13,026 matches
-
se prezintă sub formă de deleții și fragmente, modificări intracromozomiale și intercromozomiale. 1.3. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Culturile de celule sunt expuse la substanța de testat, atât cu, cât și fără activare metabolică. După expunerea celulelor la substanța de testat, acestea se tratează la intervale de timp prestabilite cu o substanță de inhibare a metafazei (de ex. Colcemid(r) sau colchicină), se recoltează, se colorează și celulele în metafază sunt analizate la microscop pentru detectarea aberațiilor cromozomiale. 1.4. DESCRIEREA
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
heparina), sau limfocitele separate obținute de la subiecți sănătoși se adaugă la mediul de cultură ce conține un mitogen (de ex. fitohemaglutinină) și se incubează la 37oC. 1.4.1.4. Activarea metabolică Se recomandă ca expunerea celulelor la substanța de testat să se realizeze atât în prezența, cât și în absența sistemului de activare metabolică corespunzător. Sistemul cel mai frecvent utilizat este o fracție postmitocondrială la care s-au adăugat cofactori (S9), preparată din ficat de rozătoare tratat cu agenți de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
β-naftoflavonă (10) (11) (12). Fracția postmitocondrială se utilizează, de obicei, la concentrații cuprinse între limitele 1-10% vol./ vol. în mediul experimental final. Compoziția unui sistem de activare metabolic poate să depindă de clasa din care face parte substanța chimică de testat. În unele cazuri, s-ar putea să fie convenabilă utilizarea mai multor concentrații ale fracției postmitocondriale. O serie de realizări, inclusiv crearea prin inginerie genetică a unor linii celulare care exprimă enzime activatoare specifice, poate furniza potențialul pentru o activare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
a unor linii celulare care exprimă enzime activatoare specifice, poate furniza potențialul pentru o activare endogenă. Alegerea liniilor celulare ar trebui să fie justificată din punct de vedere științific (de ex. prin importanța izoenzimei citocromului P450 pentru metabolismul substanței de testat). 1.4.1.5. Substanța de testat/prepararea Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare, care, dacă este cazul, se diluează înaintea tratamentului celulelor. Substanțele
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
potențialul pentru o activare endogenă. Alegerea liniilor celulare ar trebui să fie justificată din punct de vedere științific (de ex. prin importanța izoenzimei citocromului P450 pentru metabolismul substanței de testat). 1.4.1.5. Substanța de testat/prepararea Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare, care, dacă este cazul, se diluează înaintea tratamentului celulelor. Substanțele de testat lichide se pot adăuga direct în sistemele experimentale și
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
4.1.5. Substanța de testat/prepararea Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare, care, dacă este cazul, se diluează înaintea tratamentului celulelor. Substanțele de testat lichide se pot adăuga direct în sistemele experimentale și/sau se diluează înainte de utilizare în tratamentul celulelor. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care există date care să demonstreze stabilitatea acestora în caz de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
sau vehiculele corespunzătoare, care, dacă este cazul, se diluează înaintea tratamentului celulelor. Substanțele de testat lichide se pot adăuga direct în sistemele experimentale și/sau se diluează înainte de utilizare în tratamentul celulelor. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care există date care să demonstreze stabilitatea acestora în caz de păstrare. 1.4.2. Condițiile de testare 1.4.2.1. Solventul/vehiculul Solventul/vehiculul ar trebui să fie ales, astfel încât să nu existe suspiciunea reacției
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
se utilizeze și martori netratați, cu excepția cazului în care există date din testele anterioare care să ateste că solventul selectat nu prezintă efecte vătămătoare sau mutagene. 1.4.3. Modul de lucru 1.4.3.1. Tratamentul cu substanța de testat Celulele în stadiu de proliferare se tratează cu substanța de testat în prezența sau absența unui sistem de activare metabolică. Tratamentul limfocitelor ar trebui să înceapă la aproximativ 48 de ore de la stimularea mitogenică. 1.4.3.2. Pentru fiecare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
din testele anterioare care să ateste că solventul selectat nu prezintă efecte vătămătoare sau mutagene. 1.4.3. Modul de lucru 1.4.3.1. Tratamentul cu substanța de testat Celulele în stadiu de proliferare se tratează cu substanța de testat în prezența sau absența unui sistem de activare metabolică. Tratamentul limfocitelor ar trebui să înceapă la aproximativ 48 de ore de la stimularea mitogenică. 1.4.3.2. Pentru fiecare concentrație ar trebui să se realizeze în mod normal teste pe
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
negativ/solvent. Dacă datele testelor anterioare pot să dovedească existența unor diferențe minime între culturile duble (13) (14), se poate preconiza utilizarea unor culturi unice pentru fiecare concentrație testată. Substanțele în stare gazoasă sau cele volatile ar trebui să fie testate prin metode corespunzătoare, de exemplu în vase de cultură închise ermetic (15) (16). 1.4.3.3. Momentul recoltării culturilor În primul experiment, expunerea celulelor la substanța de încercat ar trebui să se realizeze atât în prezența, cât și în
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
mitotice și să producă aberații ale numărului de cromozomi. O creștere a numărului de celule cu cromozomi endoreduplicați poate să indice faptul că substanța de testat poate inhiba avansarea ciclului celular (17) (18). Dacă rezultatele obținute pentru o substanță de testat nu îndeplinesc criteriile menționate anterior, se consideră că substanța respectivă nu este mutagenă în sistemul respectiv. Deși majoritatea experimentelor vor da în mod clar rezultate pozitive sau negative, în rare cazuri datele stabilite vor exclude posibilitatea unei concluzii definitive cu privire la
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
menționate anterior, se consideră că substanța respectivă nu este mutagenă în sistemul respectiv. Deși majoritatea experimentelor vor da în mod clar rezultate pozitive sau negative, în rare cazuri datele stabilite vor exclude posibilitatea unei concluzii definitive cu privire la activitatea substanței de testat. Rezultatele pot să rămână nesigure sau discutabile independent de numărul de repetări ale testului. Rezultatele pozitive ale unui test in vitro de aberație cromozomială indică faptul că substanța de testat provoacă aberații cromozomiale ale structurii în celulele somatice de mamifere
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
vor exclude posibilitatea unei concluzii definitive cu privire la activitatea substanței de testat. Rezultatele pot să rămână nesigure sau discutabile independent de numărul de repetări ale testului. Rezultatele pozitive ale unui test in vitro de aberație cromozomială indică faptul că substanța de testat provoacă aberații cromozomiale ale structurii în celulele somatice de mamifere, în cultură. Rezultatele negative indică faptul că, în condițiile experimentale, substanța de testat nu provoacă aberații cromozomiale în celulele somatice de mamifere, în cultură. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ale testului. Rezultatele pozitive ale unui test in vitro de aberație cromozomială indică faptul că substanța de testat provoacă aberații cromozomiale ale structurii în celulele somatice de mamifere, în cultură. Rezultatele negative indică faptul că, în condițiile experimentale, substanța de testat nu provoacă aberații cromozomiale în celulele somatice de mamifere, în cultură. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Celulele
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
faptul că, în condițiile experimentale, substanța de testat nu provoacă aberații cromozomiale în celulele somatice de mamifere, în cultură. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Celulele: - tipul și sursa celulelor, - caracteristicile cariotipului și motivul alegerii celulelor utilizate, - absența micoplasmei, dacă este cazul, - date privind durata ciclului celular, - sexul donatorilor de sânge, sângele complet sau limfocite izolate, mitogenul utilizat, - numărul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
inhibare a metafazei, concentrațiile acesteia și timpul de expunere a celulelor, - justificarea alegerii concentrațiilor și numărului de culturi, inclusiv datele de citotoxicitate și limitele de solubilitate, dacă sunt disponibile, - compoziția mediului, concentrația de CO2, dacă este cazul, - concentrația substanței de testat, - volumul vehiculului și al substanței de testat adăugate, - temperatura de incubare, - timpul de incubare, - durata tratamentului, - densitatea celulară la însămânțare, dacă este cazul, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - martorii pozitivi și negativi, - metodele de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de expunere a celulelor, - justificarea alegerii concentrațiilor și numărului de culturi, inclusiv datele de citotoxicitate și limitele de solubilitate, dacă sunt disponibile, - compoziția mediului, concentrația de CO2, dacă este cazul, - concentrația substanței de testat, - volumul vehiculului și al substanței de testat adăugate, - temperatura de incubare, - timpul de incubare, - durata tratamentului, - densitatea celulară la însămânțare, dacă este cazul, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - martorii pozitivi și negativi, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
directoare OCDE TG 475, Testul in vivo de aberație cromozomială pe măduvă osoasă de mamifere (1997). 1.1. INTRODUCERE Testul in vivo de aberație cromozomială pe măduva osoasă de mamifere se utilizează la detectarea aberațiilor cromozomiale provocate de substanța de testat în structura celulelor din măduva osoasă a mamiferelor, de obicei, rozătoare (1) (2) (3) (4). Aberațiile structurale pot să fie de două tipuri, cromozomiale sau cromatidice. O poliploidie crescută poate să indice că un produs chimic poate să provoace aberații
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
a ADN-ului, deși aceștia pot să varieze între specii și între țesuturi. Un test in vivo este, de asemenea, util pentru studierea suplimentară a unui efect mutagen detectat printr-un test in vitro. Dacă există dovezi că substanța de testat sau un metabolit reactiv nu ating țesutul-țintă, utilizarea prezentului test nu potrivită. A se vedea și introducerea generală din partea B. 1.2. DEFINIȚII Aberație de tip cromatidic: o leziune structurală a cromozomului, care se traduce prin divizarea cromatidelor singure sau
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
structurii cromozomilor, detectabilă la examinarea microscopică a celulelor în stadiul de metafază al diviziunii acestora, care se prezintă sub formă de deleții și fragmente, modificări intracromozomiale și intercromozomiale. 1.3. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Animalele se expun la substanța de testat printr-o cale de expunere corespunzătoare și se sacrifică în momente corespunzătoare după tratament. Înainte de sacrificare, animalele se supun tratamentului cu un agent de inhibare a metafazei (de exemplu colchicină sau Colcemid(r)). Apoi, din celulele de măduvă osoasă se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
să se aranjeze astfel încât posibilele efecte datorate amplasării acestora să fie reduse la minim. Animalele sunt identificate individual. Se procedează la aclimatizarea animalelor la condițiile de laborator timp de minimum cinci zile. 1.4.1.4. Prepararea dozelor Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se pot administra direct sau
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
1.4. Prepararea dozelor Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se pot administra direct sau dilua înainte de administrare. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care există date care să demonstreze stabilitatea acestora în caz de păstrare. 1.4.2. Condițiile de testare 1
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se pot administra direct sau dilua înainte de administrare. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care există date care să demonstreze stabilitatea acestora în caz de păstrare. 1.4.2. Condițiile de testare 1.4.2.1. Solventul/vehiculul Solventul/vehiculul nu ar trebui să producă efecte toxice la dozele utilizate și
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de păstrare. 1.4.2. Condițiile de testare 1.4.2.1. Solventul/vehiculul Solventul/vehiculul nu ar trebui să producă efecte toxice la dozele utilizate și nu ar trebui să existe suspiciunea reacției chimice a acestuia cu substanța de testat. Utilizarea altor solvenți/vehicule decât cele recunoscute ar trebui să fie justificată cu date care să demonstreze compatibilitatea acestora. Se recomandă ca, ori de câte ori este posibil, să se prefere utilizarea unui solvent/vehicul apos. 1.4.2.2. Martorii Pentru fiecare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
posibil, să se prefere utilizarea unui solvent/vehicul apos. 1.4.2.2. Martorii Pentru fiecare sex și pentru fiecare test ar trebui să se prevadă martori pozitivi și negativi (solvenți/vehicule), utilizați în paralel. Cu excepția tratamentului cu substanța de testat, manipularea animalelor din grupele martor ar trebui să fie identică cu cea a animalelor din grupele tratate. Martorii pozitivi ar trebui să producă aberații cromozomiale de structură in vivo la nivelurile de expunere preconizate a genera o creștere detectabilă în raport cu
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]