3,074 matches
-
să determine însă denaturarea enzimei. Principiul metodei Se determină activitatea enzimatică a α-amilazei salivare prin “incubarea” acestei enzime cu o soluție de amidon la două valori de temperatură: 370C (temperatura optimă) și 600 C. Se urmărește evoluția procesului de hidroliză enzimatică prin efectuarea reacției de culoare cu iodul și a reacției Fehling. Reactivi * Soluție de amidon 1 % * Soluție de iod în iodură de potasiu 0,3 % *Amilază salivară: (diluată în raport de 1/10 cu apă distilată) * Reactiv Fehling (I, II
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
diluată în raport de 1/10 cu apă distilată) * Reactiv Fehling (I, II) Mod de lucru Tehnica pentru evidențierea activității amilazei salivare la temperatura de 370C se bazează pe procedeul menționat anterior. Pentru evidențierea efectului temperaturii de 600C asupra activității enzimatice se procedează identic, dar în condiții de inactivare termică a enzimei.Soluția de amilază salivară conținută într-o eprubetă se menține câteva minute pe o baie de apă la temperatura de 600C înainte de a fi pusă în contact cu substratul
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
se constată apariția precipitatului roșu-cărămiziu de Cu2O. 6.8.2.2. Influența pH-ului Enzimele își manifestă activitatea lor catalitică într-un domeniu limitat de pH. Fiecare enzimă prezintă o valoare de pH - denumită pH optim - pentru care activitatea sa enzimatică este maximă. Activitatea enzimelor scade de o parte și de alta a valorii pH-ului optim. Variațiile moderate de pH influențează activitatea enzimatică, respectiv viteza de reacție, prin modificarea stării de ionizare a moleculelor de enzimă, modificare care se repercutează
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
limitat de pH. Fiecare enzimă prezintă o valoare de pH - denumită pH optim - pentru care activitatea sa enzimatică este maximă. Activitatea enzimelor scade de o parte și de alta a valorii pH-ului optim. Variațiile moderate de pH influențează activitatea enzimatică, respectiv viteza de reacție, prin modificarea stării de ionizare a moleculelor de enzimă, modificare care se repercutează asupra afinității enzimelor atât pentru substratul de reacție (complexul enzimă-substrat), cât și pentru anumiți efectori enzimatici. Modificări mai mult sau mai puțin accentuate
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
optim. Variațiile moderate de pH influențează activitatea enzimatică, respectiv viteza de reacție, prin modificarea stării de ionizare a moleculelor de enzimă, modificare care se repercutează asupra afinității enzimelor atât pentru substratul de reacție (complexul enzimă-substrat), cât și pentru anumiți efectori enzimatici. Modificări mai mult sau mai puțin accentuate în raport cu valoarea pH-ului optim determină, de regulă, o diminuare sau chiar o inhibare a activității enzimatice. Principiul metodei Se determină la temperatura optimă (370C) și la valori diferite de pH activitatea amilazei
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
repercutează asupra afinității enzimelor atât pentru substratul de reacție (complexul enzimă-substrat), cât și pentru anumiți efectori enzimatici. Modificări mai mult sau mai puțin accentuate în raport cu valoarea pH-ului optim determină, de regulă, o diminuare sau chiar o inhibare a activității enzimatice. Principiul metodei Se determină la temperatura optimă (370C) și la valori diferite de pH activitatea amilazei salivare, prin măsurarea timpului în care substratul (amidonul) este hidrolizat până la produși ce nu se mai colorează cu iodul (punctul acromic). Se compară activitatea
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
Principiul metodei Se determină la temperatura optimă (370C) și la valori diferite de pH activitatea amilazei salivare, prin măsurarea timpului în care substratul (amidonul) este hidrolizat până la produși ce nu se mai colorează cu iodul (punctul acromic). Se compară activitatea enzimatică cu valorile de pH corespunzătoare și se stabilește pH-ul optim de activitate al amilazei salivare. Reactivi: * Soluție de amidon 1 % (substrat). * Soluție de iod în KI 0,3 %. *Amilază salivară (diluată 1/10). * Soluție de KH2PO4 6,6 · 10-2
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
valorile de pH 5,2 și 8,2 viteza de reacție este redusă, punctul acromic atingându-se în aproximativ 20 de minute. In concluzie, activitatea optimă a amilazei salivare este la pH = 6,8. 6.8.2.3. Influența efectorilor enzimatici Efectorii enzimatici sunt substanțe de natură chimică diferită care modifică activitatea enzimatică, respectiv viteza reacțiilor enzimatice. In funcție de acțiunea pe care o exercită asupra enzimelor, efectorii pot fi activatori și inhibitori. Activatorii sunt efectori care influențează pozitiv activitatea enzimatică pe
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
pH 5,2 și 8,2 viteza de reacție este redusă, punctul acromic atingându-se în aproximativ 20 de minute. In concluzie, activitatea optimă a amilazei salivare este la pH = 6,8. 6.8.2.3. Influența efectorilor enzimatici Efectorii enzimatici sunt substanțe de natură chimică diferită care modifică activitatea enzimatică, respectiv viteza reacțiilor enzimatice. In funcție de acțiunea pe care o exercită asupra enzimelor, efectorii pot fi activatori și inhibitori. Activatorii sunt efectori care influențează pozitiv activitatea enzimatică pe care o
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
redusă, punctul acromic atingându-se în aproximativ 20 de minute. In concluzie, activitatea optimă a amilazei salivare este la pH = 6,8. 6.8.2.3. Influența efectorilor enzimatici Efectorii enzimatici sunt substanțe de natură chimică diferită care modifică activitatea enzimatică, respectiv viteza reacțiilor enzimatice. In funcție de acțiunea pe care o exercită asupra enzimelor, efectorii pot fi activatori și inhibitori. Activatorii sunt efectori care influențează pozitiv activitatea enzimatică pe care o favorizează sau stimulează. Inhibitoriii sunt efectori care diminuează sau anulează
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
-se în aproximativ 20 de minute. In concluzie, activitatea optimă a amilazei salivare este la pH = 6,8. 6.8.2.3. Influența efectorilor enzimatici Efectorii enzimatici sunt substanțe de natură chimică diferită care modifică activitatea enzimatică, respectiv viteza reacțiilor enzimatice. In funcție de acțiunea pe care o exercită asupra enzimelor, efectorii pot fi activatori și inhibitori. Activatorii sunt efectori care influențează pozitiv activitatea enzimatică pe care o favorizează sau stimulează. Inhibitoriii sunt efectori care diminuează sau anulează activitatea enzimatică. In general
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
efectorilor enzimatici Efectorii enzimatici sunt substanțe de natură chimică diferită care modifică activitatea enzimatică, respectiv viteza reacțiilor enzimatice. In funcție de acțiunea pe care o exercită asupra enzimelor, efectorii pot fi activatori și inhibitori. Activatorii sunt efectori care influențează pozitiv activitatea enzimatică pe care o favorizează sau stimulează. Inhibitoriii sunt efectori care diminuează sau anulează activitatea enzimatică. In general, activitatea catalitică a enzimelor este influențată de prezența anumitor ioni în mediul de reacție. Astfel, α-amilaza este activată de anionul Clși este inhibată
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
viteza reacțiilor enzimatice. In funcție de acțiunea pe care o exercită asupra enzimelor, efectorii pot fi activatori și inhibitori. Activatorii sunt efectori care influențează pozitiv activitatea enzimatică pe care o favorizează sau stimulează. Inhibitoriii sunt efectori care diminuează sau anulează activitatea enzimatică. In general, activitatea catalitică a enzimelor este influențată de prezența anumitor ioni în mediul de reacție. Astfel, α-amilaza este activată de anionul Clși este inhibată de prezența unor cationi ca Ag+, Pb2+, Cu2+. 6.8.2.3.1. Influența activatorilor
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
In general, activitatea catalitică a enzimelor este influențată de prezența anumitor ioni în mediul de reacție. Astfel, α-amilaza este activată de anionul Clși este inhibată de prezența unor cationi ca Ag+, Pb2+, Cu2+. 6.8.2.3.1. Influența activatorilor enzimatici Principiul metodei Se determină activitatea amilazei salivare în prezența și în absența ionului de Cl-. Activitatea enzimei este invers proporțională cu timpul în care se atinge nivelul acromic. Reactivi: * Soluție de amidon 1% (substrat). * Soluție tampon fosfați de pH=6
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
se adaugă: Amilază salivară 0,5 0,5 Eprubetele se mențin pe baie de apă la 370C. Se efectuează reacția cu iodul după procedeul descris anterior. Interpretarea rezultatelor In proba care conține ioni de clor (NaCl) se constată că hidroliza enzimatică a amidonului decurge rapid, α amilaza manifestând o activitate maximă în prezența acestor ioni (Cl-). In concluzie, ionii de clor se comportă ca activatori ai amilazei salivare. 6.8.2.3.2. Influența inhibitorilor enzimatici Principiul metodei Se determină activitatea
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
NaCl) se constată că hidroliza enzimatică a amidonului decurge rapid, α amilaza manifestând o activitate maximă în prezența acestor ioni (Cl-). In concluzie, ionii de clor se comportă ca activatori ai amilazei salivare. 6.8.2.3.2. Influența inhibitorilor enzimatici Principiul metodei Se determină activitatea amilazei salivare în prezența și în absența cationului Pb2+; se măsoară timpul necesar atingerii punctului acromic. Reactivi * Soluție de amidon 1% (substrat). * Soluție tampon fosfați de pH=6,8. * Soluție de Pb(NO3)2 1
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
tampon fosfați de pH=6,8. * Soluție de Pb(NO3)2 1 · 10-3 m * Soluție de iod în KI 0,3 %. *Amilaza salivară (diluată 1 /10). Mod de lucru Se realizează aceeși schemă experimentală ca în cazul determinării influenței activatorilor enzimatici, cu deosebire că volumul din soluția de clorură de sodiu se substituie cu același volum dintr-o soluție de azotat de plumb. Interpretarea rezultatelor In proba care conține ionii Pb2+ se constată că viteza de hidroliză enzimatică a amidonului este
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
determinării influenței activatorilor enzimatici, cu deosebire că volumul din soluția de clorură de sodiu se substituie cu același volum dintr-o soluție de azotat de plumb. Interpretarea rezultatelor In proba care conține ionii Pb2+ se constată că viteza de hidroliză enzimatică a amidonului este mult diminuată în comparație cu proba martor. In concluzie, ionii Pb2+ se comportă ca inhibitori ai amilazei salivare, determinând scăderea activității enzimatice (sau chiar inhibarea totală a acesteia la concentrații mai mari de Pb2+). 6.9. TESTE DE AUTOEVALUARE
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
azotat de plumb. Interpretarea rezultatelor In proba care conține ionii Pb2+ se constată că viteza de hidroliză enzimatică a amidonului este mult diminuată în comparație cu proba martor. In concluzie, ionii Pb2+ se comportă ca inhibitori ai amilazei salivare, determinând scăderea activității enzimatice (sau chiar inhibarea totală a acesteia la concentrații mai mari de Pb2+). 6.9. TESTE DE AUTOEVALUARE 1. Enzimele sunt: a). lipide; b). glucide; c). protide; d). polinucleotide. 3. Viteza de reacție este: a). proporțională cu concentrația substratului; b). independentă
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
care conduc reacții reversibile. 4. Coenzime sunt: a). NAD+; b). NADP+; c). FAD; d). acidul dehidroascorbic. Răspunsuri corecte: 1 - c, 2 - b, 3 - a, 4 - a, b, c 6.10. INTREBARI RECAPITULATIVE 1. Să se prezinte factorii care influențează activitatea enzimatică 2. Să se indice denumirea și pH-ul optim a principalelor enzime hidrolitice care participă la procesul de digestie. 3 Se dau următoarele reacții enzimatice: a) b) c) d) e) f) g) h) i) Să se indice la ce clasă
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
a, b, c 6.10. INTREBARI RECAPITULATIVE 1. Să se prezinte factorii care influențează activitatea enzimatică 2. Să se indice denumirea și pH-ul optim a principalelor enzime hidrolitice care participă la procesul de digestie. 3 Se dau următoarele reacții enzimatice: a) b) c) d) e) f) g) h) i) Să se indice la ce clasă aparțin enzimele care catalizează fiecare din reacțiile menționate. 4. Se dau următoarele coenzime: FAD, CoA-SH, NAD+, TPP. Să se indice denumirile acestor coenzime ; și să
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
dependentă de pH, fapt ce rezultă din datele consemnate în următorul tabel pentru o enzimă (E): pH Activitate (unități) pH Activitate (unități) Să se indice pH-ul optim de activitate al enzimei (E) și să se traseze curba dependenței activității enzimatice în funcție de pH pentru valorile date 6. Se dau următoarele reacții enzimatice simbolizate astfel: a) E + S ↔ b) E + S + Inhibitor alosteric ↔ Să se reprezinte prin scheme reacțiile menționate și să se completeze aceste reacții pe baza datelor rezultate din schemele
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
tabel pentru o enzimă (E): pH Activitate (unități) pH Activitate (unități) Să se indice pH-ul optim de activitate al enzimei (E) și să se traseze curba dependenței activității enzimatice în funcție de pH pentru valorile date 6. Se dau următoarele reacții enzimatice simbolizate astfel: a) E + S ↔ b) E + S + Inhibitor alosteric ↔ Să se reprezinte prin scheme reacțiile menționate și să se completeze aceste reacții pe baza datelor rezultate din schemele obținute. Să se comenteze și să se interpreteze cele două tipuri
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
a) E + S ↔ b) E + S + Inhibitor alosteric ↔ Să se reprezinte prin scheme reacțiile menționate și să se completeze aceste reacții pe baza datelor rezultate din schemele obținute. Să se comenteze și să se interpreteze cele două tipuri de reacții enzimatice. 7. Enzimele E1, E2, E3 se caracterizează prin următoarele valori ale Km: Km1= 2,5•10 -3 M, Km2= 4•10 -4 M, Km3= 8•10 -3 M Să se indice care din aceste enzime manifestă o afinitate mai mare
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
concentrația * Pe baza acestor date experimentale: a) Să se traseze reprezentarea Michaelis-Menten b) Să se traseze reprezentarea Lineweaver-Burk c) Să se calculeze valorile Vmax și Km d) Să se compare valorile obținute prin cele două metode grafice. 10. Un extract enzimatic conține 15 mg proteină/ml; 8 μl din acest extract catalizează transformarea a 2 μM de substrat în timp de 1 minut. Să se calculeze: a) concentrația enzimei din extract în unități /ml b) activitatea specifică a enzimei respective. 11
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]