult 24 de ore
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
relevantă, până la finalizarea respectivei metode. 2. În cazul confirmării organismului, ar trebui să se păstreze să și conserve în condiții corespunzătoare: - materialul prevăzut în alin. (1), și - un eșantion din tomata sau vânăta infectată inoculată cu extractul de plantă sau tubercul, dacă este cazul, și - cultura izolată a organismului, până cel puțin o lună după procedura de notificare prevăzută în art. 5 alin. (2). ANEXA IV Elementele din investigația prevăzută în art. 5alin. alin. (1) lit. (a) pct. (i) includ, când
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
sau în contact cu oricare dintre structurile sau obiectele enumerate în liniuța precedentă, înainte de curățarea și dezinfectarea acestor structuri sau obiecte, - ca rezultat al investigației și testării în conformitate cu art. 5 alin (1) lit. (a) pct. (ii), în cazul cartofilor, acei tuberculi sau plante cu o relație de rudenie clonală colaterală sau ascendentă, și în cazul tomatelor, acele plante cu aceeași sursă ca materialul vegetal enumerat desemnat ca fiind contaminat în conformitate cu art. 5 alin (1) lit. (a) pct. (ii) și pentru care
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
asigurarea acestui control în orice moment și aprobarea de către organismul oficial responsabil ale statului membru în care cartofii urmează să fie ambalați sau prelucrați în legătură cu facilitățile de eliminare a deșeurilor prevăzute în prima și a doua liniuță, sunt: (i) pentru tuberculi de cartofi, - utilizarea drept cartofi de conservare destinați consumului și ambalați în locuri cu facilități corespunzătoare de eliminare a deșeurilor, pregătiți pentru livrare directă și folosire fără reambalare, și produși pentru asemenea livrare directă și folosire, sau - utilizarea drept cartofi
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
cursul cel puțin a ultimilor patru ani de cultivare următori contaminării desemnate, - sunt luate măsuri pentru eliminarea plantelor spontane de cartofi și tomate, ca și a altor plante gazdă ale organismului inclusiv a buruienilor solanacee și - nu se plantează următoarele: - tuberculi sau plante de cartof - plante sau semințe de tomate, - ținând cont de biologia organismului, - alte plante gazdă, - plante din specia Brassica, pentru care există un risc identificat de supraviețuire a organismului, - culturi pentru care există riscul identificat de răspândire a
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
certificați oficial doar pentru producția de sămânță sau de conservare și se desfășoară o anchetă oficială incluzând testarea, după cum se detaliază în art. 2 alin. (1); (b) pe alte câmpuri: - în anul de cultivare urmând contaminării desemnate: - nu se plantează tuberculi sau plante de cartofi, ori se plantează alte plante gazdă ale organismului și se iau măsuri de eliminare a plantelor spontane de cartofi și tomate sau alte plante gazdă, inclusiv buruieni solanacee, dacă este cazul, sau - în cazul tuberculilor de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]