11,436 matches
-
tratament nu acoperă un ciclu celular complet, se aleg timpi de fixare multipli în vederea prelevării eșantioanelor de celule care se găseau în stadii diferite ale ciclului celular în momentul tratamentului, adică G1, S și G2. Recoltarea celulelor: Înainte de recoltare, culturile celulare se tratează o perioadă adecvată cu un inhibitor de fus mitotic. Fiecare cultură se recoltează și se prelucrează separat în vederea preparării cromozomilor. Sunt necesari minim doi timpi de prelevare. Se recomandă ca primul timp să fie după aproximativ un ciclu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
se tratează o perioadă adecvată cu un inhibitor de fus mitotic. Fiecare cultură se recoltează și se prelucrează separat în vederea preparării cromozomilor. Sunt necesari minim doi timpi de prelevare. Se recomandă ca primul timp să fie după aproximativ un ciclu celular, iar cel de-al doilea mai târziu. Acest lucru asigură acoperirea tuturor stadiilor ciclului celular și permite întârzierea ciclului celular. 1.6.3.3. Prepararea cromozomilor Prepararea cromozomilor presupune tratarea celulelor cu soluții hipotone, fixarea, etalarea pe lame și colorarea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
și se prelucrează separat în vederea preparării cromozomilor. Sunt necesari minim doi timpi de prelevare. Se recomandă ca primul timp să fie după aproximativ un ciclu celular, iar cel de-al doilea mai târziu. Acest lucru asigură acoperirea tuturor stadiilor ciclului celular și permite întârzierea ciclului celular. 1.6.3.3. Prepararea cromozomilor Prepararea cromozomilor presupune tratarea celulelor cu soluții hipotone, fixarea, etalarea pe lame și colorarea acestora. Analiza: Pentru depistarea anomaliilor cromozomiale, sunt analizate pe cultură minim 100 de metafaze bine
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
preparării cromozomilor. Sunt necesari minim doi timpi de prelevare. Se recomandă ca primul timp să fie după aproximativ un ciclu celular, iar cel de-al doilea mai târziu. Acest lucru asigură acoperirea tuturor stadiilor ciclului celular și permite întârzierea ciclului celular. 1.6.3.3. Prepararea cromozomilor Prepararea cromozomilor presupune tratarea celulelor cu soluții hipotone, fixarea, etalarea pe lame și colorarea acestora. Analiza: Pentru depistarea anomaliilor cromozomiale, sunt analizate pe cultură minim 100 de metafaze bine etalate. Înainte de analiză, lamele se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
etalarea pe lame și colorarea acestora. Analiza: Pentru depistarea anomaliilor cromozomiale, sunt analizate pe cultură minim 100 de metafaze bine etalate. Înainte de analiză, lamele se codează. Pentru limfocitele umane se analizează doar metafazele care conțin 46 de centromeri. În liniile celulare stabilite se analizează numai metafazele ce conțin ±2 centromeri din numărul modal. În plus, se calculează indicele mitotic sau alți indicatori de citotoxicitate pe parcursul experimentului la fiecare doză. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Aberațiile de tip cromatidian (lacune
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
experimentale: compoziția mediului, concentrația CO2, temperatura de incubare, timpul de incubare, nivelul dozelor, timpul de tratare, durata tratamentului cu inhibitor de fus mitotic și concentrația acestuia, tipul de amestec hepatic enzimatic activator folosit, martorii pozitivi și negativi, - numărul de culturi celulare, - numărul de metafaze analizate (datele se raportează separat pentru fiecare cultură), - indicele mitotic sau alți indicatori de citotoxicitate, - tipul și numărul de aberații raportate separat pentru fiecare cultură tratată sau martor, numărul modal al cromozomilor liniilor celulare stabilite folosite, - evaluarea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
compusul testat o singură dată, la cea mai mare doză tolerată. În prima etapă, probele sunt prelevate la 24 de ore după tratament. Nu mai sunt necesare prelevări ulterioare dacă în acest stadiu rezultatele sunt cert pozitive. Deoarece cinetica ciclului celular poate fi influențată de substanța de testare, se folosește un moment de prelevare precoce și unul tardiv, spațiate în mod convenabil în intervalul 6 - 48 de ore. Pentru alte niveluri suplimentare ale dozei de tratament, probele trebuie luate în intervalul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
martor, - semne de toxicitate pe perioada desfășurării studiului, - evaluarea statistică, - discutarea rezultatelor, - interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală: partea B (punctul D). 4. REFERINȚE BIBLIOGRAFICE Vezi introducerea generală: partea B (punctul E). B12. MUTAGENEZA (TESTUL MICRONUCLEILOR CELULARI) 1. METODĂ 1.1. INTRODUCERE Vezi introducerea generală: partea B (punctul A). 1.2. DEFINIȚIE Vezi introducerea generală: partea B (punctul C). 1.3. SUBSTANȚE DE REFERINȚĂ Nici una. 1.4. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Testul micronucleului este un test in
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
tratament. Pregătirea măduvei osoase Măduva osoasă se obține din ambele oase femurale ale unor animale sacrificate recent, prin clătire cu ser fetal de vițel. Celulele se sedimentează prin centrifugare și se înlătură supernatantul. Se așează pe lame picături din suspensia celulară omogenă și se întind ca frotiu. După uscarea în aer, lamele se colorează. Analiză Lamele se codează înaintea examinării microscopice. Pentru determinarea incidenței micronucleilor, se numără cel puțin 1 000 de eritrocite policromatice pentru fiecare animal. Pentru fiecare animal se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
amestecă cu agar-agar de acoperire și se varsă la suprafața unei cutii de agar-agar selectiv. 1.6.1. Pregătire 1.6.1.1. Bacterii Se cultivă bacteriile la 37șC până la faza exponențială tardivă sau faza staționară precoce a creșterii. Densitatea celulară aproximativă trebuie să fie de 108 - 109 celule/ml. 1.6.1.2. Activare metabolică Bacteriile tratate cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem de activare metabolică adecvat. Cel mai frecvent folosit sistem este
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
enzimatici. 1.6.2. Condiții experimentale 1.6.2.1. Linii de experiment Se folosesc trei linii, respectiv WP2, WP2 uvr A și WP2 uvr A pKM 101. Se folosesc metodele recunoscute de preparare și păstrare a culturilor de tulpini celulare. Se verifică cerințele de creștere și identitatea genetică a speciilor, sensibilitatea acestora la razele UV sau la mitomicina C, precum și rezistența la ampicilină a speciei WP2 uvr A pKM 101. Liniile trebuie, de asemenea, să producă revertanți spontani în intervalele
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
1.5. CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.6.1. Pregătiri 1.6.1.1. Bacterii Culturile proaspete de bacterii se incubează la 37șC până la faza exponențială tardivă sau faza staționară precoce a creșterii. Densitatea celulară aproximativă trebuie să fie 108 - 109 celule pe mililitru. 1.6.1.2. Activare metabolică Bacteriile se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem de activare metabolică adecvat. Sistemul cel mai frecvent folosit
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
puțin patru linii, TA 1535, TA 1537 sau TA 97, TA 98 și TA 100; suplimentar, se pot folosi alte linii, precum TA 1538 și TA 102. Se recomandă folosirea metodelor recunoscute de preparare și păstrare a culturilor de tulpini celulare. Se respectă cerințele de creștere și identitate genetică a liniilor, sensibilitatea lor la radiația ultravioletă și la cristal violet, rezistența la ampicilină. Liniile trebuie să producă revertanți spontani în intervalul de frecvență preconizat. 1.6.2.2. Mediu Se utilizează
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
la interpretarea rezultatelor, trebuie luate în considerare informațiile suplimentare (de exemplu, formula structurală, gradul de puritate, natura și procentul de impurități semnificative, prezența și cantitatea aditivilor și coeficientul de partiție n-octanol/apă). 1.2. DEFINIȚII ȘI UNITĂȚI DE MĂSURĂ Densitatea celulară: numărul de celule/mililitru; Creștere: creșterea densității celulare în perioada de testare; Viteza de creștere: creșterea densității celulare în unitatea de timp; CE50: în această metodă, acea concentrație a substanței de testare care determină o reducere cu 50% fie a
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
suplimentare (de exemplu, formula structurală, gradul de puritate, natura și procentul de impurități semnificative, prezența și cantitatea aditivilor și coeficientul de partiție n-octanol/apă). 1.2. DEFINIȚII ȘI UNITĂȚI DE MĂSURĂ Densitatea celulară: numărul de celule/mililitru; Creștere: creșterea densității celulare în perioada de testare; Viteza de creștere: creșterea densității celulare în unitatea de timp; CE50: în această metodă, acea concentrație a substanței de testare care determină o reducere cu 50% fie a creșterii (CEb 50), fie a vitezei de creștere
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
procentul de impurități semnificative, prezența și cantitatea aditivilor și coeficientul de partiție n-octanol/apă). 1.2. DEFINIȚII ȘI UNITĂȚI DE MĂSURĂ Densitatea celulară: numărul de celule/mililitru; Creștere: creșterea densității celulare în perioada de testare; Viteza de creștere: creșterea densității celulare în unitatea de timp; CE50: în această metodă, acea concentrație a substanței de testare care determină o reducere cu 50% fie a creșterii (CEb 50), fie a vitezei de creștere (CEr 50) în comparație cu testul martor; NOEC: (concentrația pentru care nu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
decât această concentrație. Culturile cu creștere exponențială de alge verzi selecționate sunt expuse acțiunii diverselor concentrații de substanță de testare, pe câteva generații, în condiții definite. Soluțiile de testare se incubează timp de 72 de ore, pe durata cărora densitatea celulară din fiecare soluție se măsoară cel puțin din 24 în 24 de ore. Inhibarea creșterii se determină prin comparație cu o cultură martor. 1.5. CRITERII DE CALITATE Criteriile de calitate se aplică atât testului de limită, cât și testului
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
soluție se măsoară cel puțin din 24 în 24 de ore. Inhibarea creșterii se determină prin comparație cu o cultură martor. 1.5. CRITERII DE CALITATE Criteriile de calitate se aplică atât testului de limită, cât și testului complet. Densitatea celulară din culturile martor trebuie să crească cu un factor de cel puțin 16 în decurs de 3 zile. Concentrațiile substanței de testare se mențin în limita a 80% din concentrațiile inițiale pe toată perioada testului. Pentru substanțele care se dizolvă
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
echivalent de 6000-10000 lx. ― Intensitatea luminii se poate obține folosind 4 - 7 lămpi fluorescente de 30 W de tip universal alb (temperatura culorii de aproximativ 4300 K), la o distanță de 0,35 m de cultura de alge. ― măsurătorile densității celulare se fac folosind metoda directă de numărare a celulelor vii, de exemplu, un microscop cu camere de numărare. Totuși, se pot folosi și alte procedee (fotometrie, turbidimetrie, ...) dacă sunt suficient de sensibile și dacă se demonstrează că sunt suficient de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
directă de numărare a celulelor vii, de exemplu, un microscop cu camere de numărare. Totuși, se pot folosi și alte procedee (fotometrie, turbidimetrie, ...) dacă sunt suficient de sensibile și dacă se demonstrează că sunt suficient de bine corelate cu densitatea celulară. 1.6.3. Organisme de experiență Se recomandă utilizarea de specii de alge verzi cu creștere rapidă, care prezintă avantaje pentru cultură și testare. Se preferă următoarele specii: - Selenastrum capricornutum, de exemplu, ATCC 22662 sau CCAP 278/4, - Scenedesmus subspicatus
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
pot conduce la rezultate considerabil diferite în măsurarea inhibiției creșterii; ambele trebuie în testul de stabilire a intervalului, pentru a asigura o progresie geometrică a concentrațiilor care să permită estimarea atât a valorii CEb50, cât și a valorii CEr50. Densitatea celulară inițială Se recomandă ca densitatea celulară inițială din culturile testate să fie de aproximativ 104 celule/ml pentru Selenastrum capricornutum și Scenedesmus subspicatus. Dacă se folosesc alte specii, biomasa trebuie să fie comparabilă. Concentrațiile substanței de testare Pentru testare se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
în măsurarea inhibiției creșterii; ambele trebuie în testul de stabilire a intervalului, pentru a asigura o progresie geometrică a concentrațiilor care să permită estimarea atât a valorii CEb50, cât și a valorii CEr50. Densitatea celulară inițială Se recomandă ca densitatea celulară inițială din culturile testate să fie de aproximativ 104 celule/ml pentru Selenastrum capricornutum și Scenedesmus subspicatus. Dacă se folosesc alte specii, biomasa trebuie să fie comparabilă. Concentrațiile substanței de testare Pentru testare se aleg cel puțin cinci concentrații în
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
Algele monocelulare sunt menținute în suspensie prin agitare, amestecare sau barbotare cu aer, pentru a îmbunătății schimbul de gaz și a reduce variația pH-ului în soluțiile testate. Culturile sunt menținute la o temperatură în intervalul 21 - 25șC ± 2șC. Densitatea celulară în fiecare flacon de test se determină la cel puțin 24, 48 și 72 de ore după începerea testului. Mediul de alge filtrat conținând concentrația adecvată de substanță de testare se folosește pentru a determina fundalul. Pentru măsurători de densitate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
în fiecare flacon de test se determină la cel puțin 24, 48 și 72 de ore după începerea testului. Mediul de alge filtrat conținând concentrația adecvată de substanță de testare se folosește pentru a determina fundalul. Pentru măsurători de densitate celulară, altele decât metodele de numărare directă, se utilizează un mediu de alge filtrat cu concentrația adecvată de substanță. pH-ul se măsoară la începutul testului și la 72 de ore. pH-ul testelor martor nu variază în mod normal cu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
Dacă într-un test de limită se întâlnește o descreștere minimă de 25% sau mai mult, atât a biomasei cât și a vitezei de creștere față de testul martor, trebuie să se efectueze o testare completă. 2. DATE ȘI EVALUARE Densitatea celulară măsurată în culturile tratate și culturile martor se înregistrează în tabel împreună cu concentrațiile substanței de testare și timpii de măsurare. Valoarea medie a densității celulare pentru fiecare concentrație a substanței de testare și pentru martori se tratează în funcție de timp (0
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]