2,677 matches
-
măsoară în două eprubete câte 2 ml filtrat. Într-una din eprubete se execută reacția Molisch în modul următor: peste filtrat se adaugă 5 picături alfa-naftol și 3 ml H2SO4 concentrat, care se lasă să curgă pe peretele interior al eprubetei. La nivelul de separație dintre cele două soluții se formează un inel de culoare violet. În cealaltă eprubetă se execută reacția Fehling. Se neutralizează filtratul cu NaOH 10 %, se adaugă 1 ml Fehling I și 1 ml Fehling II. La
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
următor: peste filtrat se adaugă 5 picături alfa-naftol și 3 ml H2SO4 concentrat, care se lasă să curgă pe peretele interior al eprubetei. La nivelul de separație dintre cele două soluții se formează un inel de culoare violet. În cealaltă eprubetă se execută reacția Fehling. Se neutralizează filtratul cu NaOH 10 %, se adaugă 1 ml Fehling I și 1 ml Fehling II. La încălzire apare un precipitat roșu cărămiziu de oxid cupros (Cu2O). 5.4.1.2.Recunoașterea bazelor azotate Principiul
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
a c t i v i: *Benzidină pură; * Acid acetic glacial; *H2O2 3 %; * Soluție de peroxidază sanguină: se diluează 2 - 3 picături de sânge proaspăt recoltat cu aproximativ 5 cm3 de apă distilată. Mod de lucru: Se introduc într-o eprubetă câteva cristale de benzidină.Se adaugă 1 - 2 cm3 acid acetic glacial. După dizolvarea benzidinei se adaugă 7-8 picături de H2O2 (substrat). Ulterior, se adaugă 4 - 5 picături de sânge diluat. Se agită. Se procedează în mod identic, folosind însă
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
completă a amidonului. Activitatea enzimatică este invers proporțională cu timpul de hidroliză. R e a c t i v i: * Soluție de amidon 1 % * Soluție de iod în iodură de potasiu 0,3 % * Amilază salivară: se colectează salivă într o eprubetă; după filtrare se diluează în raportul 1/10 cu apă distilată * Reactiv Fehling (I, II) Mod de lucru: Intr-o eprubetă se măsoară 10 cm3 soluție de amidon și se incubează minute într-o baie de apă la temperatura de
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
de amidon 1 % * Soluție de iod în iodură de potasiu 0,3 % * Amilază salivară: se colectează salivă într o eprubetă; după filtrare se diluează în raportul 1/10 cu apă distilată * Reactiv Fehling (I, II) Mod de lucru: Intr-o eprubetă se măsoară 10 cm3 soluție de amidon și se incubează minute într-o baie de apă la temperatura de 370C. Se adaugă 0,5 cm3 soluție de amilază, se omogenizează și se introduce din nou în baia de apă. Din
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
activității amilazei salivare la temperatura de 370C se bazează pe procedeul menționat anterior. Pentru evidențierea efectului temperaturii de 600C asupra activității enzimatice se procedează identic, dar în condiții de inactivare termică a enzimei.Soluția de amilază salivară conținută într-o eprubetă se menține câteva minute pe o baie de apă la temperatura de 600C înainte de a fi pusă în contact cu substratul de reacție, și anume, cu soluția de amidon. Se efectuează reacția cu iodul și reacția Fehling. Rezultate și interpretare
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
2 Tampon fosfați pH=6,8 Tampon fosfați pH=8,2 5,0 2,0 5,0 2,0 5,0 2,0 Se incubează 5 minute la 370C Ulterior se adaugă: Amilază salivară 0,5 0,5 0,5 Eprubetele conținând probele respective se mențin pe baie de apă la 370C. La intervale de timp diferite (3, 5, 7, 15, 20 de minute) se colectează probe de câte 1 cm3. Se adaugă la fiecare probă 2 picături de soluție de
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
diluată 1 /10). Mod de lucru Se realizează următoarea schemă experimentală: Soluții Probă (cm3) Martor (cm3) Amidon Tampon fosfați pH=6,8 NaCl Apă distilată Se incubează 5 minute la 370C. Ulterior se adaugă: Amilază salivară 0,5 0,5 Eprubetele se mențin pe baie de apă la 370C. Se efectuează reacția cu iodul după procedeul descris anterior. Interpretarea rezultatelor In proba care conține ioni de clor (NaCl) se constată că hidroliza enzimatică a amidonului decurge rapid, α amilaza manifestând o
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
se bazează pe proprietatea pe care o au provitaminele D de a da în prezența anumitor reactici diferite culori. Reacția Liebermann-Burchard Reactivi * Soluție cloroformică de provitamină D 0,5 %; * Acetaldehidă; * Acid sulfuric concentrat. Mod de lucru Se iau într-o eprubetă 1-2 ml soluție cloroformică de provitamină D și se adaugă pe rând 1 ml aldehidă acetică și 3-4 picături acid sulfuric conc. Se obține la început o culoare roșie care virează ușor spre violet, iar în final în verde. Reacția
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
conc. Se obține la început o culoare roșie care virează ușor spre violet, iar în final în verde. Reacția Rosenheim Reactivi * Soluție cloroformică de provitamina D 0,5 %; * Soluție de acid tricloracetic 10 %. Mod de lucru Se iau într-o eprubetă 1-2 ml soluție cloroformică de provitamină D și se adaugă 1 ml soluție de acid tricloracetic. Apare o colorație roșie care virează încet în albastru-deschis. 7.5.3. Identificarea vitaminelore D Principiul metodei Vitaminele D, în prezența anilinei și acidului
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
Principiul metodei Vitaminele D, în prezența anilinei și acidului clorhidric, dau o culoare roșie. Reactivi * soluție uleioasă de vitamina D farmaceutică (600000 U.I.) / untură de pește; * soluție acid clorhidric concentrat-alanină (1:1); Mod de lucru Se ia într-o eprubetă 1 ml din soluția vitaminică și se tratează cu câteva picături din soluția de acid clorhidric-alanină. Apare o colorație roșie, atât cu soluția de vitamină pură cât și cu untura de pește. 7.5.4. Identificarea vitaminei A Principiul metodei
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
și nu dau indicații corecte asupra activității biologice. Reactivi *soluție uleioasă de vitamina A (30000 U.I. / 1 ml); * soluție cloroformică de acid tricloracetic: acid tricloracetic 30,09 g și cloroform 100 ml. Mod de lucru Se iau într-o eprubetă 4-5 picături de soluție de vitamină A și se adaugă 1 ml din soluția cloroformică acidă. La început apare o colorare galbenă care ulterior trece în albastru. 7.56.5. Identificarea vitaminelor E Principiul metodei Reacțiile chimice pentru recunoașterea vitaminelor
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
bazează pe proprietatea tocoferolilor de a se oxida în prezența acidului azotic cu formarea unei culori roșii. Reactivi * soluție uleioasă de vitamină E (vitamină farmaceutică 0,3 mg / 1 ml); acid azotic concentrat. Mod de lucru Se iau într-o eprubetă 10 picături de soluție uleioasă de vitamină E și se titrează cu acid azotic. Se încălzește și apoi se dezvoltă imediat o culoare roșie datorită apariției unui compus cu structură chinonică. Metoda este rapidă dar are dezavantajul că este pozitivă
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
leucoderivat nefluorescent. Reacția este reversibilă, produsul redus se poate reoxida prin simpla agitare la aer. Reactivi * soluție de vitamina B2 (produs farmaceutic / 2 mg fiolă); * pulbere de fier; * soluție diluată de acid clorhidric; Mod de lucru Se ia într-o eprubetă 1 ml din soluția de riboflavină și se observă fluorescența galben-verzuie. Se adaugă o mică cantitate de pulbere de fier și 1-2 ml soluție de acid clorhidric. Fluorescența dispare datorită reducerii substanței. Se astupă eprubeta cu degetul și se agită
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
lucru Se ia într-o eprubetă 1 ml din soluția de riboflavină și se observă fluorescența galben-verzuie. Se adaugă o mică cantitate de pulbere de fier și 1-2 ml soluție de acid clorhidric. Fluorescența dispare datorită reducerii substanței. Se astupă eprubeta cu degetul și se agită. Soluția își recapată fluorescența inițială datorită oxidării substanței sub acțiunea oxigenului atmosferic. 7.7.ÎNTREBĂRI RECAPITULATIVE 1. Să se indice vitaminele care participă la procesele de oxidoreducere. 2. Să se denumească vitamina a cărei coenzimă
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
formele moleculare ale receptorilor, din date de viteza de sedimentare ale proteinelor, în funcție de densitatea și masa moleculară. În mod uzual, întâi, citosolul este incubat cu ligand radiomarcat (steroid, de concentrație standard) cu și fără competitor, apoi este supus centrifugării în eprubete de centrifugă în care se realizează gradienți de soluție de sucroză (soluțiile de sucroză sunt medii de suspendare care nu influențează structura organitelor celulare și nu interferă cu funcțiile pe care acestea le au in vivo, cu proprietățile de vâscozitate
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
încălzirii). Toate operațiile ulterioare au fost efectuate la 5C. Omogenatul a fost centrifugat la o centrifugă Janetzki 10 minute, la 1900 rpm, pentru separarea nucleilor. După centrifugare, a fost aspirat stratul lipidic, iar apoi supernatantul a fost transferat într-o eprubetă de ultracentrifugă și supus operației de centrifugare într-o ultracentrifugă de tip Beckman, la 35000 rpm (rotații pe minut), timp de 30 min. Supernatantul, reprezentând citosolul a fost colectat, iar sedimentul îndepărtat. Dacă nu a fost utilizat imediat, citosolul a
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
apoi radioactivitatea a complexului ternar anticorp adsorbit / antigen (pS2) / anticorp marcat, care este proporțională cu concentrația inițială a pS2. Kitul de reactivi ce se păstrează la 4C până la utilizare a inclus: anticorpi monoclonali anti-pS2 umană; anticorpii sunt fixați pe fundul eprubetei de determinare; anticorpi monoclonali anti-pS2 marcați cu I-125; flaconul conține și proteine animale, azidă de sodiu, colorant (de culoare roșie), imunoglobuline de șoarece ne-imunizate; soluții standard: 0, 200, 400, 800, 1400, 2200 pg/ml; proteină de control (conține
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
control (conține proteine animale și pS2 umană) 700 pg/ml; diluant; conține: tampon, proteine animale și conservanți. Materiale și aparatură utilizate: Micropipete reglabile Gilson sau Finipette cu volume cuprinse între 1 ÷ 20 ml, 10 200 ml și 200 1000 ml; eprubete și „vials”-uri (eprubete închise) de 2 ml, de unică folosință, de tip Eppendorf; centrifugă de tip Janetzky K26 și ultracentrifugă de tip Beckman L8-80; omogenizatoare de tip Vortex sau cu cuțite; spectrofotometru de tip Specord M40; spectrometru de radiații
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
și pS2 umană) 700 pg/ml; diluant; conține: tampon, proteine animale și conservanți. Materiale și aparatură utilizate: Micropipete reglabile Gilson sau Finipette cu volume cuprinse între 1 ÷ 20 ml, 10 200 ml și 200 1000 ml; eprubete și „vials”-uri (eprubete închise) de 2 ml, de unică folosință, de tip Eppendorf; centrifugă de tip Janetzky K26 și ultracentrifugă de tip Beckman L8-80; omogenizatoare de tip Vortex sau cu cuțite; spectrofotometru de tip Specord M40; spectrometru de radiații de tip Beckman 9000
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
în kitul de reactivi. Se reconstituie „standardale” și "controlul", cu 15 minute înainte de utilizare; ca și probele de citosol, "controlul" se diluează 1/20. Toate operațiunile de dozare se efectuează la temperatura camerei. Un experiment include mai multe seturi de „eprubete”: eprubete „standard 0”, pentru determinarea legării nespecifice; eprubete „standard” pentru stabilirea „curbei etalon”; eprubete pentru „control”; eprubete pentru „probe”. De obicei se lucrează în triplicat pentru standarde și în duplicat pentru control și probe. Dozarea propriu-zisă constă în următoarele operațiuni
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
kitul de reactivi. Se reconstituie „standardale” și "controlul", cu 15 minute înainte de utilizare; ca și probele de citosol, "controlul" se diluează 1/20. Toate operațiunile de dozare se efectuează la temperatura camerei. Un experiment include mai multe seturi de „eprubete”: eprubete „standard 0”, pentru determinarea legării nespecifice; eprubete „standard” pentru stabilirea „curbei etalon”; eprubete pentru „control”; eprubete pentru „probe”. De obicei se lucrează în triplicat pentru standarde și în duplicat pentru control și probe. Dozarea propriu-zisă constă în următoarele operațiuni: se
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
controlul", cu 15 minute înainte de utilizare; ca și probele de citosol, "controlul" se diluează 1/20. Toate operațiunile de dozare se efectuează la temperatura camerei. Un experiment include mai multe seturi de „eprubete”: eprubete „standard 0”, pentru determinarea legării nespecifice; eprubete „standard” pentru stabilirea „curbei etalon”; eprubete pentru „control”; eprubete pentru „probe”. De obicei se lucrează în triplicat pentru standarde și în duplicat pentru control și probe. Dozarea propriu-zisă constă în următoarele operațiuni: se adaugă câte 200 l de soluție de
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
ca și probele de citosol, "controlul" se diluează 1/20. Toate operațiunile de dozare se efectuează la temperatura camerei. Un experiment include mai multe seturi de „eprubete”: eprubete „standard 0”, pentru determinarea legării nespecifice; eprubete „standard” pentru stabilirea „curbei etalon”; eprubete pentru „control”; eprubete pentru „probe”. De obicei se lucrează în triplicat pentru standarde și în duplicat pentru control și probe. Dozarea propriu-zisă constă în următoarele operațiuni: se adaugă câte 200 l de soluție de anticorp monoclonal anti pS2-I-125 în toate
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
de citosol, "controlul" se diluează 1/20. Toate operațiunile de dozare se efectuează la temperatura camerei. Un experiment include mai multe seturi de „eprubete”: eprubete „standard 0”, pentru determinarea legării nespecifice; eprubete „standard” pentru stabilirea „curbei etalon”; eprubete pentru „control”; eprubete pentru „probe”. De obicei se lucrează în triplicat pentru standarde și în duplicat pentru control și probe. Dozarea propriu-zisă constă în următoarele operațiuni: se adaugă câte 200 l de soluție de anticorp monoclonal anti pS2-I-125 în toate eprubetele; se adaugă
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]