152 matches
-
și iPMP/ZMP care sunt rapid convertite în transzeatină, sub acțiunea enzimelor codificate de celula vegetală gazdă. Acumularea masivă de auxină și citokinină condiționată de activitatea enzimelor sintetizate sub direcția oncogenelor iaaM, iaaH și ipt reprezintă factorul determinator primar al tumorigenezei. Se crede că produșii oncogenelor secundare 6b(tml) și 5 ar modifica doar efectele fitohormonilor în celula vegetală. După opinia lui Hooykaas și colaboratorii (1988) și a lui Gaudin și colaboratorii (1994) produsul genei 6b ar modifica răspunsul la hormoni
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
manopinei. Din punct de vedere chimic, în general, opinele sunt produși de condensare de aminoacizi, ketoacizi și zaharuri, ele reprezentând până la 7% din greutatea uscată a țesutului tumoral vegetal (Dessaux și colab., 1993). Astfel, deși nu sunt direct implicate în tumorigeneza vegetală, opinele reprezintă un substrat chimic de creștere pentru Agrobacterium, precum și un stimulent al schimbului conjugativ pentru plasmidul Ti și pentru chemotaxis (Kim și colab., 2001). Apariția tumorilor vegetale de tip „cancer de colet” reprezintă o funcție a interacțiunii factorilor
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
PTGS) care interferă cu dezvoltarea tumorilor de colet, urmare a integrării T-ADN în genomul plantei. Expresia bacteriooncogenelor iaaM, iaaH și ipt în celulele plantelor transformate se asociază cu sinteza rapidă a auxinei și citokininei care inițiază și asigură progresia tumorigenezei. Aceste oncogene prezintă un înalt conservatorism de secvență (~90%) la toate sușele de A. tumefaciens care au fost caracterizate (Escobar și colab., 2001). Plantele transformate de Arabidopsis, Lycopersicon esculentum și Juglans regia prin utilizarea de constructe autocomplementare ARN desemnate să
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
au fost caracterizate (Escobar și colab., 2001). Plantele transformate de Arabidopsis, Lycopersicon esculentum și Juglans regia prin utilizarea de constructe autocomplementare ARN desemnate să inițieze PTGS pentru bacteriooncogenele iaaM și ipt au manifestat o rezistență de un spectru restrâns la tumorigeneza de colet. Jamison (2001) a inoculat semințe de tomate (Lycopersicum esculentum) cu Agrobacterium tumefaciens și după cinci săptămâni de la inoculare a examinat plantulele pentru identificarea efectului. Plantele de tip sălbatic au dezvoltat tumori vizibile de colet și o creștere întârziată
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
un indiciu că tumorile naturale dintr-o zonă restrânsă au fost induse de mai multe tipuri de plasmid Ti. Escobar și colaboratorii (2001) au studiat mecanismul de silențiere mediată de ARN de interferență (iARN) a oncogenelor ce conferă rezistență la tumorigeneza de colet. Agrobacterium tumefaciens este unul dintre singurele organisme care posedă un sistem de transfer de gene pe orizontală, bine caracterizat, având o suită de oncogene care, atunci când sunt integrate în genomul plantei gazdă orchestrează biosinteza de novo a auxinei
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
integrate în genomul plantei gazdă orchestrează biosinteza de novo a auxinei și citokininei, spre a genera tumori. În mod specific, oncogenele iaaM și ipt care au omologie de aproximativ 90% la diferitele tulpini de A. tumefaciens, sunt nemijlocit implicate în tumorigeneză. Autorii au realizat două constructe moleculare desemnate să inițieze sinteza ARN de interferență (iARN) pentru cele două oncogene, generându-se plante transgenice de Arabidopsis thaliana și Lycopersicum esculentum care sunt înalt rezistente la boala cancerului de colet. Cercetătorii au evidențiat
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
-se plante transgenice de Arabidopsis thaliana și Lycopersicum esculentum care sunt înalt rezistente la boala cancerului de colet. Cercetătorii au evidențiat că inocularea in vitro a radicelelor cu două biovarietăți de A. tumefaciens a permis exprimarea de 0,0-1,5% tumorigeneză la liniile transgenice de A. thaliana comparativ cu 97,5% tumorigeneză la plantele martor. Rezultate similare s-au obținut la mai multe linii de tomate (L. esculentum) transformate prin inocularea tulpinală cu trei linii biovar de A. tumefaciens, evidențiindu-se
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
înalt rezistente la boala cancerului de colet. Cercetătorii au evidențiat că inocularea in vitro a radicelelor cu două biovarietăți de A. tumefaciens a permis exprimarea de 0,0-1,5% tumorigeneză la liniile transgenice de A. thaliana comparativ cu 97,5% tumorigeneză la plantele martor. Rezultate similare s-au obținut la mai multe linii de tomate (L. esculentum) transformate prin inocularea tulpinală cu trei linii biovar de A. tumefaciens, evidențiindu-se tumorigeneză între 0,0% și 24,2%, pe când plantele martor au
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
la liniile transgenice de A. thaliana comparativ cu 97,5% tumorigeneză la plantele martor. Rezultate similare s-au obținut la mai multe linii de tomate (L. esculentum) transformate prin inocularea tulpinală cu trei linii biovar de A. tumefaciens, evidențiindu-se tumorigeneză între 0,0% și 24,2%, pe când plantele martor au prezentat 100% tumorigeneză. Acest mecanism de rezistență durabilă la tumorigeneză este mediat de silențierea bacteriooncogenelor prin intermediul i-ARN și se bazează pe omologia de secvență a ARNm, mai curând, decât
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
martor. Rezultate similare s-au obținut la mai multe linii de tomate (L. esculentum) transformate prin inocularea tulpinală cu trei linii biovar de A. tumefaciens, evidențiindu-se tumorigeneză între 0,0% și 24,2%, pe când plantele martor au prezentat 100% tumorigeneză. Acest mecanism de rezistență durabilă la tumorigeneză este mediat de silențierea bacteriooncogenelor prin intermediul i-ARN și se bazează pe omologia de secvență a ARNm, mai curând, decât pe interacțiunile înalt specifice receptor-ligand, descrise în cazurile tradiționale de rezistență a plantelor
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
mai multe linii de tomate (L. esculentum) transformate prin inocularea tulpinală cu trei linii biovar de A. tumefaciens, evidențiindu-se tumorigeneză între 0,0% și 24,2%, pe când plantele martor au prezentat 100% tumorigeneză. Acest mecanism de rezistență durabilă la tumorigeneză este mediat de silențierea bacteriooncogenelor prin intermediul i-ARN și se bazează pe omologia de secvență a ARNm, mai curând, decât pe interacțiunile înalt specifice receptor-ligand, descrise în cazurile tradiționale de rezistență a plantelor la agenți patogeni. Un asemenea mecanism de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
infecție cu Agrobacterium tumefaciens este un proces bistadial în care mai întâi are loc un transfer orizontal de gene (de la bacterie la planta gazdă) urmat de integrarea în genomul celulei gazdă a T-ADN care induce transformarea acesteia cu desfășurarea tumorigenezei în planta gazdă. Transformarea este desfășurată la nivelul unor leziuni din planta gazdă, unde sunt eliberați compuși fenolici declanșatori ai inducției genelor de virulență (vir) dintre care una asigură sinteza enzimei de clivare monocatenară în T-ADN din plasmidul Ti
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
conjugare plasmidic (Escobar și colab., 2001). T-ADN este integrat în genomul nuclear al celulei gazdă. În ciuda organizării lor procariote (structură nemozaicată, fără introni), genele din T-ADN sunt exprimate în nucleul celulei gazdă dirijând sinteza unor proteine care inițiază tumorigeneza, creând un mediu potrivit creșterii bacteriei și conjugării interbacteriene a plasmidului Ti. În celulele plantelor infectate sunt exprimate două categorii de gene din T-ADN: genele pentru sinteza opinelor și bacteriooncogenele. Sinteza opinelor dirijează producția de noi metaboliți numiți opine
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
a T-ADN reprezintă „secvența miez” deoarece ea prezintă înaltă omologie de secvență printre toate sușele virulente de A. tumefaciens. Escobar și colaboratorii (2001) au pus la punct o strategie de combatere a cancerului de colet la plantele de cultură (tumorigeneză) prin utilizarea interferenței ARN (iARN) vizând silențierea bacteriooncogenelor iaaM și ipt. Oncogena iaaM codifică pentru o triptofanmonooxigenază care convertește triptofanul în indolacetamidă - precursorul auxinei. Oncogena ipt codifică pentru enzima care catalizează condensarea AMP și izopentenilpirofosfatului spre a se forma citokinin
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
thaliana și la tomate (Lycopersicon esculentum) cu ajutorul unui construct transgenic desemnat să genereze transcripte autocomplementare pentru iaaM și ipt. Linile transgenice rezultate și-au păstrat susceptibilitatea la transformarea indusă de Agrobacterium dar, în unele cazuri, au fost înalt refractare la tumorigeneză. Constructul autocomplementar ipt a fost creat prin fuzionarea unei copii sens a ipt - 20W - 5A pentru 45-627 perechi de nucleotide cu un fragment identic cu orientare antisens. Cele două fragmente ipt complementare au fost separate de o regiune de ADN
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
promotorii virusului mozaicului conopidei. Deși A. tumefaciens prezintă o mare diversitate în organizarea structurală a ADN genomic și a plasmidului Ti, la diferitele sușe virulente, toate acestea prezintă oncogene care manifestă o mare omologie de organizare și funcționare în inducerea tumorigenezei la plante. Escobar și colaboratorii (2001) au valorificat aceste particularități genomice spre a obține rezistență la tumorigeneza de colet, prin țintirea oncogenelor iaaM și ipt pe calea silențierii genice mediate de iARN. Căile biosintezei endogene de fitohormoni pot include reacții
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
și a plasmidului Ti, la diferitele sușe virulente, toate acestea prezintă oncogene care manifestă o mare omologie de organizare și funcționare în inducerea tumorigenezei la plante. Escobar și colaboratorii (2001) au valorificat aceste particularități genomice spre a obține rezistență la tumorigeneza de colet, prin țintirea oncogenelor iaaM și ipt pe calea silențierii genice mediate de iARN. Căile biosintezei endogene de fitohormoni pot include reacții care sunt analoage biochimic cu cele catalizate de iaaM și ipt, neexistând gene în genomul vegetal care
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
deosebit principial de acelea ale plantelor martor. Plante tinere de tomate transgenice (A) și de tip sălbatic (B) au fost infectate cu A. tumefaciens 25W-5A prin injectare în tulpină a unei cantități mici de suspensie bacteriană la nivelul unei răni. Tumorigeneza a fost evaluată după cinci săptămâni de la inoculare. La locul injectării acestei suspensii au apărut tumori mari (marcate cu o săgeată) pe plante de tip sălbatic, nu însă și pe planta transgenică, ceea ce denotă în acest din urmă caz, supresia
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
a fost evaluată după cinci săptămâni de la inoculare. La locul injectării acestei suspensii au apărut tumori mari (marcate cu o săgeată) pe plante de tip sălbatic, nu însă și pe planta transgenică, ceea ce denotă în acest din urmă caz, supresia tumorigenezei. În imaginile de jos sunt redate fotografiile rădăcinilor de Arabidopsis, prelevate de la plante transgenice (C) și de tip sălbatic (D) inoculate cu Agrobacterium tumefaciens A208 crescute in vitro. Tumorigeneza a fost evaluată după cinci săptămâni de la inoculare. Pot fi observate
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
pe planta transgenică, ceea ce denotă în acest din urmă caz, supresia tumorigenezei. În imaginile de jos sunt redate fotografiile rădăcinilor de Arabidopsis, prelevate de la plante transgenice (C) și de tip sălbatic (D) inoculate cu Agrobacterium tumefaciens A208 crescute in vitro. Tumorigeneza a fost evaluată după cinci săptămâni de la inoculare. Pot fi observate tumori de tip teratoame mari pe radicelele prelevate de la plantele de tip sălbatic (stânga), nu însă și pe cele provenite de la plantele transgenice (dreapta), ceea ce este un indiciu de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
evaluată după cinci săptămâni de la inoculare. Pot fi observate tumori de tip teratoame mari pe radicelele prelevate de la plantele de tip sălbatic (stânga), nu însă și pe cele provenite de la plantele transgenice (dreapta), ceea ce este un indiciu de supresie a tumorigenezei (din Escobar și colab., 2001). Identificarea posibilelor plante rezistente s-a realizat prin efectuarea de infecții cu A. tumefaciens biovar I, în analize de laborator. Transformanții de Arabidopsis au fost inoculați in vitro la nivelul rădăcinilor cu A. tumefaciens A
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
fost inoculați in vitro la nivelul rădăcinilor cu A. tumefaciens A 208, pe când la tomate s-a realizat inoculare la nivelul tulpinii cu sușa A. tumefaciens 20W-5A. Trei dintre cele șase plante de Arabidopsis transformate au prezentat abolirea completă a tumorigenezei (fig. 33.8). Multe plante transformate au prezentat un fenotip de silențiere caracteristic exprimării ARN autocomplementar. De remarcat că două ținte ARN diferite au fost silențiate simultan cu o mare eficiență (Chuang și Meyerowitz, 2000; Smith și colab., 2000; Waterhouse
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
experimental s-a realizat și la tomate, constatându-se apariția de tumori nediferențiate la toate plantulele de tip sălbatic inoculate, în timp ce linia transformată 01/6 a fost complet rezistentă la toate sușele de A. tumefaciens testate, cu anularea completă a tumorigenezei. Această linie a prezentat totodată o cosegregare perfectă (100%) între activitatea GUS și manifestarea condiției patologice, pe de o parte, și absența activității GUS și susceptibilitatea la tumorigneeză, pe de altă parte. Toate plantele din linia T1 01/1 de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
GUS și manifestarea condiției patologice, pe de o parte, și absența activității GUS și susceptibilitatea la tumorigneeză, pe de altă parte. Toate plantele din linia T1 01/1 de tomate au prezentat activitate GUS, exprimând în proporție de 25,3% tumorigeneză. Această linie a prezentat trei evenimente independente de inserție a T-ADN, cel puțin unul dintre ele fiind capabil de expresie GUS. Linia aceasta a exprimat în medie 25,3% tumorigeneză, dar a fost incapabilă de inițiere a silențierii oncogenelor
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
prezentat activitate GUS, exprimând în proporție de 25,3% tumorigeneză. Această linie a prezentat trei evenimente independente de inserție a T-ADN, cel puțin unul dintre ele fiind capabil de expresie GUS. Linia aceasta a exprimat în medie 25,3% tumorigeneză, dar a fost incapabilă de inițiere a silențierii oncogenelor. Există alternativa ca un număr mare de copii ale transgenei la indivizii specifici T1 să poată realiza silențierea transcripțională a promotorului virusului mozaicului conopidei care dirijează constructele silențiate. Atât pentru Arabidopsis
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]