10,649 matches
-
în art. 5 alin. (4) și de retragere a autorizației; (b) tratarea cărnii de pasăre cu substanțe care ar putea face consumul de carne de pasăre nociv și periculos pentru sănătatea umană, precum și îngurgitarea de către păsări a unor substanțe ca: antibiotice, estrogen, substanțe tireostatice, de frăgezire, pesticide, erbicide sau alte substanțe cu conținut de arsen sau antimoniu; (c) adăugarea altor substanțe în carnea proaspătă de pasăre , precum și tratamentul prin raze ionizante sau ultraviolete. Articolul 7 Prezenta directivă nu afectează căile de
jrc120as1971 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85255_a_86042]
-
de stabilire a unor metode comunitare de analiză pentru controlul oficial al furajelor sunt aplicabile metodelor descrise în anexa I la prezenta directivă. Articolul 2 Statele membre solicită ca analizele pentru controalele oficiale ale furajelor, în scopul detectării și identificării antibioticelor din grupul tetraciclinei și, de asemenea, pentru determinarea nivelurilor de clorotetraciclină, oxitetraciclină, tetraciclină, oleandomicină, tirozină și virginiamicină din furaje să fie realizate folosindu-se metodele descrise în anexa II la prezenta directivă. Dispozițiile generale prevăzute în partea 1 (Introducere) din
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
în valoare absolută, pentru conținutul de gossypol de nu mai puțin de 500 ppm și nu mai mult de 750 ppm; - 10 %, în valoare relativă, pentru conținutul de gossypol mai mare de 750 ppm. ANEXA II 1. DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA ANTIBIOTICELOR DIN GRUPUL TETRACICLINELOR 1. Obiectiv și domeniu de aplicare Această metodă face posibilă detectarea și identificarea antibioticelor din grupul tetracicline în furajele conținând cel puțin 0,1 ppm de antibiotice, în concentrații și în amestecuri. 2. Principiu Proba este extrasă
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
mult de 750 ppm; - 10 %, în valoare relativă, pentru conținutul de gossypol mai mare de 750 ppm. ANEXA II 1. DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA ANTIBIOTICELOR DIN GRUPUL TETRACICLINELOR 1. Obiectiv și domeniu de aplicare Această metodă face posibilă detectarea și identificarea antibioticelor din grupul tetracicline în furajele conținând cel puțin 0,1 ppm de antibiotice, în concentrații și în amestecuri. 2. Principiu Proba este extrasă cu un amestec de metanol și acid clorhidric. Extrasul și soluțiile de referință pentru comparație sunt supuse
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
mare de 750 ppm. ANEXA II 1. DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA ANTIBIOTICELOR DIN GRUPUL TETRACICLINELOR 1. Obiectiv și domeniu de aplicare Această metodă face posibilă detectarea și identificarea antibioticelor din grupul tetracicline în furajele conținând cel puțin 0,1 ppm de antibiotice, în concentrații și în amestecuri. 2. Principiu Proba este extrasă cu un amestec de metanol și acid clorhidric. Extrasul și soluțiile de referință pentru comparație sunt supuse cromatografiei ascendente pe hârtie. Antibioticele sunt detectate și identificate prin comparația valorilor Rf
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
furajele conținând cel puțin 0,1 ppm de antibiotice, în concentrații și în amestecuri. 2. Principiu Proba este extrasă cu un amestec de metanol și acid clorhidric. Extrasul și soluțiile de referință pentru comparație sunt supuse cromatografiei ascendente pe hârtie. Antibioticele sunt detectate și identificate prin comparația valorilor Rf cu acelea ale substanțelor standard, fie prin fluorescență în lumină UV (conținut ridicat de antibiotice) sau prin bioautografie într-un mediu de geloză inoculat cu B cereus. 3. Reactivi și mediul de
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
metanol și acid clorhidric. Extrasul și soluțiile de referință pentru comparație sunt supuse cromatografiei ascendente pe hârtie. Antibioticele sunt detectate și identificate prin comparația valorilor Rf cu acelea ale substanțelor standard, fie prin fluorescență în lumină UV (conținut ridicat de antibiotice) sau prin bioautografie într-un mediu de geloză inoculat cu B cereus. 3. Reactivi și mediul de cultură 3.1 Soluție tampon, pH 3,5 Acid citric monohidrat A.R. 10,256 g Difosfat de sodiu Na2HPO4 ·2H2O A.R.
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
detectarea prin bioautografie Se diluează soluțiile (5.1) cu soluția tampon de fosfat (3.2) pentru a obține soluții cu concentrații corespunzătoare la 5 μg per ml de Clorotetraciclină-HCl, de oxitetraciclină-HCl și de tetraciclină-HCl. 6. Extracția Când conținutul presupus de antibiotic este mai mic de 10 ppm, fie proba omogenizată sau fracțiunea cea mai fină separată prin sită pot fi folosite, antibioticele putând fi găsite în principal în această fracțiune. Se suspendă proba în amestec (3.5) și se centrifughează. Se
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
corespunzătoare la 5 μg per ml de Clorotetraciclină-HCl, de oxitetraciclină-HCl și de tetraciclină-HCl. 6. Extracția Când conținutul presupus de antibiotic este mai mic de 10 ppm, fie proba omogenizată sau fracțiunea cea mai fină separată prin sită pot fi folosite, antibioticele putând fi găsite în principal în această fracțiune. Se suspendă proba în amestec (3.5) și se centrifughează. Se colectează lichidul supernatant și se folosește direct sau diluat, dacă este necesar, cu amestecul (3.5) pentru a obține concentrații ale
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
putând fi găsite în principal în această fracțiune. Se suspendă proba în amestec (3.5) și se centrifughează. Se colectează lichidul supernatant și se folosește direct sau diluat, dacă este necesar, cu amestecul (3.5) pentru a obține concentrații ale antibioticelor de aproximativ 100 μg pe ml (6.1) și 5 μg pe ml (6.2). 7. Detectarea și identificarea 7.1 Cromatografia Se scufundă hârtia în soluția tampon, pH 3,5 (3.1). se îndepărtează excesul de lichid prin presarea
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
bioautografie și solventul II (3.4) pentru detectarea prin lumină UV. Când nivelul solventului a urcat până la 15 - 20 cm (aprox. 1 oră 30 minute), se oprește cromatografia și se usucă hârtia. 7.2 Detectarea prin lumină UV Dacă nivelul antibioticului este mai mare de 1 μg per cm2, după ce cromatograma a fost tratată cu vapori de amoniac (3.7) sunt observate iradiații fluorescente galbene auriu sub lumină UV (4.4). 7.3 Detectarea prin bioautografie Se toarnă mediul de cultură
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
plasează în mediul de cultură. După 5 minute de contact, se detașează hârtia și se plasează pe un alt loc din mediul de cultură, unde rămâne în timpul perioadei de incubație. Se incubează apoi peste noapte la 30ș C. Dacă un antibiotic din grupul tetraciclină este prezent, apar zone de inhibiție slabe în mediul neclar de cultură. Pentru a fixa cromatograma, soluția (3.11) este vaporizată pe hârtie, după incubație. 7.4 Identificare Valorile relative Rf ale antibioticelor din grupul tetraciclinei sunt
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
30ș C. Dacă un antibiotic din grupul tetraciclină este prezent, apar zone de inhibiție slabe în mediul neclar de cultură. Pentru a fixa cromatograma, soluția (3.11) este vaporizată pe hârtie, după incubație. 7.4 Identificare Valorile relative Rf ale antibioticelor din grupul tetraciclinei sunt date mai jos. Aceste valori pot varia ușor în funcție de calitatea hârtiei și conținutul de umiditate: Clorotetraciclină(CTC) 0,60 Tetraciclină(TC) 0,40 Oxitetraciclină(OTC) 0,20 4-epi-CTC 0,15 4-epi-TC 0,13 4-epi-OTC 0,10
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
mai mare de 50 ppm, se extrage cu un amestec de acetonă, apă și acid clorhidric, pentru determinarea CTC, și cu un amestec de metanol și acid clorhidric pentru determinarea OTC și a TC. Extrasele sunt apoi diluate și activitatea antibioticele lor este determinată prin măsurarea difuziei CTC, OTC sau TC pe un mediu de geloză însămânțat cu B cereus. Difuzia este evidențiată prin formarea zonele de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
antibioticele lor este determinată prin măsurarea difuziei CTC, OTC sau TC pe un mediu de geloză însămânțat cu B cereus. Difuzia este evidențiată prin formarea zonele de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului. 3. Microorganismele: B cereus, ATTC nr. 11.778 3.1 Menținerea sușei părinte Se inoculează cu B cereus un tub de geloză luat dintr-un mediu de cultură (4.1) fără metilen albastru și acid boric .Se incubează peste noapte
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
si se omogenizează. Această suspensie se păstrează în frigider timp de cel puțin 5 luni. Prin teste preliminare asupra talerelor de sticlă cu mediul de bază pentru determinare (4.1), se stabilește cantitatea de inoculum care, pentru diferitele concentrații de antibiotice folosite, dă cele mai întinse zone de inhibiție posibile care încă mai sunt clare. Această cantitate este de obicei între 0,2 și 0,3 per 1 000 ml. Mediul de cultură este inoculat între 50 și 60ș C. 4
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
Concentrația formamidă a acestei soluții nu trebuie să depășească 40 %. Se centrifughează sau se decantează pentru a obține o soluție clară. Apoi se prepară concentrațiile U4, U2 șiU1 prin diluări succesive (1 + 1) folosind soluție tampon de fosfat (4.3). Antibiotic CTC OTC TC Conținut presupus de ppm 10 50 10 50 10 50 Proba test în g 10 10 24 9,6 20 10 ml de formamidă(4.8) 100 100 80 100 80 100 ml de soluție tampon de
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
de extract și se completează până la 100 ml într-o balon gradat cu soluție tampon, 6.2 Conținut mai mare decât 50 ppm 6.2.1 Clorotetracilcină Pentru o probă de test de 2 - 10 g, în funcție de conținutul presupus de antibiotic al probei sau de garanția ei de manufacturare, se adaugă de 20 ori volumul său de amestec (4.9). Se agită 30 minute pe o platformă de agitare. pH-ul trebuie să rămână sub 3 în timpul extracției; dacă este necesar
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
talere de sticlă netede prevăzute cu un inel perfect nivelat de aluminiu sau de plastic, 200 mm diametru și 20 mm înălțime. Se pun cu pipeta în găuri cantități exact măsurate între 0,10 și 0,15 de soluție de antibiotic, în funcție de diametrul găurii. Pentru fiecare probă, se repetă difuzia de cel puțin 4 ori cu exact aceeași concentrație astfel încât fiecare determinare să cuprindă o evaluare de 32 de zone de inhibiție. 7.3 Incubația Se incubează tăvile aproximativ 18 ore
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
metanol și acid clorhidric pentru determinarea OTC și TC. Extractele sunt apoi diluate și efectele antibioticelor sunt determinate prin măsurarea transmisiei luminii a unui mediu de cultură care a fost însămânțat cu Staphylococus aureus și la care s-a adăugat antibioticul. Transmisia luminii depinde de concentrația de antibiotic. 3. Microorganisme: Staphylococus aureus K 1411 3.1 Menținerea sușei parentale Se inoculează cu S. aureus într-un tub de geloză luat din mediul de cultură (4.1), la care s-a adăugat
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
și TC. Extractele sunt apoi diluate și efectele antibioticelor sunt determinate prin măsurarea transmisiei luminii a unui mediu de cultură care a fost însămânțat cu Staphylococus aureus și la care s-a adăugat antibioticul. Transmisia luminii depinde de concentrația de antibiotic. 3. Microorganisme: Staphylococus aureus K 1411 3.1 Menținerea sușei parentale Se inoculează cu S. aureus într-un tub de geloză luat din mediul de cultură (4.1), la care s-a adăugat 1,5 - 3 % de geloză (în funcție de calitate
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
rapidă a 1 ml de soluție de formaldehidă (4.6) în fiecare tub. 7.5 Măsurarea creșterii Se măsoară transmisia cu fotometrul la 590 nm, fixând aparatul la transmisia de 100 % în soluția standard cea mai clară (corespunzând conținutului de antibiotic cel mai mare). Din moment ce tuburile arată mici diferențe de turbiditate, ar trebui să fie folosite celule de cel puțin 2 cm, preferabil de 5 cm. 8. Calcularea rezultatelor Se trasează curba de calibrare pe graficul de pe hârtia milimetrică prin așezarea
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
diferențe de turbiditate, ar trebui să fie folosite celule de cel puțin 2 cm, preferabil de 5 cm. 8. Calcularea rezultatelor Se trasează curba de calibrare pe graficul de pe hârtia milimetrică prin așezarea în grafic a transmisiilor fotometrice față de concentrațiile antibioticelor. Se interpolează pe curbă valorile de transmisie ale extractelor. Se calculează conținutul de antibiotice al probei. 9. Repetabilitatea Diferența dintre rezultatele celor două determinări paralele efectuate asupra probei nu trebuie să depășească 10 % în valoarea relativă. 3. DETERMINAREA OLEANDOMICINEI - prin
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
preferabil de 5 cm. 8. Calcularea rezultatelor Se trasează curba de calibrare pe graficul de pe hârtia milimetrică prin așezarea în grafic a transmisiilor fotometrice față de concentrațiile antibioticelor. Se interpolează pe curbă valorile de transmisie ale extractelor. Se calculează conținutul de antibiotice al probei. 9. Repetabilitatea Diferența dintre rezultatele celor două determinări paralele efectuate asupra probei nu trebuie să depășească 10 % în valoarea relativă. 3. DETERMINAREA OLEANDOMICINEI - prin difuzia pe geloză - 1. Obiectiv și domeniu de aplicare Această metodă face posibilă, chiar
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
conținutul de oleandomicină în furaje, concentrate și preamestecuri, unde sunt prezenți mai mult de 0,5 ppm. 2. Principiu Proba este extrasă cu soluție de metanol diluată de tri(hidroximetilamino)metan. După centrifugare, extractul este diluat și este determinată activitatea antibioticului său prin măsurarea difuziei oleandomicinei în mediul geloză însămânțat cu B. cereus. Difuzia este făcută vizibilă de formarea unor zone de inhibiție în prezența microorganismului. Diametrul acestor zone este direct proporțional cu logaritmul concentrației antibioticului. 3. Microorganisme: B. cereus K
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]