1,188 matches
-
7. Analiza Pentru fiecare animal se determină proporția de eritrocite imature în raport cu numărul total de eritrocite (imature + mature) prin examinarea a cel puțin 200 de eritrocite pentru măduva osoasă și 1 000 de eritrocite pentru sângele periferic (17). Fiecare dintre lamele, inclusiv cele cu martori pozitivi și negativi, ar trebui codificată independent, înainte de analiza microscopică. Se identifică minimum 2 000 de eritrocite imature per animal pentru a determina incidența eritrocitelor imature micronucleate. Prin identificarea eritrocitelor mature pentru depistarea micronucleelor se pot
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și negativi, ar trebui codificată independent, înainte de analiza microscopică. Se identifică minimum 2 000 de eritrocite imature per animal pentru a determina incidența eritrocitelor imature micronucleate. Prin identificarea eritrocitelor mature pentru depistarea micronucleelor se pot obține informații suplimentare. La examinarea lamelelor, proporția de eritrocite imature în raport cu numărul total de eritrocite ar trebui să fie mai mare de 20% față de valoarea martorilor. Dacă animalele sunt tratate în mod continuu timp de patru săptămâni sau mai mult, se pot identifica, de asemenea, cel
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
testat (ppm) în hrană/apa de băut în doza reală (mg/kg greutate corp/zi), dacă este cazul, - detalii privind calitatea hranei și a apei, - descrierea amănunțită a modalităților de tratare și de prelevare a probelor, - metodele de preparare a lamelelor, - metodele de măsurare a toxicității, - criteriile pentru numărătoarea eritrocitelor imature micronucleate, - numărul de celule analizate per animal, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - proporția de eritrocite imature în raport cu numărul total de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
cromozomului in vivo la celule spermatogoniale, la nivelurile de expunere preconizate a genera o creștere detectabilă în raport cu fondul. Dozele de martor pozitiv ar trebui să fie alese, astfel încât să se obțină efecte clare, dar fără să releve imediat examinatorului identitatea lamelelor codificate. Pentru martorul pozitiv, se poate accepta administrarea pe o cale diferită de cea prin care se administrează substanța de testat și doar o singură prelevare a probelor. În plus, se poate avea în vedere utilizarea unor martori pozitivi din
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
astfel încât să se asigure un volum constant pentru toate dozele. 1.5.6. Prepararea cromozomilor Imediat după sacrificare, suspensiile celulare obținute de la unul sau două testicule, se expun la o soluție hipotonică și se fixează. Celulele se întind apoi pe lamele și se colorează. 1.5.7. Analiza Pentru fiecare animal ar trebui să se analizeze minimum 100 de celule în metafază, bine etalate (de ex. minimum 500 de celule în metafază pentru fiecare grupă). Dacă se observă un număr mai
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
animal ar trebui să se analizeze minimum 100 de celule în metafază, bine etalate (de ex. minimum 500 de celule în metafază pentru fiecare grupă). Dacă se observă un număr mai mare de aberații, numărul specificat se poate reduce. Toate lamelele, inclusiv cele cu celule de la martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent înainte de examinarea la microscop. Deoarece metodele de preparare a lamelelor conduc adesea la scindarea unei fracții de celule în metafază cu pierdere de cromozomi, toate
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
Dacă se observă un număr mai mare de aberații, numărul specificat se poate reduce. Toate lamelele, inclusiv cele cu celule de la martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent înainte de examinarea la microscop. Deoarece metodele de preparare a lamelelor conduc adesea la scindarea unei fracții de celule în metafază cu pierdere de cromozomi, toate celulele examinate ar trebui, prin urmare, să conțină un număr de centromeri egal cu 2n ± 2. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Se recomandă prezentarea
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
este cazul, - detalii privind calitatea hranei și a apei, - descrierea amănunțită a modalităților de tratare și de prelevare a probelor, - metodele de măsurare a toxicității, - identitatea substanței de inhibare a metafazei, concentrația acesteia și durata tratamentului, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de celule analizate per animal, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - indexul mitotic, - procentul de celule spermatogoniale în mitoză în raport cu cele din prima și a doua
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
detectabilă în raport cu fondul. Martorii pozitivi care necesită o activare metabolică ar trebui să se utilizeze în doze care provoacă un răspuns moderat (4). Dozele se pot alege astfel încât să se obțină efecte clare, dar fără să releve imediat examinatorului identitatea lamelelor codificate. În tabelul următor se prezintă exemple de substanțe care se pot utiliza ca martori pozitivi: Momentele de prelevare a probelor Substanța Nr. CAS Nr. IESCE Primele prelevări (2-4 ore) N-nitrozodimetilamină 62-75-9 200-249-8 Ultimele prelevări (12-16 ore) N-2-fluorenilacetamidă (2-AAF) 53-96-3
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
apoi într-un mediu, ce conține timidină nemarcată în exces, pentru diminuarea radioactivității neîncorporate ("cold chase"). Celulele sunt apoi spălate, fixate și uscate. Pentru perioade de incubare mai lungi, s-ar putea ca procedeul "cold chase" să nu fie necesar. Lamelele sunt imersate în soluție autoradiografică, păstrate la întuneric (de ex. refrigerate timp de 7-14 zile), developate, colorate și apoi se procedează la numărarea grăunților de argint expuși. Pentru fiecare animal se pregătesc două până la trei lamele. 1.5.8. Analiza
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
să nu fie necesar. Lamelele sunt imersate în soluție autoradiografică, păstrate la întuneric (de ex. refrigerate timp de 7-14 zile), developate, colorate și apoi se procedează la numărarea grăunților de argint expuși. Pentru fiecare animal se pregătesc două până la trei lamele. 1.5.8. Analiza Preparatele depuse pe lamele ar trebui să conțină un număr suficient de celule cu o morfologie normală, pentru a permite o evaluare semnificativă a UDS. Preparatele se examinează la microscop pentru identificarea semnelor de citotoxicitate evidentă
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
soluție autoradiografică, păstrate la întuneric (de ex. refrigerate timp de 7-14 zile), developate, colorate și apoi se procedează la numărarea grăunților de argint expuși. Pentru fiecare animal se pregătesc două până la trei lamele. 1.5.8. Analiza Preparatele depuse pe lamele ar trebui să conțină un număr suficient de celule cu o morfologie normală, pentru a permite o evaluare semnificativă a UDS. Preparatele se examinează la microscop pentru identificarea semnelor de citotoxicitate evidentă (de ex. picnoză, diminuarea nivelului de marcaj radioactiv
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
conțină un număr suficient de celule cu o morfologie normală, pentru a permite o evaluare semnificativă a UDS. Preparatele se examinează la microscop pentru identificarea semnelor de citotoxicitate evidentă (de ex. picnoză, diminuarea nivelului de marcaj radioactiv). Se recomandă codificarea lamelelor înainte de numărătoarea grăunților. În general, pentru fiecare animal se identifică 100 de celule pe minimum două lamele; numărătoarea unui număr de celule mai mic de 100 pentru fiecare animal ar trebui justificată. Numărul de grăunți nu se determină pentru nucleele
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
UDS. Preparatele se examinează la microscop pentru identificarea semnelor de citotoxicitate evidentă (de ex. picnoză, diminuarea nivelului de marcaj radioactiv). Se recomandă codificarea lamelelor înainte de numărătoarea grăunților. În general, pentru fiecare animal se identifică 100 de celule pe minimum două lamele; numărătoarea unui număr de celule mai mic de 100 pentru fiecare animal ar trebui justificată. Numărul de grăunți nu se determină pentru nucleele în fază S, dar se poate înregistra proporția de celule în faza S. Cantitatea de 3H-TdR încorporată
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și citoplasma celulelor normale din punct de vedere morfologic, puse în evidență prin depunerea de grăunți de argint, ar trebui să se determine prin metode corespunzătoare. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Ar trebui să se prezinte date pentru fiecare lamelă și pentru fiecare animal. În plus, toate datele ar trebui să se prezinte sub formă de tabel. Numărul net de grăunți nucleari (NNG) ar trebui să se calculeze pentru fiecare celulă, pentru fiecare animal și pentru fiecare doză și moment
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
dacă este cazul, - detalii privind calitatea hranei și a apei, - descrierea amănunțită a modalităților de tratare și de prelevare a probelor, - metodele de măsurare a toxicității, - metoda de preparare și de cultură a celulelor hepatice, - metoda autoradiografică utilizată, - numărul de lamele preparate și numărul de celule numărate, - criteriile de evaluare, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - valorile medii ale numărului de grăunți nucleari, grăunți citoplasmatici și numărului net de grăunți nucleari pentru fiecare lamelă, fiecare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de lamele preparate și numărul de celule numărate, - criteriile de evaluare, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - valorile medii ale numărului de grăunți nucleari, grăunți citoplasmatici și numărului net de grăunți nucleari pentru fiecare lamelă, fiecare animal și fiecare grupă, - relația doză-răspuns, dacă este posibil, - evaluarea statistică, dacă există, - semnele de toxicitate, - datele privind martorii negativi (solvent/vehicul) și pozitivi studiați în paralel, - datele anterioare privind martorii negativi (solvent/vehicul) și pozitivi, cu domeniile, valorile
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
Mikrocytos mackini 1. PREGĂTIREA ȘI EXAMINAREA EȘANTIOANELOR PENTRU MICROCITOZĂ 1.1. Examenul citologic Se taie o secțiune prin abcese, ulcerații sau pustule verzi, se îndepărtează excesul de apă prin plasarea eșantionului pe hârtie de sugativă, apoi se usucă pe o lamelă eșantionul corespunzător secțiunii care trece prin țesutul infectat. Lamelele sunt uscate la aer și apoi se fixează cu metanol (2 sau 3 minute). Lamelele se colorează cu orice colorant echivalent cu Wright - Giemsa (de exemplu Merck's Hemacolor Kit sau
jrc2692as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87846_a_88633]
-
1.1. Examenul citologic Se taie o secțiune prin abcese, ulcerații sau pustule verzi, se îndepărtează excesul de apă prin plasarea eșantionului pe hârtie de sugativă, apoi se usucă pe o lamelă eșantionul corespunzător secțiunii care trece prin țesutul infectat. Lamelele sunt uscate la aer și apoi se fixează cu metanol (2 sau 3 minute). Lamelele se colorează cu orice colorant echivalent cu Wright - Giemsa (de exemplu Merck's Hemacolor Kit sau Baxter's Diff-Quick), conform instrucțiunilor producătorului. Se scufundă lamelele
jrc2692as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87846_a_88633]
-
îndepărtează excesul de apă prin plasarea eșantionului pe hârtie de sugativă, apoi se usucă pe o lamelă eșantionul corespunzător secțiunii care trece prin țesutul infectat. Lamelele sunt uscate la aer și apoi se fixează cu metanol (2 sau 3 minute). Lamelele se colorează cu orice colorant echivalent cu Wright - Giemsa (de exemplu Merck's Hemacolor Kit sau Baxter's Diff-Quick), conform instrucțiunilor producătorului. Se scufundă lamelele în prima baie pentru 4 sau 5 secunde, apoi se scufundă imediat în a doua
jrc2692as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87846_a_88633]
-
Lamelele sunt uscate la aer și apoi se fixează cu metanol (2 sau 3 minute). Lamelele se colorează cu orice colorant echivalent cu Wright - Giemsa (de exemplu Merck's Hemacolor Kit sau Baxter's Diff-Quick), conform instrucțiunilor producătorului. Se scufundă lamelele în prima baie pentru 4 sau 5 secunde, apoi se scufundă imediat în a doua baie (3 secunde). Se clătesc apoi cu apă de la robinet, se usucă complet la aer rece sau cald și se montează în rășină sintetică (Eukitt
jrc2692as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87846_a_88633]
-
în rășină sintetică (Eukitt). Parazitul, cu un diametru de 1-3 μm, apare inclus în hemocite sau independent de celulele gazdă și are citoplasmă albastră și un nucleu roșu și mic. Este suficient un timp de observație de 5 minute per lamelă. 1.2. Examenul histologic Pentru partea histologică, se taie o secțiune prin corpul stridiei, inclusiv prin pustule, abcese și ulcerații, dacă acestea există. Apoi se introduce eșantionul într-un lichid fixativ cum ar fi Davidson, Bouin sau Carsons. Acesta din
jrc2692as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87846_a_88633]
-
IRIDOVIRUS 1.1. Examenul citologic Se taie glanda digestivă și branhiile de-a lungul planului sagital, se înlătură excesul de apă cu ajutorul unei hârtii absorbante, apoi se presează acea parte a eșantionului tăiat care trece prin organele afectate pe o lamelă de sticlă. Lamelele se usucă la aer și se fixează cu metanol (2 sau 3 minute). Lamelele se colorează cu Merck's Hemacolor Kit (cu soluție de reactiv 2 (ref. 11956) pentru colorare în roșu și cu soluție de reactiv
jrc2692as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87846_a_88633]
-
Examenul citologic Se taie glanda digestivă și branhiile de-a lungul planului sagital, se înlătură excesul de apă cu ajutorul unei hârtii absorbante, apoi se presează acea parte a eșantionului tăiat care trece prin organele afectate pe o lamelă de sticlă. Lamelele se usucă la aer și se fixează cu metanol (2 sau 3 minute). Lamelele se colorează cu Merck's Hemacolor Kit (cu soluție de reactiv 2 (ref. 11956) pentru colorare în roșu și cu soluție de reactiv 3 (ref. 11957
jrc2692as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87846_a_88633]
-
înlătură excesul de apă cu ajutorul unei hârtii absorbante, apoi se presează acea parte a eșantionului tăiat care trece prin organele afectate pe o lamelă de sticlă. Lamelele se usucă la aer și se fixează cu metanol (2 sau 3 minute). Lamelele se colorează cu Merck's Hemacolor Kit (cu soluție de reactiv 2 (ref. 11956) pentru colorare în roșu și cu soluție de reactiv 3 (ref. 11957) pentru colorare în albastru. Se scufundă lamelele în prima baie timp de 4 sau
jrc2692as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87846_a_88633]